Антифосфолипидный синдром - часть 52

Результаты анализа преобразованных данных целесообразно приме

нять в диапазоне нормальных концентраций аКЛ у здоровых лиц, одна

ко трудно интерпретировать при выявлении аКЛ

зультатов у пациентов с "вероятным" АФС. Так, среди 500 больных СКВ

из 53,2% случаев с положительными результатами определения аКЛ, ти

тры которых превышали нормальный средний уровень на 2 SD, у 30%

больных отсутствовали клинические признаки АФС

13

. При этом, несмо

тря на корреляцию высоких титров аКЛ со степенью выраженности кли

нических проявлений АФС, обнаружение аКЛ в любых титрах не всегда

связано с данным симптомокомплексом. 

Согласно международным рекомендациям, при интерпретации ре

зультатов следует использовать не абсолютные значения уровня аКЛ в

GPL/MPL, а уровень позитивности (таблица 8.2).

Таблица 8.2. Границы степеней позитивности при оценке результатов 
определения аКЛ

Степень позитивности

Изотип аКЛ

IgG аКЛ (в GPL)

IgM аКЛ (в MPL)

Высокопозитивные

Более 65

Более 45

Умеренно позитивные

30—65

35—45

Низкопозитивные

23—30

26—35

Негативные

Менее 23

Менее 26

Другой подход к анализу диагностической точности ИФМ определе

ния аФЛ связан с построением графика характеристических кривых

(ROC

ционных характеристик теста (чувствительность, специфичность, про

гностическая ценность положительных и отрицательных результатов).

При построении графика по оси абсцисс откладывают частоту ложнопо

ложительных результатов (1

стоту истинно положительных результатов (чувствительность, %)

14

.

Значения чувствительности и соответствующие им доли ложноположи

тельных результатов определения аФЛ, рассчитанные по всему диапазо

ну точек разделения между нормой и патологией, наносятся на плос

213

ГЛАВА 8. Клиническое значение антифосфолипидных антител

кость и соединяются сплошной линией. Точка, наиболее близкая к пере

гибу графика, рассматривается как оптимальное соотношение чувстви

тельности и специфичности. Выбор точки разделения делается с учетом

соотношения ложноположительных и ложноотрицательных результатов.

В ряде случаев вычисляется коэффициент вероятности, т.е. соотношение

между вероятностью наличия АФС до и после получения результатов те

стирования аФЛ, который может определяться как для значений аФЛ,

стратифицированных по высоким, средним, низким и нормальным тит

рам, так и для отдельных точек разделения ''cutoff '' (по формуле чувстви

тельность/1

1, 14

. Однако большинством авторов исследу

ется прогностическая ценность результатов определения аФЛ, в значи

тельной мере зависящая от распространенности АФС в популяции. J.

Wasmuth и соавт.

15

применяли анализ ROC

зрением на АФС при изучении диагностической точности 23 коммерчес

ких тест—систем для определения аКЛ и а

β

2

ность большинства методов определения аКЛ и а

β

2

IgM возрастала по мере увеличения числа клинических критериев, ис

пользовавшихся для постановки диагноза АФС. В том случае когда диа

гноз АФС базировался на двух или трех клинических признаках, типич

ных для АФС, чувствительность тестирования аКЛ и а

β

2

ла не более 67%, площадь под ROC

от 0,60 до 0,72. Наиболее высокая диагностическая точность тест

для иммуноферментного анализа аКЛ и а

β

2

пользовании четырех и более клинических критериев АФС (чувствитель

ность — до 100%, площадь под кривой — более 0,8), что связано с умень

шением числа ложноотрицательных результатов. По данным J.M. Musial

и соавт.

16

, анализ характеристических кривых позволяет установить оп

тимальные критериальные значения аФЛ, связанные с основными кли

ническими симптомами АФС. При исследовании клинического значе

ния аФЛ у 204 больных АФС положительные результаты тестирования

ВА ассоциировались с высоким риском развития тромбозов (OР: 3,04;

1,5—6,2; доверительный интервал — ДИ — 95%) и рецидивирующих по

терь плода (OР: 8,7; 2,8—26,7; ДИ — 95%). Анализ ROC кривых показал,

что для прогнозирования тромбозов наиболее точным тестом является

Насонов Е.Л. Антифосфолипидный синдром

214

исследование IgG аКЛ ("cutoff">17,2 GPL; OР: 3,69; 1,8—7,4; ДИ — 95%);

рецидивирующих потерь плода — IgG аФИ (фосфатидилинозитол) ("cut

off">22,1 ед.; OR: 6,21; 2,1—18,5; ДИ — 95%), IgG aКЛ и IgG а

β

2

тромбоцитопении — IgM аФИ ("cutoff">6,7 ед.; OР: 1,9; 1,04—3,4; ДИ —

95%). При этом у 6,6% больных с клиническими признаками АФС и не

гативными результатами тестирования на ВА и аКЛ обнаружены другие

субтипы аФЛ, главным образом IgM аФИ. 

В настоящее время предложено большое количество "home made" ме

тодик и коммерческих тест

аКЛ. Несмотря на стандартизацию основных методических аспектов

ИФМ определения аКЛ, полученные результаты нередко имеют проти

воречивый характер. Так, по данным многоцентрового исследования, ча

стота обнаружения аКЛ в популяции при использовании 9 различных

коммерческих тест

до 50% для IgM аКЛ. При этом наклон графика линейной регрессионной

зависимости результатов измерения концентрации аКЛ в единицах GPL

и MPL с помощью стандартов, предоставленных Antiphospholipid

Standartisation Laboratory, и калибраторов тест

0,93 для IgG аКЛ и 0,236—0,836 для IgM аКЛ

17

. Имеются также данные о

более высокой вариабельности операционных характеристик шести ком

мерческих и одной “home made” тест

аКЛ по сравнению с пятью коммерческими тест

IgM а

β

2

18

. Хорошая воспроизводимость результатов в значительной

степени зависит от четкого выполнения ряда рекомендаций, разработан

ных для иммуноферментного анализа аКЛ. Перед внесением в лунки по

листироловых микроплат КЛ растворяют в этаноле либо в смеси этанола

и хлороформа. Для иммобилизации КЛ на твердой фазе лунки планшета

высушивают в вакууме либо в течение 18 часов при 4°С. Предотвращение

липидного окисления с помощью азота на данном этапе является спор

ным вопросом, так как окисление КЛ в целом способствует увеличению

его отрицательного заряда и связывающей активности. 

Интенсивно изучалась возможность использования в тест

для иммуноферментного анализа аФЛ, помимо КЛ, других ФЛ, включая

ФИ, ФС, ФЭ, ФХ и различные смеси ФЛ

19

. Полагают, что обнаружение

215

ГЛАВА 8. Клиническое значение антифосфолипидных антител

различных субтипов аФЛ при АФС в основном определяется степенью

их связывания с 

β

2

с отдельными ФЛ, за исключением реагирования антител с ФЭ

20

. E.N.

Harris и S.S. Pierangeli

21

предложили определять антитела к смеси ФЛ с

помощью разработанной ими тест

стики "сомнительного" АФС у больных с отрицательными результатами

тестирования аКЛ и ВА или с низкими титрами аКЛ. В то же время чув

ствительность и специфичность данного метода не нашла подтвержде

ния в работе H.M. Day и соавт.

22

. 

Блокирование участков неспецифического связывания обычно про

водится с помощью 10% раствора фетальной телячьей или бычьей сы

воротки в фосфатно

2

КЛ и частично — со свободными участками на поверхности микроплат.

Следует подчеркнуть, что любые методические различия, касающиеся

концентрации бычьей сыворотки, разведения и объема проб в лунке,

свойств КЛ (окисление, степень очистки) могут приводить к измене

нию связывающей активности 

β

2

При измерении соотношения 

β

2

β

2

мых субфракций аКЛ до и после внесения в тест

2

роточного альбумина или желатина

23

. Тестируемые сыворотки разво

дятся блокирующим буферным раствором, содержащим не только 

β

2

ГП

дуемых сывороток может присутствовать и собственный 

β

2

века. В связи с этим при определении аКЛ в сыворотке крови рекомен

дуется вычитать ОП лунки без КЛ из ОП лунки с КЛ. При определении

аКЛ с помощью ИФМ не рекомендуется предварительное прогревание

сывороток, приводящее к конвертации аКЛ

аКЛ

24, 25

. Несмотря на

предположение, согласно которому использование в тест

иммуноферментного анализа аКЛ 0,05% буферного раствора детерген

та Tween 20 позволяет отличить 

β

2

β

2

симых аКЛ

26

, имеются данные, что Tween 20 может полностью блокиро

Насонов Е.Л. Антифосфолипидный синдром

216