|
|
|
содержание .. 309 310 311 312 ..
Перед введением в реакцию МПБ (сорбент) разводят дистиллированной водой в 3 раза и им производят разведение размороженных образцов крови (1:10) еще в 4 раза (3 части сорбента + 1 часть крови), т.е. получают разведение крови в 40 раз. Выдерживают кровь в термостате при 37 °С 30 мин для абсорбции неспецифических антител, после чего осуществляют постановку РИФ-абс в 3 фазы. В I фазе на формалинизированный антиген, находящийся не предметном стекле в виде фиксированного ацетоном мазка, наносят на 30 мин испытуемую кровь в вышеуказанном разведение (1:40). Если в крови находятся противотрихомонадные антитела, происходит образование комплекса антиген-антитело. Во II фазе образовавшийся комплекс связывается с люми-несцирующей антивидовой сывороткой, которую разведенную по титру, наносят на препарат на 30 мин при 37 °С. В III фазе с помощью контрастного красителя синего Эванса, разведенного обычно 1:20.000, снимается неспецифическое свечение клеток. Его выдерживают на препарате 20 мин при комнатной температуре. После каждой фазы препараты промывают в 2-х порциях фосфатного буфера, рН 7,2, по 10 мин, высушивают и микроско-пируют в люминесцентном микроскопе с ртутно- кварцевой лампой ДРШ-250 с иммерсионной системой. При отрицательном результате реакции все трихомонады в препарате окрашены в красный цвет, при положительном - периферия всех или ряда клеток ярко зеленая, причем, чем больше антител, тем шире этот ободок, вплоть до зеленого свечения всей клетки. Возможна постановка РИФ-абс с высушенной кровью и с определением титра антител. Концентрация антител в крови вы- ше, чем длительнее протекает инфекция. Величину титров С.Л.Зильман наблюдала от 40 до 1280. Критерием излеченности РИФ-абс служить не может. Обладая большими диагностическими возможностями, РИФ-абс имеет существенный недостаток - значительную дли- тельность постановки реакции. С.Л.Зильман был разработан ускоренный вариант постановки РИФ-абс, предложенный в ка- честве отборочного теста на трихомониаз. Уменьшение времени постановки реакции достигается исключением фазы сорбции ис- |