Лабораторные методы исследования в клинике (Меньшиков В.В.) - часть 84

ков позволяют предположить, что исследуемая
колония относится к одному из видов нейссерий.

Подозрительные колонии отсевают секторами

на чашки Петри или косяки с сывороточным ага-
ром для получения чистой культуры. С целью

определения видовой принадлежности нейссе-
рий используют: жидкие или полужидкие среды

Хью — Лейфсона, содержащие глюкозу, маль-
тозу, лактозу, сахарозу, фруктозу с двойной кон-

центрацией индикатора Андреде, среды для
определения редукции нитратов и нитритов с

2—3 каплями лошадиной сыворотки, агар с

5 % сахарозы для определения полисахаридо-
образования (с помощью раствора Люголя),
агар из гидролизата казеина для учета йодной

реакции (0,25 % раствор йода наносят на по-

верхность культур, посеянных  б л я ш к а м и ) .

Видовые особенности рода Neisseria пред-

ставлены в табл. 64.

В случае выделения культур, подозритель-

ных на N.  m e n i n g i t i d i s , проводят определение

капсульного антигена, используя диагностиче-

ские поливалентные и групповые менингококко-
вые агглютинирующие или преципитирующие

сыворотки (см. Методические указания. Приказ
№ 98 МЗ СССР от 29.01.81 г. по бактериологи-

ческой диагностике менингококковой инфекции

и бактериальных менингитов).

В  р о д  б р а н х а м е л л а  ( B r a n h a -

m е 1 1 а) пока включен один вид В.  c a t a r r h a l i s .

Он постоянно обнаруживается на слизистых
верхних дыхательных путей и мочеполового

тракта. Имеются случаи выделения В. catarrhalis

при менингитах, острых фарингитах, бронхитах.

7.4.5. Грамположительные

факультативно-анаэробные кокки

Р о д  с т а ф и л о к о к к а  ( S t a p h y l o -

c o c c u s ) . Согласно современной классифика-

ции (Берджи, 1974), состоит из трех видов:

S. epidermidis, S. aureus, S. saprophytic.us. Они

представляют собой грамположительные кокки,

располагающиеся парами, отдельными клетка-
ми и гроздьями. Спор и капсул не образуют.
Неподвижны. Аэробы или факультативные

анаэробы. Хорошо растут на простых питатель-

ных средах при температуре от 6,5 до 46 °С,

лучше — при 37°С. Переносят повышенное
содержание NaCl в среде от 5 до 10 %. Электив-

ной является желточносолевая среда, содержа-
щая 7,5 % NaCl. О наличии лецитиназы свиде-

тельствует образование вокруг колоний через

18—24 ч  в ы р а щ и в а н и я радужного венчика.

Колонии стафилококка круглые, гладкие,

блестящие, матовые. Пигмент белый или золоти-

стый разных оттенков, четко выявляется через
24—36 ч роста.

Стафилококки вида ауреус обладают способ-

ностью продуцировать экзотоксины, гемоли-

зины, лейкоцидины, имеют ферменты: коагулазу,

лецитиназу, ДНК-азу, фибринолизин, гиалуро-

нидазу и др. Тесты на наличие коагулазы и

ДНК-азы являются ведущими при определении
S. aureus.

Т а б л и ц а 65. Биологические свойства

видов стафилококка

Биологические свойства и дифференциация

видов стафилококка представлены в табл. 65.

При необходимости внутривидовой иденти-

фикации используют метод фаготипирования.

Методика его проведения, учета результатов,
определение фагогрупп и их наименований изло-

жены в инструкции по применению набора ста-
филококковых фагов, выпускаемых в стране.
Иногда для маркирования штаммов используют

их ферментативную активность, позволяющую

определить биоварианты.

Р о д  с т р е п т о к о к к о в  ( S t r e p t o -

c o c c u s ) объединяет очень большую группу

микроорганизмов, характеризующихся шаро-

видной или овальной формой клеток. В мазках
микробы располагаются парами, кучками, це-
почками различной длины. Стрептококки — фа-

культативные анаэробы, грамположительные,

спор не образуют, неподвижны, за исключением
некоторых штаммов энтерококка. Реакция на

ферменты каталазу и оксидазу отрицательна.

На плотных питательных средах с кровью стреп-

тококки через 24 ч роста при 37°С образуют

мелкие 1—2 мм прозрачные, полупрозрачные

или непрозрачные колонии, сероватые или бес-

цветные, гомогенные или зернистые. Одни виды

обладают гемолитической активностью, от резко

выраженного гемолиза с полным просветлением

среды (b-гемолиз) до разной степени ее позеле-

нения (а-гемолиз). Имеются виды, не обладаю-
щие гемолитической способностью. Стрептокок-

ки хорошо растут на жидких питательных средах
с 0,2 % глюкозы, на полужидких и плотных сре-

дах с 5 % крови или 10 % инактивированной
сыворотки животных, оптимальное значение рН
7,6—7,8.

335

Т а б л и ц а 66. Дифференциальные свойства

некоторых представителей группы зеленящих

стрептококков '

1

 См.: Hardie J. M., Bowden G. H. J. Dent. Res.,

1976, vol. 55, p. 166—176.

Гемолитические штаммы стрептококка на

жидких и полужидких питательных средах дают

пристеночный рост с придонным осадком без

помутнения питательной среды. Зеленящие

стрептококки вызывают общее помутнение сре-

ды с образованием придонного осадка.

Основные дифференциальные свойства неко-

торых видов рода стрептококков представлены

в табл. 66—68.

В настоящее время описано 17 серологиче-

ских групп стрептококка, обозначенных латин-

скими буквами от А до Т (по Ленсфильд), такое

деление основано на наличии у представителей

разных групп группоспецифияеского антигена.

Серологическую группу стрептококков опреде-

ляют в реакции преципитации с иммунными

групповыми сыворотками.

Наиболее патогенен для человека вид S. руо-

genes (группа А). Эти стрептококки являются

возбудителями многих гнойно-воспалительных

процессов человека: скарлатины, ангин, рожи-

стого воспаления кожи, септицемии, отитов, хро-

нических стрептококковых инфекций — рев-

матизма, гломерулонефрита. Они формируют

мелкие, непрозрачные, зернистые колонии с зо-

ной полного гемолиза, диаметр которого в не-

сколько раз превышает диаметр самой колонии.

S. agaiactiae (группа В) обычно обитают на

слизистой влагалища, могут вызывать послеро-

довые инфекции, сепсис, менингиты новорож-

денных, стоматиты. На кровяном агаре вокруг

колоний образуется узкая зона р-гемолиза. Ге-

молитическая активность резко возрастает, если

рядом растут штаммы стрептококков или стафи-

лококков, обладающие гемолитической актив-

ностью (САМР-тест). Для этого на чашку с кро-

вяным агаром (5 % бараньих эритроцитов)

наносят по диаметру чашки культуру S. aureus,

а затем в виде полос перпендикулярно к стафи-

лококку ряд изучаемых культур стрептококка.

Только S. agaiactiae образует зону усиленного

гемолиза.

S. faecalis (группа D), являясь нормальными

обитателями кишечного тракта, могут быть при-

чиной сепсиса, перитонита, острых поражений

кишечника, раневых инфекций, эндокардитов,

поражений мочевыводящих путей (см. табл. 68).

Стрептококки других групп (гемолитические

и зеленящие) могут вызывать легко протекаю

1

щие воспалительные процессы, иногда являясь

п р и ч и н о й длительно текущих эндокардитов.

Определенные виды зеленящих стрептококков

рассматривают как возбудителей кариеса зубов,

некоторых заболеваний слизистой ротовой поло-

сти. Тесты их ориентировочной дифференциа-

ции — см. табл. 66.

S. pneumoniae, согласно современной класси-

фикации, включен в род стрептококка на уровне

вида. S. pneumoniae является причиной острой

долевой пневмонии, сепсиса, острых синуситов,

отитов, а также бактериального менингита.

Пневмококки — ланцетовидные, грамполо-

жительные диплококки с заостренными наруж-

ными концами, каждая пара кокков окружена

капсулой, часто видны короткие и длинные

цепочки. Для выделения пневмококков исполь-

зуют питательный агар на гидролизате Хоттин-

гера (аминный азот 1,6—1,7 г/л, рН 7,6), содер-

жащий 5 % крови (кролика, барана, человека)

и 5—10 % дрожжевого экстракта. На кровяном

агаре колонии пневмококка гладкие, блестящие,

полупрозрачные, плоские, 0,5—1 мм в диаметре,

окружены зеленящей зоной а-гемолиза. С воз-

растом центр колоний подвергается аутолизу

и западает, колонии приобретают вид «шашки».

Встречаются слизистые сливные колонии. Для

дифференцирования от других зеленящих стреп-

тококков используют способность S. pneumoniae

ферментировать инулин, чувствительность к

оптохину и желчи (см. табл. 66).

По капсульному полисахариду пневмококки

делятся на 83 типа. Для серологического типи-

рования используют реакцию набухания кап-

сулы по Нейфельд или реакцию агглютинации

на стекле с поливалентными, групповыми и типо-

выми сыворотками. Метод проведения серологи-

ческого анализа и обозначение капсульных ва-

риантов приложены к наставлению по примене-

нию диагностических сывороток.

Оптохиновый тест. Чистую культуру засе-

вают на агар, содержащий 1 : 50 000—1 : 100000

оптохина. На следующие сутки учитывают ре-

зультат. Пневмококки не растут в присутствии

оптохина. Можно использовать бумажные диски

336

Т а б л и ц а 67. Основные дифференциальные свойства некоторых видов стрептококков

П р и м е ч а н и я . 1 — прозрачная зона гемолиза вокруг колоний на агаре с 5 % крови; 2 — зеленоватое

окрашивание и частичный гемолиз вокруг колоний; 3 — нет гемолиза на агаре с кровью; 4 — серотипирование

стрептококков группы А проводят с помощью преципитирующих стрептококковых сывороток группы А, вы-

пускаемых ИЭМ им. Н. Ф. Гамалеи АМН СССР.

Т а б л и ц а 68. Схема дифференциальной диагностики энтерококков

Тест, субстрат

См. Седов В. И. Методические рекомендации по выделению и идентификации энтерококков.— М., 1982.

S.faecium var. durans.

12 п/р. В. В. Меньшикова

337

Т а б л и ц а 69. Основные свойства некоторых

видов рода Peptococcus

Т а б л и ц а 70. Основные свойства некоторых

видов рода Peptostreptococcus

П р и м е ч а н и е . ( + ) — слабая реакция.

Т а б л и ц а 71. Дифференциация представите-

лей рода Bacillus

с 6 мкг оптохина, которые накладывают после

посева на поверхность среды (посев лучше

проводить секторами). Пневмококки вокруг

диска образуют зону задержки роста не менее

18

 мм.

Желчный тест основан на способности 10 %

желчи и 2 % раствора оксихолатов лизировать

пневмококк. В две пробирки с 2—3 мл сыворо-

точного бульона с 10 % желчи крупного рога-

того скота и без нее добавляют 0,5—1 мл испы-

туемой бульонной культуры и выдерживают

1 ч при 37 °С. При лизисе пневмококка отмеча-

ется просветление бульона по сравнению с конт-

ролем. При сомнительном результате пробирки

оставляют при комнатной температуре до сле-

дующего дня и проводят окончательный учет

результатов.

7.4.6. Грамположительные

анаэробные кокки

Представители семейства пептококковых

обитают на слизистых ротовой полости, пищева-

рительного, респираторного, урогенитального

тракта человека и животных. При определенных

условиях могут вызывать тяжелые заболевания

в ассоциации с другими микроорганизмами.

В  р о д  п е п т о к о к к а (Genus Peptococ-

cus) — анаэробные микрококки — включены виды:

P. niger, P. asaccharalyticus, P. activus, P. апае-

robius, P. aerogenes. По морфологии грамполо-

жительные кокки располагаются поодиночке,

парами, группами. Цепочек никогда не обра-

зуют, неподвижные, спор не образуют, ана-

эробы. Растут на специальных средах для ана-

эробов ' в анаэростате. Гемолиз отсутствует.

Реакции на каталазу и редукцию нитратов поло-

жительные.

Дифференциация видов представляет боль-

шие трудности и основывается на комплексе

свойств (табл. 69).

В  р о д  п е п т о с т р е и т о к о к к а (Genus

Peptostreptococcus) — анаэробные стрептокок-

ки — включены виды: P. anaerobius, P. productus;

P. lanceolatus, P. micros, P.  p a r v u l u s . По мор-

фологии это грамположительные кокки, распо-

лагающиеся парами или цепочками разной

длины, неподвижны, спор не образуют, ана-

эробы. Для выращивания их используют специ-

альные среды для культивирования анаэробов

 2

.

Реакции их на каталазу и редукцию нитратов

отрицательные. Дифференциация видов пред-
ставляет большие трудности (табл. 70).

7.4.7. Грамположительные аэробные

и факультативно-анаэробные палочки

Р о д  б а ц и л л а  ( B a c i l l u s ) состоит

из 48 видов', но лишь несколько видов можно

рассматривать как имеющие значение в патоло-

П р и м е ч а н и я . 1 — В. cereus var. mycoides

обычно неподвижен; 2 — вирулентные штаммы.

1

 См. с. 315.

2

 См. с. 315.

338