Лабораторные методы исследования в клинике (Меньшиков В.В.) - часть 85

Т а б л и ц а 72. Основные биологические свойства нокардий

гии человека: В. anthracis, В. subtilis, В. cereus,

В. pumilus.

В. anthracis является возбудителем сибир-

ской язвы. Другие виды рода Bacillus широко

распространены в воде, воздухе, почве, пищевых

продуктах, выделяются из организма человека

и животных. Их патогенная роль для человека

и животных невелика. В последние годы име-

ются сообщения, что спорообразующие аэроб-

ные бактерии могут быть причиной септицемии,

пневмоний, пищевых отравлений и других вос-

палительных процессов человека.

По морфологии эта группа микробов пред-

ставляет собой грамположительные или грам-

вариабельные палочки, расположенные отдель-

ными клетками или цепочками (В. cereus).

Аэробы или факультативные анаэробы. Споры

образуются только в аэробных условиях, устой-

чивы к нагреванию. Реакция на каталазу поло-

жительная, реакция на оксидазу отрицательная.

Микробы рода  B a c i l l u s не требовательны к пита-

тельным средам. Указанные выше виды бацилл

образуют различные формы колоний на простых

питательных средах от мелких, гладких и слегка

желтоватых (В.  p u m i l i s ) до крупных, круглых,

шероховатых, неправильной формы, с матовой

извилистой поверхностью; колонии с возрастом

приобретают окраску от кремовой до коричневой

(В. subtilis, В. cereus). На бульоне рост в виде

поверхностной морщинистой пленки, без помут-

нения среды (за исключением В. anthracis,

В. cereus). Минимальный набор тестов, позво-

ляющих ориентировочно дифференцировать

бациллы до вида, представлен в табл. 71.

И з  р о д а  н о к а р д и я (Genus Nocardia).

N. asteroides и N. lutea могут быть выделены

от человека. По морфологии — грамположитель-

ные палочки, способные к образованию мице-

лия, воздушных гифов и ветвящихся нитей. Спор

не образуют. Строгие аэробы. Неподвижны.

Реакция редукции нитратов непостоянна. Кис-

лотоустойчивость зависит от вида. Хорошо ра-

стут на простых питательных средах. Образуют

пигмент: белый, серый, желтый, розовый, оран-

жевый, красный. N. asteroides выделяется при

кожных поражениях человека, N. lutea — в слу-

чаях актиномикоза и при воспалениях слезных

желез. Основные биологические свойства пред-

ставлены в табл. 72.

Р о д  к о р и н е б а к т е р и й  ( С о г у п е -

b a c t e r - i u m ) объединяет около 20 групп

грамположительных палочек. Часть из них

представляет интерес для клинических микро-

биологов. С. pseudodiphtheriticum является по-

стоянным обитателем слизистых и кожи чело-

века. С. xerosis обычно выделяют со слизистой

оболочки слезного канала, но может быть при-

чиной длительно и вялотекущих конъюнкти-

витов. С.  d i p h t h e r i a e вызывает дифтерию.

Виды, перечисленные ниже, постоянно пара-

зитируют на слизистых оболочках глотки, носа,

трахеи здоровых лиц, но могут быть причи-

ной инфекционно-воспалительных процессов:

С. ulcerans — дифтериеподобных заболеваний

с поражением слизистых верхних дыхательных

путей, С.  m i n u t i s s i m u m — характерных кожных

поражений человека (эритразмы), С. pseudo-

tuberculosis — абсцессов с язвенно-некротиче-

скими очагами, язвенных лимфаденитов, С. еп-

zymicum — тяжелой абсцедирующей бронхо-

пневмонии, С. pyogenes и С. haemolyticum спо-

собны вызывать у человека язвенно-некротиче-

ские поражения в виде фарингитов, тонзилли-

тов, гингивостоматитов, уретритов и поражений

кожи. С. vaginalis — группа мелких палочек,

вариабельно окрашивающихся по Граму; их

выделяют со слизистой оболочки влагалища

здоровых женщин, но они могут вызывать вяло-

текущие вагиниты.

По морфологии все коринебактерий — грам-

положительные полиморфные палочки, не вет-

вятся. Спор и капсул не образуют. Подвиж-

ностью не обладают. Слегка изогнутые изящные

палочки с булавовидными утолщениями на кон-

цах, располагающиеся в виде войлока, пакета

булавок, букв VL, содержащие темноокрашен-

ные зерна на концах — морфология, характер-

ная для С. diphtheriae, С. ulcerans и С. pseudo-

339

Т а б л и ц а 73. Биохимические особенности микробов некоторых видов рода коринебактерий

и вида листерий

П р и м е ч а н и я . 1 — реакцию на каталазу ставят с 10 % Н

2

О2 и микробами, выросшими на средах без

добавления крови; 2 — биовариант; 3 — нет данных.

tuberculosis. У других видов коринебактерий

палочки более толстые, короткие, обычно распо-

лагаются в виде частокола, темноокрашенные

зерна встречаются редко и с одного конца, так

же как и булавовидные утолщения, наблюда-

ются коккобациллярные формы.

Коринебактерий растут на питательном

агаре, содержащем не менее 1,6 г/л аминного

азота с добавлением глюкозы (1 %), крови

(5 %) или сыворотки животных (10 %), рН сред

7,4—7,6. Через 24 ч на питательных средах фор-

мируются колонии диаметром 1—3 мм, круглые,

гладкие или слегка зернистые, непрозрачные

с желтым, кремовым или серовато-белым пиг-

ментом. У дифтерийных бактерий может наблю-

даться S-форма колоний (гладкие), SR- и

R-формы — шероховатые.

В мазках из выросших колоний видны выше-

описанные грамположительные палочки с харак-

терным расположением.

Для выделения чистых культур и проведения

идентификации подозрительные колонии отсе-

Т а б л и ц а 74. Биологические свойства некоторых видов рода Clostridium

П р и м е ч а н и я . 1 — на среде Христенсена; 2 — КСГ — кислота, сгусток,

сгусток; 4 — П — протеолиз; (±) — биоварианты; (..) — нет данных.

газ; 3 — КС — кислота,

340

вают на пробирки с вышеуказанными питатель-

ными средами. Основные биохимические свой-

ства, позволяющие их дифференцировать по ви-

дам, представлены в табл. 73.

Л и с т е р и и  ( G e n u s  L i s t e r i a )  n o

морфологии — грамположительные мелкие,

овоидные, короткие, кокковидные палочки, рас-

полагающиеся единичными клетками или кучка-

ми, иногда можно видеть удлиненные палочки и

нити. В культуре после 24 часов роста обнару-

живается типичное дифтероидное расположение
клеток в виде V или Y. Спор и капсул не образуют.

Аэробы, микроаэрофилы. Подвижность лучше

выражена, если культивировать листерии при

температуре от 20 до 24 °С. На простых пита-

тельных средах рост скудный, необходимо до-

бавлять кровь или сыворотку. Реакция на ката-

лазу положительная. Реакция на оксидазу отри-

цательная. Сероводород не образуют.

Listeria monocytogenes патогенна для чело-

века и животных. У человека вызывает острое

заболевание с полиморфной клинической карти-

ной (менингиты, энцефалиты, септицемия,

эндокардиты, аборты, абсцессы) — листериоз.

Биологические свойства Listeria monocytogenes

см. в табл. 73.

7.4.8. Грамположительные

анаэробные палочки

Род  к л о с т р и д и я  ( G e n u s  C l o s t r i -

d i u m) объединяет более 60 видов микроорга-

низмов. По морфологии грамположительные

палочки веретенообразные, имеют вид теннис-

ных ракеток или барабанных палочек. Образуют

споры; расположение их в клетке центральное,

субтерминальное или терминальное. Споры ова-

льной или круглой формы, устойчивые к нагре-

ванию. Капсула вариабельна. Анаэробы. Реак-

ции на каталазу и оксидазу отрицательные.

Реакция редукции нитратов вариабельна. Бо-

льшинство видов рода клостридия являются

сапрофитами и обитают в почве, некоторые виды

микробов этого рода, попадая в организм чело-

века, вызывают тяжелые заболевания (табл. 74)

Возбудитель столбняка — С. tetani; ботули-

зма — С. botulinum группы А, В, С, D, E, F, G;

газовой гангрены — С. perfringens, С. novyi

А, В, С. septicum, С. histolyticus, С. sordelii,

С. bifermenias, С. falla.x. Причиной пищевых

токсикоинфекций может быть С. perfringens

типов А, В, С, D, E.

7.5. МЕТОДЫ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТИ

МИКРООРГАНИЗМОВ К АНТИБАКТЕРИАЛЬНЫМ

ПРЕПАРАТАМ

По степени чувствительности к антибиоти-

кам микроорганизмы разделяют на 3 группы:

чувствительные, умеренно устойчивые, устой-

чивые. К чувствительным относят штаммы) рост

которых подавляется концентрациями препа-

рата, создающимися в сыворотке крови боль-

ного при введении среднетерапевтических доз

антибиотиков. К умеренно устойчивым относят

штаммы, для подавления роста которых требу-

ются концентрации, создающиеся в сыворотке

крови при введении больному максимальных

терапевтических доз антибиотиков. Устойчи-

выми считаются микроорганизмы, рост которых

не подавляется максимально допустимыми

дозами лекарственных веществ.

Степень чувствительности микроорганизмов

к химиотерапевтическим веществам в лабора-

торных условиях определяется минимальной

концентрацией препарата, подавляющей рост

испытуемого штамма in vitro (МПК). Сопостав-

ление минимальной подавляющей концентра-

ции, определенной in vitro, и концентрации, до-

стигаемой в организме при введении терапевти-

ческих доз этого препарата больному, позволяет

установить степень чувствительности возбуди-

теля к данному препарату [Навашин С. М.,

Фомина И. П., 1982].

Для определения чувствительности бактерий

к антибиотикам применяют метод диффузии

в агар с использованием бумажных дисков и

метод серийных разведении в плотных и жидких

питательных средах. Используют также уско-

ренные методы.

7.5.1. Метод диффузии в агар

с использованием бумажных дисков

На поверхность плотной питательной среды ',

разлитой в чашки Петри примерно по 20 мл, на-

носят испытуемую бактериальную взвесь в коли-

честве 1 мл. Используют чистую культуру —

либо 18—20-часовую бульонную, либо смыв

18—20-часовой культуры с плотной питательной

среды. Плотность суспензии должна соответ-

ствовать стандарту мутности № 10 ГКИ

им. Тарасевича.

Взвесь равномерно распределяют по чашке,

остаток жидкости отсасывают пастеровской

пипеткой. Чашки подсушивают при комнатной

температуре 30—40 мин, после чего на поверх-

ность чашки с помощью пинцета помещают

диски с антибиотиками.

Бумажные диски, изготовленные заводским

путем, содержат одну концентрацию антибио-

1

 Сухая стандартная питательная среда

АГВ, выпускаемая НИИ по производству пита-

тельных сред (г. Махачкала).

341