Главная Учебники - Медицина Лабораторные методы исследования в клинике: справочник (Меньшиков В.В.) - 1987 год
поиск по сайту правообладателям
|
|
|
содержание .. 68 69 70 71 ..
У ч е т р е а к ц и и . Появление агглютина- ции указывает на наличие неполных антител на поверхности эритроцитов. Реакция может быть проведена в пробирках. В этом случае 2 капли (0,1 мл) различного разведения антиглобулиновой сыворотки (в зависимости от титра преципитинов) помещают в пробирки и добавляют каплю отмытых эритроцитов. Осто- рожно встряхивают и инкубируют 30 мин при 37 °С. У ч е т р е а к ц и и проводят после центри- фугирования при 1500 об/мин в течение 1 мин (центрифуга ЦЛК-1). Непрямая реакция Кумбса. Х о д о п р е д е - л е н и я . Из локтевой вены исследуемого берут 3 мл крови в чистую сухую пробирку. Р е а к ц и я и д е т в д в а э т а п а : первый — сенсибилизация стандартных эритро- цитов неполными антителами, предположитель- но находящимися в исследуемой сыворотке; второй — агглютинация сенсибилизированных эритроцитов антиглобулиновой сывороткой. Необходимо использовать троекратно отмы- тую в изотоническом растворе смесь эритроцитов различных аллотипов 0(1) группы резусположи- тельных. Каплю этих эритроцитов вносят в про- бирку и на них наслаивают 3 капли исследуемой сыворотки. Пробирки энергично встряхивают и помещают в термостат при 37 °С на 40 мин. Параллельно опыту ставят контрольные пробы. Первая: в пробирку с 2 каплями стандартных отмытых резусположительных эритроцитов 0(1) группы вносят 3 капли антирезусной сыворотки АВ (IV); вторая: в пробирку с 2 каплями отмытых стандартных резусотрицательных эритроцитов 0(1) вносят 3 капли сыворотки AB(IV). Контрольные пробирки помещают, так же как и опытные, в термостат при 37 °С на 40 мин. После термостатирования из пробирок осторожно отсасывают сыворотку. Эритроциты трижды отмывают в изотоническом растворе натрия хлорида. На сухую чистую тарелку наносят в 3 точках по 1 капле антиглобулиновой сыворотки. В первую каплю добавляют эритро- циты, сенсибилизированные сывороткой пациен- та, во вторую и третью — эритроциты контроля 0(1) резусположительных с антирезусной сыво- роткой A B ( I V ) и 0(1) резусотрицательные с антирезусной сывороткой A B ( I V ) . Эритроциты тщательно перемешивают стеклянной палочкой с антиглобулиновой сывороткой. После этого осторожно покачивают тарелку в течение 10 мин, но не более. У ч е т р е а к ц и и . При наличии в сыворот- ке пациента неполных антител в опытной смеси будет наблюдаться агглютинация. Контроль с резусположительными 0(1) эритроцитами дол- жен дать агглютинацию. В контроле с резусот- рицательными 0(1) эритроцитами агглютинации не должно быть. В ряде случаев неполные анти- тела вступают в реакцию при низкой температу- ре (4 °С), о чем необходимо помнить в исследо- ваниях при подозрении на холодовую иммунную цитопению. К л и н и ч е с к о е з н а ч е н и е . Выявление антител к эритроцитам играет ведущую роль в диагностике аутоиммунных гемолитических анемий, эссенциальных или вторичных. При системных заболеваниях (системная красная волчанка, хронический активный гепа- тит, болезнь Шегрена) бывает чаще положи- тельной непрямая реакция Кумбса. 6.2.2. Резус-фактор Реакция конглютинации с применением же- латина. П р и н ц и п . Эритроциты с наличием резус-антигена агглютинируют в среде с непол- ным антирезус-антителами в присутствии анти- глобулиновой сыворотки. Р е а к т и в ы . 1. Групповые (по системе АВО) антирезусные сыворотки. 2. Стандартные эритроциты всех групп системы АВО. 3. 10 % раствор желатина (ампулированный). Х о д о п р е д е л е н и я . Кровь из локтевой вены необходимо брать в две пробирки. В одну пробирку с предварительно внесенным 1 мл 5 % раствора цитрата натрия — 3 мл, в другую — только 3 мл крови. Пробирки должны быть тщательно промаркированы. В сопроводитель- ном направлении указывают полностью фами- лию, имя, отчество и группу крови пациента. Кровь, смешанная с цитратом натрия, слу- жит источником эритроцитов. По одной капле (0,05 мл) исследуемых эритроцитов вносят в 3 химические пробирки. В первые две добавляют 0,1 мл антирезусной сыворотки различной серии соответствующей группы крови. Далее во все три пробирки доливают 0,1 мл (2 капли) 10 % раствора желатина, предварительно прогретого на водяной бане температуры 40—45 °С. Таким образом, 3-я пробирка, в которой находятся .только эритроциты и желатин, служит контро- лем на спонтанную агглютинацию в присутствии желатина. В целях одновременного определения резус-антител используются стандартные эрит- роциты 0(1) группы резусположительные, в ко- торые добавляют сыворотку крови из пробирки без раствора цитрата и то же (что и в трех предыдущих пробирках) количество желатина. В качестве контроля необходимо использовать стандартные резусположительные и отрица- тельные эритроциты всех 0(1), А ( I I ) , В(III), AB(IV) групп крови. Содержимое всех пробирок осторожно перемешивают, встряхивают и поме- щают в термостат при 46—48 °С на 30 мин. После термостатирования во все пробирки вно- сят по 8 мл 0,85 % раствора хлорида натрия и перемешивают осторожным ротированием. У ч е т р е з у л ь т а т о в . Результат можно считать достоверным только при совпадении его в обеих пробирках разных серий антирезусной сыворотки и правильно прошедших контролях. Агглютинация эритроцитов в первых двух про- бирках, видимая в проходящем свете или под микроскопом (в сомнительных случаях), указы- вает на наличие резус-антигена. Склеивание эритроцитов в 4-й пробирке документирует не- полные резус-антитела в сыворотке исследуе- мого. Если происходит агглютинация в 3-й пробирке, содержащей только эритроциты и же- латин, результат реакции в первых двух пробир- 279 |