Главная Учебники - Медицина Лабораторные методы исследования в клинике: справочник (Меньшиков В.В.) - 1987 год
поиск по сайту правообладателям
|
|
|
содержание .. 84 85 86
ка, соответствующую рекомендациям ВОЗ (за исключением дисков с карбенициллином, кото- рые содержат 2 концентрации — 25 мкг для определения чувствительности у штаммов Е. coli и Proteus и 100 мкг для штаммов Ps. aeruginosa). На одну чашку следует поме- щать 6—10 дисков на равном расстоянии друг от друга и на расстоянии 2 см от края чашки. Чашки инкубируют при 37°С в течение 18 ч в перевернутом вверх дном положении. Учет результатов производят, измеряя с помощью линейки диаметры зоны задержки роста микробов вокруг дисков, включая диаметр диска. Метод определения чувствительности с по- мощью дисков является качественным, позво- ляющим разделить испытуемые культуры на чувствительные и устойчивые. Вместе с тем уста- новлена корреляционная зависимость между размерами зон задержки роста микробов и зна- чениями МПК антибиотика, что позволяет оце- нить количественно степень чувствительности изучаемого штамма (табл. 75) . 7.5.2. Метод разведений в питательных средах Количественный метод определения чувстви- тельности к антибиотикам позволяет установить минимальную подавляющую концентрацию пре- паратов. Имеются две модификации метода: разведение в плотных и жидких питательных средах. Из стандарта антибиотиков готовят основ- ной раствор. Для этого навеску препарата в 5—10 мг рас- творяют в дистиллированной воде или соответ- ствующем растворителе так, чтобы в 1 мл содер- жалось 1000 мкг препарата. Затем из основного раствора готовят серию разведений антибиотика в питательных средах. М е т о д р а з в е д е н и й в п л о т н о й п и - т а т е л ь н о й с р е д е . Плотную питательную среду (среды для определения чувствитель- ности бактерий к антибиотикам) разливают во флаконы по 100 мл при определении чувстви- тельности одновременно у 100 культур. При меньшем количестве испытуемых культур можно использовать меньшие объемы питательной среды. В каждый флакон вносят 1,5—2 мл буль- она, содержащего такое количество антибиотика, чтобы в 1 мл среды создавалась заданная кон- центрация препарата (например, в 100 мл среды вносят 10 000 мкг антибиотика в объеме 1,5—2мл, тогда в 1 мл среды будет содержаться 100 мкг препарата). Тщательно перемешивают и разли- вают в чашки Петри примерно по 20 мл. На поверхность подсушенного агара с помощью штампа-репликатора наносят испытуемые куль- ры или взвесь с 18-часовой агаровой культуры, 1 См. Методические указания по определе- нию чувствительности.— М., 1983. по мутности соответствующей стандарту № 10 ГКИ им. Л. А. Тарасевича. Можно разделить чашку на сектора и посев культур производить штрихом. Чашка с питательной средой, не содержа- щая антибиотика, является контролем роста культур. Чашки с посевом инкубируют при 37 °С 18—24 ч. Диапазон разведения антибиоти- ков зависит от установленных критериев чув- ствительности для испытуемого вида микроор- ганизмов. При учете результатов отмечают наимень- шую концентрацию антибиотика, задерживаю- щую рост испытуемой культуры (МПК). Метод двукратных разведений в жидкой питательной среде. Готовят серию двукратных разведений антибиотика в мясо-пептонном буль- оне или бульоне, приготовленном на переваре Хоттингера, который разливают в 10 пробирок по 2 мл. В первую пробирку вносят 2 мл раст- вора антибиотика определенной концентрации, тщательно перемешивают и 2 мл из этой про- бирки переносят в следующую и так далее до предпоследней пробирки, из которой 2 мл уда- ляют. Затем во все 10 пробирок вносят по 0,2 мл суточной бульонной культуры или взвеси, содер- жащей 10 5 —10 6 микробных тел в 1 мл, приготов- ленной путем смыва бульоном из 18-часовой агаровой суточной культуры. Последняя про- бирка не содержит антибиотика и является контролем роста культуры. Пробирки инкуби- руют при 37 °С в течение 18—24 ч. При учете результатов отмечают последнюю пробирку, в которой наблюдается полная задержка роста микробов. Концентрация антибиотика в 1 мл среды соответствует МПК по отношению к испы- туемой культуре и определяет степень ее чув- ствительности к антибиотику. Выбор метода определения чувствительности к антибиотикам у испытуемых культур зависит от целей исследования и возможности лабора- тории. Наиболее доступным и простым является метод диффузии в агар с применением дисков. Он широко используется в повседневной лабо- раторной практике. Однако результаты, полу- чаемые этим методом, можно расценивать как качественные. Метод серийных разведений дает более точные количественные результаты, позволяющие сопоставить чувствительность изу- чаемой культуры, определенную лабораторным путем, с дозами препаратов, достигаемыми в ор- ганизме больного. Этот метод более трудоемок, чем метод дисков, требует большей затраты времени и посуды. Его используют в повседнев- ной лабораторной практике при необходимости получения количественных показателей чувстви- тельности выделенного возбудителя для разра- ботки индивидуального режима применения препаратов больным. Метод разведения в плотной питательной среде позволяет одновременно определять чув- ствительность у 25 —30 штаммов микроорганиз- мов. Этот метод позволяет также определять 343 |