Антифосфолипидный синдром - часть 53

вать связывание 

β

2

27

, а также удалять КЛ со дна лунок при

отмывках

28

.

Одной из наиболее сложных проблем лабораторной диагностики

АФС является недостаточно высокая специфичность аКЛ, что в ряде

случаев может приводить к ложноположительной диагностике АФС.

Улучшение диагностики АФС связано с необходимостью определения

а

β

2

АФС. 

При внесении очищенных антител больных в тест

муноферментного анализа аКЛ без добавления фетальной сыворотки

было показано, что 

β

2

специфического связывания "аутоиммунных" аКЛ, ассоциирующих

ся с АФС, подавляя связывающую активность "инфекционных"

аКЛ

29, 30

. Содержание 

β

2

вующее оптимальному связыванию аКЛ, составляет 8 мкг/мл и бо

лее; при концентрации 

β

2

ность аКЛ падает до нуля

31

. В сыворотке человека 

β

2

вует в концентрации около 200 мкг/мл, в то время как в бычьей сыво

ротке его уровень  в 2—3 раза выше

32

. Большинство, но не все субти

пы аКЛ человека связываются с бычьим 

β

2

33, 34

. Количеству аКЛ

в тестируемой сыворотке, разведенной 1:100 в 10% растворе феталь

ной сыворотки, соответствует адекватный для оптимального связы

вания уровень 

β

2

раствора без добавления фетальной сыворотки, содержащей экзоген

ный 

β

2

тивности аКЛ

32

.

Поскольку в препаратах бычьего кардиолипина и фетальной сыворот

ки, использующихся при определении аКЛ, содержится 

β

2

ют, что с помощью стандартного ИФМ можно выявлять как а

β

2

так и антитела, реагирующие собственно с кардиолипином. Другой под

ход к определению а

β

2

ного на твердой фазе аффинно

β

2

34

. Поскольку 

а

β

2

ма высокая плотность иммобилизации 

β

2

36

, кото

217

ГЛАВА 8. Клиническое значение антифосфолипидных антител

рая способствует экспрессии "скрытого" эпитопа в молекуле 

β

2

34

.

Это достигается при использовании "высокосвязывающих" полистиро

ловых микроплат, подвергнутых рентгеновскому облучению. Преимуще

ство метода определения а

β

2

до конца не ясно. Полагают, что первый обладает более высокой специ

фичностью, а второй — чувствительностью

2

. Действительно, стандарт

ный метод определения аКЛ может давать "ложноположительные" ре

зультаты за счет выявления "непатогенных", реагирующих только с кар

диолипином антител, а частота обнаружения "патогенных" 

β

2

симых аКЛ может существенно варьировать в зависимости от содержа

ния 

β

2

твердой фазе. Однако определение а

β

2

ными методическими проблемами. Во

на международном уровне; во

трудно поддающихся контролю факторов, в том числе способ выделения
β

2

ва твердой фазы и др. 

В ряде случаев коммерческие препараты 

β

2

ся частичному расщеплению на уровне фрагмента Lys

317

318

, нахо

дящегося рядом с фосфолипидсвязывающим сайтом Cys

281

288

V домена, что приводит к существенной потере функциональной ак

тивности 

β

2

37

. Наряду с этим обнаружена способность плазмина

и фактора Ха расщеплять данный фосфолипидсвязывающий участок 
β

2

38

. Хотя а

β

2

ми антителами, которые проявляют функциональную активность при

условии бивалентного связывания и высокой плотности антигена,

иммобилизированного на поверхности облученных микроплат, име

ется небольшое количество высокоаффинных антител, взаимодейст

вующих с человеческим или бычьим 

β

2

необработанных микроплатах

39

. По данным R.A.S. Roubey и соавт.

36

,

связывающая активность а

β

2

трации 

β

2

40

и

R.R. Forastiero и соавт.

41

использовали концентрацию 

β

2

выше. По мнению T. Koike и E. Matsuura

42

, высокоаффинные мыши

Насонов Е.Л. Антифосфолипидный синдром

218

ные моноклональные антитела одинаково эффективно связываются с
β

2

ченных микроплат, а а

β

2

β

2

покрывающим лунки необработанных микроплат. Для эффективного

связывания с антителами важное значение имеют распределение и

плотность 

β

2

расстояние и корректную пространственную ориентировку каждого

его эпитопа относительно молекул а

β

2

ция 

β

2

нальных а

β

2

β

2

не реагируют с нативным и димеризованным 

β

2

35, 43

. С другой

стороны, нельзя исключить экспрессию ранее скрытых эпитопов 
β

2

связыванием с а

β

2

42

. 

Результаты иммуноферментного анализа а

β

2

вать в зависимости от типа буферного раствора, применяемого для на

несения антигена на поверхность микроплат. При разведении 

β

2

карбонатным буфером наблюдается более высокая чувствительность

определения а

β

2

44

. Выявле

ние низкого и неспецифического связывания а

β

2

агированием антител больных АФС не только с ФЛ и 

β

2

широким спектром белков (протромбин, аннексин V, белок С, белок S),

которые могут присутствовать в тестируемых сыворотках и связываться

с незаблокированными участками на дне лунок. Однако в целом данная

проблема имеет большее значение для иммуноферментного анализа

аКЛ, при котором указанные сывороточные факторы могут содержать

ся как в исследуемых сыворотках, так и в фетальной бычьей сыворотке.

Наряду с этим связывающая активность а

β

2

ва и продолжительности отмывок, так как каждый цикл отмывки может

приводить к кумулятивному снижению числа связавшихся низкоаф

финных а

β

2

деления а

β

2

Популяционные исследования предсказательной ценности положи

тельных результатов иммуноферментного анализа аКЛ и а

β

2

219

ГЛАВА 8. Клиническое значение антифосфолипидных антител

диагностики АФС показали, что аКЛ в целом имеют низкую чувстви

тельность и специфичность, а а

β

2

высокую специфичность относительно вероятности возникновения

тромбозов при АФС

1

. 

Таким образом, лабораторная диагностика АФС должна основываться

на определении аФЛ в сыворотке крови с обязательным использованием

комплекса методов, включая иммуноферментный анализ аКЛ, исследова

ние ВА с помощью коагулологических тестов и иммуноферментный анализ

а

β

2

вень которого может варьировать из

вимости результатов и различий в используемых тест

больных АФС связи между повышением уровня аКЛ и увеличением риска

развития тромбозов не исключает значения низкопозитивных, ложнополо

жительных результатов тестирования аКЛ как потенциальных тромбоген

ных факторов при атеросклерозе и других заболеваниях, не связанных с

АФС. Предсказательная ценность положительных результатов исследова

ния а

β

2

для широкого использования а

β

2

диагностики АФС необходима дальнейшая стандартизация ИФМ опреде

ления данного показателя на международном уровне. Общепринятым ла

бораторным методом диагностики АФС по

ный ИФМ, выявляющий 

β

2

ГП

аКЛ класса IgA

Поскольку данные, касающиеся клинического значения IgA аКЛ

при АФС, противоречивы, а метод не стандартизован

45

, определение

IgA аКЛ не рекомендуют использовать для диагностики АФС. Увели

чение концентрации IgA может вести к ложноположительным резуль

татам при определении IgA аКЛ

48

. В целом IgA аКЛ, как и аКЛ других

изотипов, связываются с кардиолипином при участии 

β

2

49

. Хотя

при наличии в крови IgA аКЛ обычно определяются и IgM аКЛ, и IgG,

иногда возможно изолированное выявление IgA аКЛ

14, 50

. Частота об

наружения IgA аКЛ при СКВ колеблется от 1 до 44%, а при первичном

АФС — от 20 до 30%. 

Насонов Е.Л. Антифосфолипидный синдром

220