Том 3. Справочник по кожным болезням - часть 309

 

  Главная      Учебники - Разные     Том 3. Справочник по кожным болезням

 

поиск по сайту            правообладателям  

 

 

 

 

 

 

 

 

содержание   ..  307  308  309  310   ..

 

 

Том 3. Справочник по кожным болезням - часть 309

 

 

или взрослые с клиническими проявлениями заболевания и т.д.) и подозрение на определенную
форму   патологического   процесса   (врожденная   или   приобретенная;   наличие   острой   формы,
реинфекции   или   реактивации).   Оптимальным   с   этой   точки   зрения   является  одновременное
определение в биологическом материале возбудителя инфекции или его антигенов, специфических
антител различных классов и белков острой фазы в крови. 

4. Эффективность  лечения.

 

   Выбор метода  и набор тестов при  скрининговых  исследованиях могут

отличаться   от   метода   и   тестов,   используемых   с   диагностической   целью:   при   одних   инфекциях
предпочтение   отдается   непрямому   методу   (определение   антител   различных   классов   в   ИФА,
например при токсоплазмозе), при других – прямым методам (РИФ или ПЦР; например. при ЦМВИ
и герпетической инфекции), в отдельных случаях – комбинации прямых и непрямых тестов. 

Несмотря   на   относительно   высокую   стоимость   анализов,   использование   комплекса   исследований
оправдано,   так   как   этиологическая   расшифровка   диагноза   принципиально   влияет   на   тактику   ведения
пациента,   определяет   необходимость   использования   этиотропной   и   иммуномодулирующей   терапии,   а   в
отдельных случаях позволяет прогнозировать исход.

Следует учитывать влияние ряда условий на результаты лабораторного анализа:

- способ забора, хранения и транспортировки инфекционного материала;

- наличие сопутствующих заболеваний (в первую очередь аутоиммунных заболеваний);

- обследование пациента на фоне применения лекарственных препаратов (цитостатиков,
гормонов, антибиотиков), способных исказить результат анализа;

- выраженность в организме больного катаболических процессов (нарастание протеолиза,
усиление   глюконеогенеза,   особенно   выраженных   при   гипоксических   и   терминальных
состояниях).

Для   эффективного   использования   лабораторных   тестов   необходима   разработка   дифференциально-
диагностических программ, принцип построения которых заключается в целенаправленном и поэтапном
обследовании   различных   групп   риска   с   учетом   эпидемиологической   ситуации,   клинических   форм   и
критериев тяжести течения заболевания. Рациональное использование тест-систем на основе предложенных
принципов   позволяет   избежать   ненужных   многократных   исследований   и   оперативно   установить
клинический   диагноз.   Особое   значение   оперативная   диагностика   приобретает   при   тяжелых   формах
внутриутробных инфекции, поскольку от этого может зависеть жизнь ребенка.

Многолетний   опыт   работы   в   области   диагностики   оппортунистических   инфекций   показал,   что
рекомендуемый  в  литературе  принцип  динамичного  наблюдения  с   целью   определения  четырехкратного
нарастания   титра   антител   в   парных   сыворотках   в   большей   части   случаев   неоправдан,   особенно   при
обследовании   детей   раннего   возраста,   беременных   и   пациентов   с   иммунодефицитными   состояниями.
Нередко такие пациенты обследуются на высоте иммунного ответа, или их иммунная система не способна
нарабатывать антитела в достаточном количестве даже при наличии активного инфекционного процесса,
поскольку сила иммунного ответа генетически детерминирована. Выбор тактики длительного наблюдения
приводит в ряде случаев к поздней диагностике, переходу острого процесса в подострое или хроническое
течение. При ЦМВИ и герпетической инфекции (особенно при возвратном половом герпесе), а также при
токсоплазмозе   и   хламидийной   инфекции   на   фоне   слабого   иммунного   ответа   или   его   снижении   в   ряде
случаев отмечается нарастание клинических симптомов: появление у детей раннего возраста выраженной
неврологической   симптоматики   или   ее   нарастание,   развитие   микро-   и   гидроцефалии;   появление
хориоретинитов; самопроизвольные выкидыши или замершая беременность, рождение ребенка с тяжелыми
пороками. В этих случаеяхпозднее лечение имееет низкую эффективность.

Определенную трудность вызывает интерпретация лабораторных данных, полученных при обследовании
ребенка   или   взрослого   пациента.   Ранжирование   результатов   по   основным   инфекциям   представлено   в
приложении 1.

При   контроле   эффективности   лечения   пациента   (преимущественно   с   вирусными   инфекциями   или   при
микст-инфицировании,   когда   применяются   этиотропные   и   особенно   иммуномодулирующие   препараты)
следует помнить о том, что нередко в ближайшие месяцы обнаруживаются IgM-антитела и IgG даже у тех
лиц, у которых ранее они не выявлялись, или их уровень увеличивается (происходит нарастание титра).

Следует осторожно относиться к этому факту и не рассматривать его как критерий недолеченности для
назначения очередного курса лечения. По нашим данным, у отдельных лиц с высоким иммунным ответом
после   лечения   хламидийной   инфекции   и   ЦМВИ   при   клиническом   выздоровлении   IgM-антитела
определяются   до   9-10   месяцев   после   лечения   (на   фоне   быстрого   снижения   антител   других   классов   и
антигенов   возбудителя).   Наряду   с   этим,   следует   помнить,   что   при   лечении   хронически   протекающих
оппортунистических инфекций повышение уровня (титра) специфических антител следует рассматривать
как положительный фактор (например, если при хроническом токсоплазмозе исходный уровень антител был
низкий и после лечения повысился, то это свидетельствует об эффективности лечения; если же остался на
прежнем   уровне,   -   эффективность   лечения   низкая   и   через   несколько   месяцев   может   вновь   наступить
обострение инфекции).

Основные методы лабораторной диагностики оппортунистических инфекций

Иммунофлюоресцентный метод (син. реакция иммунофлюоресценции - РИФ, метод флюоресцирующих
антител   –   МФА,   прямая   иммунофлюорценция   -   ПИФ)   основан   на   выявлении   светящихся   иммунных
комплексов.   Сущность   метода   заключается   в   соединении   антител,   меченых   флюорохромом,   со
специфическими   антигенными   детерминантами,   находящимися   на   поверхности   клетки,   и   последующей
детекции   с   помощью   люминесцентного   микроскопа   на   определенной   длине   волны.   Используется   для
диагностики ЦМВИ, герпетической инфекции, токсоплазмоза, хламидиоза и многих других инфекционных
заболеваний. Обладает высокой специфичностью и чувствительностью, однако диагностическая ценность
напрямую  зависит от  правильности забора материала  специалистами (из очага  инфекции) и ограничена
субъективностью   оценки   результата,  а  также  уровнем  профессиональной  подготовки  и  остротой   зрения
врача (высококвалифицированный специалист с высокой степенью достоверности может дифференцировать
различные формы возбудителей, например, ретикулярных и элементарных телец при хламидиозе).

В   настоящее   время   повсеместно   используется  метод   иммуноферментного   анализа   (ИФА).  В   основе
метода   лежит   образование   комплекса   “антиген-антитело”   на   твердой   фазе   полистирольных   планшет   и
дальнейшая “трансформация” ферментной метки в соответствующий сигнал, регистрируемый с помощью
спектрофотометра.   Основными   преимуществами   метода   являются:   высокая   чувствительность   и
специфичность, возможность одновременного исследования большого количества проб, объективная оценка
результатов с помощью спектрофотометра, простота постановки и возможность внутреннего контроля при
каждой   постановке   Ограничения   метода   связаны   с   наличием   необходимого   оборудования,
высококачественных   и   высокоспецифичных   тест-систем,   а   также   с   соответствующей   квалификацией
специалистов лаборатории. В настоящее время ИФА используется не только для определения антител, но и
для выявления антигенов.

ИФА является универсальным методом и позволяет выявлять в сыворотке (плазме) и в спинномозговой
жидкости специфические антитела различных классов и субклассов (по общепринятой схеме чаще всего
определяют   антитела   классов   IgМ   и   IgG).   Определение   суммарных   антител   при   диагностике
оппортунистических   инфекций   имеет   низкую   диагностическую   ценность,   дает   лишь   предварительную
информацию о наличии инфекции и требует дальнейшего лабораторного уточнения. Оценка результатов
реакции в иммуноферментных единицах (EIU)  или  в международных единицах (МЕ/мл) является более
динамичным   показателем,   поскольку   дает   наиболее   точную   информацию   и   позволяет   проследить   за
поведением   антител   в   более   короткие   сроки,   чем   титр   антител.   По   наличию   сероконверсии,   т.е.   по
появлению антител у ранее серонегативного лица, можно ставить диагноз свежеприобретенной инфекции.

Обнаружение   антител   класса   IgМ   позволяет   дифференцировать   активную   инфекцию   от   латентно
протекающей.

IgM – наиболее “ранние” антитела, поскольку образуются на ранних стадиях инфекционного процесса. Они
способны   агглютинировать   бактерии,   нейтрализовывать   вирусы,   активировать   комплемент   и   играют
важную   роль   в   элиминации   возбудителя   из   кровеносного   русла.  IgM  не   проникают   через   плаценту,
синтезируются еще у плода и относятся к собственным антитела новорожденных. Их наличие указывает на
заражение (в том числе и внутриутробное), свидетельствует об активном процессе. Уровень IgM-антител
может повышаться при реактивации, реинфицировании или суперинфицировании. Период полураспада – 5
дней.

IgG играют основополагающую роль в гуморальном иммунитете при инфекционных заболеваниях, вызывая
гибель   возбудителя   с   участием   комплемента   и   опсонируя   фагоцитарные   клетки.   Это   основной   класс
иммуноглобулинов в сыворотке крови. Легко обмениваются между кровью и внесосудистой средой (около
48%   IgG   находится   вне   кровеносного   русла).   Они   проникают   через   плаценту   и   формируют

антиинфекционный   иммунитет   у   новорожденных.   Выявление   высокого   уровня   (титра)   ЦМВ-IgG   дает
дополнительную   информацию   об   иммунном   ответе.   Период   полураспада   –   23   дня.   По   мере   развития
иммунного ответа аффинитет IgG к антигенным детерминантам повышается. В последние годы появилась
возможность   определения   так   называемых   "ранних"   специфических   IgG,   которые   обладают   низкой
авидностью   (авидность   характеризует   прочность   связи   между   антигеном   и   антителом).   Высокоавидные
антитела   являются   показателем   давнего   инфицирования   и   ранее   перенесенной   инфекции.   Авидность
антител в сыворотках оценивают по индексу авидности (ИА), который выражают в %.

IgA  существует   в   двух   формах:  секреторной   и   сывороточной.   Они   не   проходят   через   плаценту   и   не
фиксируются в тканях. Секреторный IgA содержится в молоке, молозиве, слюне, в слезном, бронхиальном и
желудочно-кишечном секрете, желчи, моче. Это основной вид иммуноглобулинов, участвующих в местном
иммунитете. Селективное накопление IgA в секретах говорит о их защитной функции по отношению к
возбудителям   инфекции.   При   накоплении   в   соответствующих   секретах   IgA   происходит   снижение
выделения хламидий и других возбудителей из цервикального канада. Поступая с молоком матери, IgA
всасывается   в   кишечнике   и   остается   здесь,   защищая   слизистые   оболочки.   Эти   антитела   направлены   к
бактериальным и вирусным антигенам, часто попадающим в кишечник. Около 40% всего IgA находится в
сыворотке   крови,   где   он   представлен   мономерной   формой,   период   полураспада   –   5-6   дней.Синтез
сывороточных IgA начинается с конца первого месяца заболевания и продолжается до тех пор, пока антиген
доступен   иммунокомпетентным   клеткам.   Их   обнаружение   свидетельствует   об   остром   или   подостром
процессе   и   показательно   при   диагностике   врожденных   форм   инфекций.   Комплексы   “IgA-антиген“
активируют   комплемент   только   в   присутствии   лизоцима   и   проявляют   антибактериальную   и
нейтрализующую активность.

Причины ложно-положительных результатов исследования в ИФА. 

Как и при любой другой реакции, при ИФА возможен ложно-положительный результат. Наиболее часто он
встречается   при   определении   специфических   антител   класса   IgМ   и   может   быть   обусловлен   наличием
ревматоидного   фактора,   гиперпродукцией   IgM   при   беременности,   перекрестной   реакцией   с   антигенами
других   возбудителей,   аутоиммунным   процессом,   нарушением   обмена   веществ   и   др.   В   данном   случае
использование ряда лабораторных приемов (удаление ревматоидного фактора из сыворотки, использование
в качестве подтверждающих тестов высокоспецифичных тест-систем зарубежного производства, повторное
исследование   сыворотки)   позволяют   получить   достоверный   результат.   В   случае   ложно-положительного
результата,   как   правило,   определяется   только   этот   класс   иммуноглобулинов.   Наряду   с   этим,   следует
помнить,   что   IgM   являются   показателем   острого   и   активного   инфекционного   процесса,   поэтому
обязательным  в данном случае  является   использование  дополнительных  и  подтверждающих  тестов или
наблюдение   в   динамике   (через   2-3   недели).   Обнаружение   возбудителя   или   его   антигенов   прямыми
методами, появление антител других классов в результате переключения синтеза антител подтверждают
диагноз конкретной оппортунистической инфекции. 

При детекции IgG-антител также может быть получен ложно-положительный результат, связанный прежде
всего с перекрестным реагированием антигенов (например, между ЦМВ и вирусом простого герпеса; между
Chlamydia trachomatis, Chlamydia pneumoniae, Chlamydia psittaci) и напрямую зависящий от специфичности
тест-систем. Наиболее часто с этим фактом приходится встречаться при обследовании на хламидийную
инфекцию   детей   раннего   возраста   и   пациентов,   принимавших   лечение   по   поводу   хламидиоза.
Использование   диагностических   наборов   c   антигенами   Chlamydia   trachomatis   позволяет   подтвердить
наличие урогенитального хламидиоза.

Правила забора и доставки материала

При   отправке   материала   в   лабораторию   для   исследования   на   оппортунистические   инфекции   в
сопроводительном   документе   следует   обязательно   указать   возраст   и   повод   для   обследования.   При
направлении   материала   с   целью   установления   внутриутробного   инфицирования   кровь   ребенка   следует
направлять   параллельно   с   кровью   матери.   Для   исследования   на   наличие   антител   кровь   доставляется   в
лабораторию   в   день   взятия;   при   невозможности   -   сливается   сыворотка,   которая   может   храниться   в
холодильнике   при   температуре   +4-+8°   С   до   5   дней.   Для   обнаружения   антигенов   кровь   забирается   с
антикоагулянтом и доставляется в течение 2 часов. Доставка ликвора производится также в течение 2 часов.

Полимеразная цепная реакция (ПЦР).

 

    Она обладает уникальной чувствительностью и специфичностью. С

ее   помощью   можно   анализировать   различные   клинические   образцы.   Суть   ПЦР   заключается   в
идентификации специфического участка молекулы ДНК с последующим копированием или амплификацией
этого   участка   с   целью   получения   достаточного   количества   копий,   которые   могут   быть   выявлены

доступными методами детекции (чаще всего с помощью электрофореза). Метод, за открытие которого в
1993   г.   Кэри   Муллису   была   присуждена   Нобелевская   премия,   особенно   эффективен   для   пренатальной
диагностики   наследственных   и   инфекционных   заболеваний,   а   также   для   заболеваний,   передаваемых
половым   путем   (для   этой   группы   инфекций   характерна   способность   возбудителя   персистировать   в
организме с нерегулярной продукцией инфекционных частиц и обострениями хронической соматической
патологии воспалительного характера). При стертости клинической картины заболевания, невыраженности
иммунного ответа метод имеет достаточно высокое диагностическое значение. 

Однако   появившиеся   в   последнее   время   сообщения   и   собственный   опыт   работы   указывают   на
необходимость   осторожной   интерпретации   результатов   качественной   ПЦР   при   оппортунистических
инфекциях,   поскольку   положительный   результат   ПЦР   у   взрослого   иммунокомпетентного   пациента   не
всегда свидетельствует об активном инфекционном процессе и неэффективности лечения. Диагностическая
ценность   ПЦР   повышается   при   сочетании   с   серологическими   методами.   Наиболее   перспективна
количественная ПЦР, позволяющая диагностировать и проводить контроль эффективности лечения с учетом
количества инфекционных частиц в исследуемом материале.

ЛАБОРАТОРНАЯ

ДИАГНОСТИКА

МОЧЕПОЛОВОГО 

ТРИХОМОНИАЗА

КРАТКАЯ АННОТАЦИЯ

В пособии отражены методические материалы по лабора-

торной диагностике мочеполового трихомониаза. Детально изло-

жены способы общепринятых  и  оригинальных  исследований на

трихомонады, даны рецепты питательных сред, разработанных и

апробированных   с   положительным   результатом   в   Центральном

научно-исследовательском   кожно-венерологическом   институте

Минздрава РФ.

Впервые   в   методической   литературе   описана

серологическая

 

диагностика

 

трихомониаза

иммунофлюоресцентным   методом   и   выявление   специфической

сенсибилизации больных с использованием внутрикожной пробы

с аллергеном из трихомонад.

Изложенные   в   пособии   методические   материалы

представляют

 

интерес

 

для

 

врачей-лаборантов

дерматовенерологических,

 

акушерско-гинекологических,

урологических и других учреждений.

Пособие   для   врачей-лаборантов   составлено

сотрудниками   ЦНИКВИ   МЗ   РФ   профессором   В.Н   Бедновой,

профессором   Г.А.Дмитриевым,   профессором   М.М.Васильевым,

д.м.н. М.В.Яцухой, д.м.н. В.И.Кисиной, к.б.н. Т.Е.Вахниной, к.б.н.

Т.Г Коликовой, к.б.н. С.Л.Зильман.

В   связи   с   широким   распространением

трихомониаза   мочеполовых   органов,   возможностью

малосимптомного   его   течения,   особенно   у   мужчин,

тяжестью   осложнений,   в   том   числе   развитием

бесплодия,   лабораторная   диагностика   этого

заболевания занимает одно из ведущих мест в борьбе с

ним.

МИКРОСКОПИЧЕСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ

Наиболее   часто   используемым,   но   недостаточно

чувствительным   методом   при   лабораторной   диагностике

трихомониаза является микроскопическое изучение нативных

или   окрашенных   препаратов.   При   исследовании   нативного

препарата   патологический   материал   помещают   в   каплю

теплого   изотонического   раствора   хлорида   натрия   на

предметном   стекле,   тщательно   перемешивают,   накрывают

покровным стеклом и немедленно исследуют в микроскопе с

объективом 40. Лучшие результаты дает просмотр нативного

препарата в микроскопе с темнопольным конденсором, т.к. при

этом обнаруживаются единичные и слабоподвижные особи в

скоплениях   клеточных   элементов   за   счет   хорошо   видимого

движения   жгутиков.   В   нативном   препарате   для   трихомонад

характерна овальная или округлая форма, наличие жгутиков и

толчкообразные движения простейших.

При   исследовании   нативных   препаратов   следует

помнить   о   возможности   нахождения   в   моче   жгутиковых

простейших семейства бодонидов. В отличие от трихомонад

они   меньше   размером   и   имеют   лишь   два   жгутика,   что

обуславливает   их   быстрое   поступательное   движение   по

прямой.   К   ошибкам   в   распознавании   трихомонад   может

привести   и   наличие   в   препарате   лейкоцитов   в   сочетании   с

большим   числом   хорошо   подвижных   палочек,

прикрепляющихся к ним

С   целью   обнаружения   влагалищных   трихомонад   в

окрашенных препаратах используют многочисленные методы

окраски,   в   частности,   метиленовым   синим,   генцианом

фиолетовым,   по   способам   Грама,   Романовского-Гимза,

Лейшмана-Романовского   и   др.   Широкое   применение

метиленового синего обусловлено тем, что его используют и

для окраски мазков на гонококк. Изучение окрашенных мазков

позволяет   определить   морфологию   возбудителя,   мазки   не

требуют немедленного исследования, что особенно важно при

массовом   обследовании   на   трихомониаз.   Однако,   возможны

диагностические   ошибки,   поскольку   эпителиальные   клетки

могут быть приняты за три-хомонады. Трихомонады бывают

овальными,   круглыми   или   неправильной   формы   при

расположении   между   клеточными   элементами,   хорошо

выражен   контур   клетки,   однако   ядро   может   быть

нечетким,   оно   небольшое,   расположено   эксцентрично   и

чаще   имеет   удлиненную   форму.   Окраска   препаратов   по

Романовскому-Гимзе или Лейшману-Романовскому позволяет

выявить   жгутики   (4),   ундулирующую   мембрану   и

аксостиль.

Обработка   фиксированных   мазков   1   %-ным   водным

раствором метиленового синего длится 1 мин.

Окраска по способу Грама  заключается в следующем.  На

фиксированный   96-градусным   этиловым   спиртом   препарат

помещают   полоску   фильтровальной   бумаги,   размер   которой

соответствует   стеклу.   На   бумагу   на   1   мин   наносят   1   %-ый

водный   раствор   кристалл-виолета,   после   чего   мазок

промывают   водопроводной   водой   и   заливают   раствором

Люголя,   который   выдерживают   до   почернения   мазка.   Вновь

промывают водой и под контролем глаза обесцвечивают 96-

градусным этиловым спиртом до прекращения отекания синих

струек спирта с тонких участков мазка. Препарат промывают

водой   и   докрашивают   в   течение   3   мин   1   %-ным   водным

раствором нейтрального красного или в течение 1 мин 1 %-

ным водным раствором сафронина. После промывки водой и

высушивания производят микроскопию.

При окраске по Романовскому-Гимзе мазки красят 1 час

5 %-ным раствором азур-эозина в дистиллированной воде.

 

КУЛЬТУРАЛЬНОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ И 
ПИТАТЕЛЬНЫЕ СРЕДЫ

Культуральный   метод   диагностики   трихомониаза

является более достоверным и чувствительным по сравнению

с  микроскопическим   исследованием.   В  большей  степени  его

эффективность   зависит   от   качества   используемых

питательных   сред   В   состав   предложенных   сред   с   высокими

ростовыми свойствами входят мясо-пептонный бульон (МПБ),

препараты   печени,   минеральные   соли,   сахара,   сыворотка

крови человека или животных, солянокислый цистеин и другие

ингредиенты.

Начиная   с   40-х   годов   широкое   распространение

получила   среда   Джонсона-Трасселя   (CPLM),   которая   в

модификации   ЦНИКВИ   долгие   годы   использовалась   при

разработке   новых   питательных   сред,   служив   контролем.   Ее

недостатком   является   то,   что   она   нестандартна   и   имеет

ограниченный   срок   годности,   но   ростовые   свойства   ее

высокие.

Приготовление

 

лиофилизированной

 

среды

заключается в следующем:

400 г кроличьей или говяжьей печени измельчают и до-

бавляют   к   ней   500   мл   холодной   водопроводной   воды,

 

 

 

 

 

 

 

содержание   ..  307  308  309  310   ..