содержание .. 6 7 8 9 ..

Курс лекций по общей хирургии - часть 8

гемотрансфузией необходимо:

1) определить группу крови больного и донора;

2) определить резус-принадлежность крови больного и

донора;

3) выполнить пробы на групповую и резусную совмес-

тимость крови больного и донора.

ОПРЕДЕЛЕНИЕ ГРУППЫ КРОВИ

Определение группы крови по системе АВ0 заключает-

ся в выявлении антигенов (агглютиногенов) А и В, находя-

щихся в эритроцитах, стандартными антителами. В качестве

последних в настоящее время используются цоликлоны ан-

ти-А и анти-В.

Моноклональные анти-А и анти-В антитела продуцируются дву-

мя мышиными гибридомами и принадлежат к иммуноглобулинам клас-

са М. Цоликлоны анти-А и анти-В представляют собой разведенную ас-

цитную жидкость мышей-носителей соответствующей гибридомы, в

которой содержатся специфические иммуноглобулины, направленные

против группоспецифических антигенов А и В человека. Цоликлоны не

содержат антител иной специфичности и поэтому не вызывают неспе-

цифической полиагглютинации эритроцитов человека.

Цоликлоны анти-А и анти-В в жидкой форме выпус-

каются во флаконах или в ампулах и имеют соответствую-

щую окраску: анти-А - розовую, анти-В - синюю. В каждой

ампуле содержится от 20 до 200 доз. Срок хранения цоли-

клонов 2 года при температуре от +2 до +8° С.

Реакция агглютинации и ее выраженность при соеди-

нении антигенов А и В с цоликлонами анти-А и анти-В на-

ступает очень быстро.

Для того чтобы определить группу крови больного (или

донора), необходимо иметь: 1) цоликлоны анти-А и анти-В;

2) белую тарелку или специальную плоскость; 3) стеклянные

палочки или предметные стекла; 4) спирт; 5) настойку йода;

6) иглу Франка; 7) карандаш «Стеклограф» (рис.19).

Готовя набор для определения группы крови, необхо-

димо обратить внимание на следующие моменты. Прежде

всего надо проверить срок годности используемых цоликло-

нов и установить их серию. Цоликлоны, срок годности кото-

рых истек, и не имеющие серийной принадлежности для оп-

ределения группы крови использоваться не должны.

Рис. 19. Набор для определения группы крови:

1 - цоликлоны анти-А и анти-В; 2 - индивидуальные пипетки для забо-

ра цоликлонов; 3 - плоскость для смешивания эритроцитов крови с цоли-

клонами; 4 - игла Франка; 5 - палочки для смешивания крови с цоликлоном

Для каждого цоликлона необходимо иметь индивиду-

альную пипетку, которая должна находиться в пузырьке, со-

держащем дистиллированную воду или физиологический

раствор. Пипетки и пузыречки должны быть промаркирова-

ны буквами А и В соответственно применяемым цоликло-

нам. Это позволит избежать ошибки при определении груп-

пы крови, связанной со смешиванием цоликлонов.

Плоскость, на которой будет производиться смешива-

ние эритроцитов исследуемой крови с цоликлонами, должна

быть тщательно вымыта, высушена и также промаркирована.

Это позволит избежать ошибки при определении группы

крови.

Помещение, где проводится определение группы крови,

должно иметь хорошее освещение и температуру от +15 до

+25° С.

Техника определения группы крови сводится к сле-

дующему.

В каждую часть тарелки наносят по одной большой ка-

пле (0,1 мл) цоликлона анти-А и анти-В (соответственно

маркировке частей тарелки). Рядом с каплями цоликлонов

помещают каплю исследуемой крови (кровь берут из пальца

после прокола кожи или из ампулы) (рис.20). Капля крови по

объему должна быть в 10 раз меньше капли цоликлона. С

помощью чистой и сухой стеклянной палочки или уголка

предметного стекла смешивают каплю крови с каплей цоли-

клона и наблюдают за ходом реакции в течение 2-2,5 мин.

Рис. 20. Техника определения группы крови

Результат реакции в каждой капле может быть положи-

тельным или отрицательным. Положительный результат вы-

ражается агглютинацией (склеиванием) эритроцитов, содер-

жащих соответствующий агглютиноген (А или В), с антите-

лом определенного цоликлона (анти-А или анти-В). Группа

исследуемой крови будет соответствовать полученному ре-

зультату в каждой капле цоликлона (рис. 21).

Если реакция агглютинации произошла с обоими цоли-

клонами (исследуемая кровь принадлежит IV группе), необ-

ходимо провести контрольное исследование данной крови с

изотоническим раствором поваренной соли. Для этого боль-

шую каплю (0,1 мл) изотонического раствора поваренной

соли смешивают с маленькой каплей крови. Отсутствие при

этом реакции агглютинации подтверждает, что исследуемая

кровь относится к IV группе. При наличии во время контроля

спонтанной агглютинации надо провести определение груп-

пы исследуемой крови по стандартным сывороткам, содер-

жащим известный набор α- и β-агглютининов.

Рис. 21. Оценка результатов определения группы

крови с помощью цоликлонов анти-А и анти-В

В составе цоликлонов отсутствуют высокомолекуляр-

ные добавки, способные вызывать неспецифическую поли-

агглютинацию эритроцитов. Поэтому нет необходимости

проводить контроль с растворителем.

Результаты манипуляции по определению группы кро-

ви оформляются протоколом определения группы крови

(рис.22). Данный протокол вклеивается в историю болезни

больного и является документом, позволяющим в дальней-

шем выявить причину ошибочного определения групповой

принадлежности исследуемой крови.

Определить группу крови человека можно и с помощью стандарт-

ных изогемагглютинирующих сывороток крови 0(I), А(II) и В(III) групп,

в которых соответственно групповой принадлежности крови находятся

Ф.И.О. больного_________________

Отделение _______________ Палата № ______

ПРОТОКОЛ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ГРУППЫ КРОВИ

Число, месяц, год ________________________

С помощью цоликлона анти-А (серия ______) годен до ____

и цоликлона анти-В (серия ______) годен до ____

Определена группа крови больного.

С цоликлоном анти-А агглютинация (есть, нет)

С цоликлоном анти-В агглютинация (есть, нет)

Группа крови больного:

0 (I)

А (II)

В (III)

АВ (IV)

Дата

Подпись врача

Рис. 22. Бланк протокола определения группы крови

специфические антитела - α,β(I), β(II), α(III).

При смешивании эритроцитов крови больного со стандартными

сыворотками двух серий следят за появлением реакции агглютинации

этих эритроцитов. Если во всех сыворотках реакции агглютинации эрит-

роцитов нет, это значит, что агглютиногенов в эритроцитах нет и кровь

принадлежит к 0(I) группе. Если эритроциты агглютинируются агглюти-

нинами всех сывороток, это означает, в них есть А и В агглютиногены и

кровь принадлежит AB(IV) группе. При наличии реакции агглютинации

в сыворотках, содержащих только α-агглютинины, - группа крови А(II), а

содержащих только β-агглютинины, - группа крови В(III).

В качестве реагента могут быть использованы и стандартные (из-

вестные) эритроциты, содержащие А и В агглютиногены (IV группа кро-

ви), А агглютиноген (II группа крови), В агглютиноген (III группа крови)

и не содержащие агглютиногенов (I группа крови). В этом случае для

определения групповой принадлежности крови используется ее сыворот-

ка.

Определение резус-фактора крови

Определить наличие в эритроцитах крови Rh-антигена

можно с помощью специального цоликлона анти-D супер.

Для этого на тарелку наносят каплю (около 0,1 мл) цоликло-

на анти-D, в которую помещают маленькую каплю (0,02-0,03

мл) исследуемых эритроцитов. Смесь тщательно перемеши-

вают. Если в эритроцитах есть Rh-антиген, то при смешива-

нии их с цоликлоном анти-D возникнет реакция агглютина-

ции. Такая кровь маркируется как резус-положи-тельная.

При отсутствии реакции агглютинации кровь считается ре-

зус-отрицательной.

Для определения резус-фактора крови могут быть использованы

специальные антирезусные сыворотки. Стандартные сыворотки антире-

зус готовятся из крови резус-отрицательных людей, сенсибилизирован-

ных резус-фактором (в сыворотке крови этих больных имеется rh-анти-

тело).

Методика определения резус-фактора сводится к следующему:

2-3 мл исследуемой крови без стабилизатора помещают в сухую пробир-

ку. Спустя некоторое время на дне пробирки образуется сгусток крови

(взвесь эритроцитов). Пипеткой берут 5-10% этой взвеси и наносят на

чашку Петри, куда предварительно накапано по большой капле специ-

ально приготовленной антирезусной сыворотки (резус-положительная

сыворотка) крови AB(IV) группы двух серий. Эта сыворотка содержит

резус-антитело (rh-агглютинин) и не имеет групповых агглютининов (α,

β), поэтому ее можно применять для выявления резус-антигена в эритро-

цитах всех групп крови.

Кроме этого, для контроля на чашку Петри помещают большую

каплю контрольной сыворотки крови, не содержащую rh-антитела (резус-

отрицательную), но соответствующую группе крови больного, также

двух серий.

Взвесь исследуемых эритроцитов смешивается с антирезусными и

контрольными сыворотками, и чашка Петри на 7-10 мин. помещается на

водяную баню (45° С). Результат исследования определяют при просмат-

ривании чашки Петри на белом фоне. Если эритроциты исследуемой

крови агглютинируются обеими сериями антирезусной сыворотки, а в

контрольной резус-отрицательной сыворотке реакции агглютинации

эритроцитов нет, то исследуемая кровь резус-положительная (в ее эрит-

роцитах содержится резус-антиген) (рис. 23).

Рис. 23. Определение Rh-фактора крови

(исследуемая кровь резус-положительная)

Определение резус-принадлежности крови с помощью

цоликлонов анти-D обычно выполняется в экстренных си-

туациях. Для планового определения резус-принадлежности

крови она направляется в гематологическую лабораторию,

где с целью обнаружения в эритроцитах резус-фактора ис-

пользуют стандартные антирезусные сыворотки. При на-

правлении крови в гематологическую лабораторию врач за-

полняет специальный бланк (рис. 24).

Поскольку в эритроцитах исследуемой крови больного

может отсутствовать Rh-антиген (кровь больного резус-отри-

Наименование направляющего учреждения ______________________

ИССЛЕДОВАНИЕ КРОВИ

на наличие резус-фактора и резус-антител

1. Фамилия, имя, отчество и адрес исследуемого__________________

___________________________________________________________

2. Возраст _______________

3. Группа крови ______________________

4. Диагноз __________________________________________________

5. Имел ли раньше реципиент переливания крови (указать даты и как

они протекали)

__________________________________________________

6. Сколько в анамнезе беременностей ___________________________

7. Рождались ли у реципиента дети с гемолитической болезнью (тя-

желая желтуха, врожденный универсальный отек и проч.) _____________

8. Имелись ли повторные выкидыши и мертворожденные дети _____

Дата ____________ Подпись лечащего врача ____________________

РЕЗУС-ЛАБОРАТОРИЯ

Анализ № _______

Результат исследования

Кровь больной (ого) __________________________________________

Резус-антитела в крови _______________________________________

Титр резус-антител __________________________________________

Дата _____________ Подпись врача-лаборанта

Рис. 24. Бланк направления крови для определения Rh-фактора

цательная), но он мог быть сенсибилизирован Rh-антигеном

при переливании ему резус-положительной крови (беремен-

ная женщина могла быть сенсибилизирована Rh-антигеном

плода) и в плазме его крови могут находиться rh-антитела,

при заполнении этого бланка особое внимание уделяется ге-

мотрансфузионному и сенсибилизационному анамнезу (ана-

мнез гемотрансфузий и анамнез протекающих беременно-

стей).

Если окажется, что кровь резус-отрицательная, то будет

произведено исследование ее на наличие антител и опреде-

лен их титр.

В гематологической лаборатории определение резус-

фактора крови проводится с помощью цоликлонов анти-D в

желатиновой среде. Для этого в 2 пробирки помещают

взвесь (0,02-0,03 мл) эритроцитов исследуемой крови и 2 ка-

пли (0,1 мл) 10% желатина. Затем в одну пробирку вносят

2 капли (0,1 мл) цоликлона анти-D, в другую (контрольную) -

2 капли (0,1 мл) физиологического раствора. Содержимое

обеих пробирок встряхивают и помещают на 15 мин. в водя-

ную баню или термостат при температуре +46 - 480С. По ис-

течении указанного времени в обе пробирки добавляют 5-8 мл

физиологического раствора и перемешивают их содержимое

путем двукратного переворачивания пробирок.

Результат учитывают, просматривая пробирки на свет

невооруженным глазом или через лупу. Появление реакции

агглютинации в пробирке с цоликлоном анти-D и отсутствие

ее в другой пробирке свидетельствует о том, что исследуемая

кровь резус-положительная. Отсутствие реакции агглютина-

ции в обеих пробирках указывает на отсутствие в исследуе-

мой крови Rh-антигена - кровь резус-отрицательная.

Кроме этого, в гематологической лаборатории иссле-

дуемая кровь будет проверена на групповую принадлеж-

ность. Если окажется, что группа крови определена непра-

вильно, об этом будет сообщено врачу для повторного опре-

деления группы крови больного.

ОПРЕДЕЛЕНИЕ СОВМЕСТИМОСТИ ПЕРЕЛИВАЕМОЙ КРОВИ

Зная группу крови больного и ее резус-принадлеж-

ность, врач подбирает соответствующую донорскую кровь в

необходимом для переливания количестве. Однако, несмотря

на то, что известны группа и резус-принадлежность крови

больного и крови, находящейся в ампуле (крови донора), пе-

ред переливанием последней необходимо провести пробу на

индивидуальную серологическую совместимость и на совме-

стимость по резус-фактору крови больного и донора.

Проба на индивидуальную серологическую совмести-

мость (групповую) проводится с использованием сыворотки

крови больного и эритроцитов крови донора. Вне организма

происходит встреча агглютининов крови больного с агглю-

тиногенами крови донора, и в зависимости от наличия или

отсутствия реакции агглютинации устанавливается характер

совместимости крови больного и донора.

Для определения индивидуальной совместимости не-

обходимо брать свежую сыворотку крови, приготовленную

непосредственно перед трансфузией или накануне (при ус-

ловии хранения ее при температуре +4 - +6° С), а не плазму

крови больного. Это важно потому, что при разведении

плазмы раствором стабилизатора или антикоагулянта в ней

понижается титр агглютининов, а это может привести к по-

лучению ошибочного отрицательного результата реакции

агглютинации даже при несовместимости крови донора с

кровью больного. Сыворотка получается отстаиванием или в

крайних случаях центрифугированием 1-2 мл крови, взятой

из вены больного. Пробирка с сывороткой должна быть не-

медленно маркирована с указанием фамилии и инициалов

больного.

Проба на совместимость по группам АВ0 (рис. 25) про-

изводится на плоскости в течение 5 мин. при комнатной тем-

пературе. На маркированную пластинку наносят 2-3 капли

сыворотки крови больного и туда же добавляют маленькую

каплю крови донора так, чтобы соотношение крови и сыво-

ротки было приблизительно 1:10. Кровь смешивают с сыво-

роткой сухой стеклянной палочкой в течение 1-2 мин. и ос-

тавляют на 5 мин. для наблюдения. Если появляется реакция

агглютинации, это означает, что кровь донора несовместима

с кровью больного. Такую кровь переливать нельзя! При

отсутствии реакции агглютинации можно приступать к перели-

ванию крови.

Проба на совместимость крови донора и реципиента

по резус-фактору (проба Т. Г. Соловьевой) должна произво-

Рис. 25. Выполнение пробы на индивидуальную

совместимость крови по группам АВ0

диться перед каждой гемотрансфузией. Она выполняется

следующим образом:

1) чашка Петри маркируется (пишется фамилия боль-

ного, донора, номер этикетки крови на флаконе);

2) на чашку Петри наносят две капли сыворотки крови

больного и в нее добавляют каплю крови (эритроциты) доно-

ра (соответственно 10:1);

3) смесь перемешивают стеклянной палочкой и чашку

Петри помещают в водяную баню при температуре 45-47°С

на 10 мин. (рис. 26).

Появление реакции агглютинации указывает на несо-

вместимость крови по резус-фактору. Такую кровь перели-

вать нельзя! Если реакции агглютинации нет - кровь можно

переливать.

Рис. 26. Выполнение пробы на

Совместимость крови по Rh-фактору

Проба на совместимость крови донора и реципиента по Rh-

фактору может быть определена с помощью 33% раствора полиглюкина.

Для этого в центрифужную пробирку с помощью пастеровской пипетки

по стенке вливают 2 капли сыворотки крови больного, 1 каплю крови

донора и 1 каплю 33% раствора полиглюкина. Встряхиванием перемеши-

вают содержимое пробирки. Затем, наклонив пробирку почти до гори-

зонтального положения, надо вращать ее в течение 5 мин., чтобы ее со-

держимое растеклось по стенкам, после чего в пробирку следует налить

2-3 капли физиологического раствора и осторожным встряхиванием пе-

ремешать содержимое.

Если содержимое пробирки приобрело вид просветленной жидко

сти, содержащей хлопья и комочки, то это означает, что кровь до-

нора и больного по Rh-фактору несовместима.

Если содержимое пробирки равномерно окрашено в розовый цвет,

не содержит комочков и хлопьев, значит реакция агглютинации не про-

изошла и кровь больного и донора по Rh-фактору совместима.

Кровь донора и больного может быть совместима по

индивидуальной серологической

(групповой) и резусной

принадлежности, однако она может оказаться несовместимой

по биологическим признакам, и переливание такой крови

приведет к развитию трансфузионной реакции у больного.

содержание .. 6 7 8 9 ..