Главная Учебники - Медицина Лабораторные методы исследования в клинике: справочник (Меньшиков В.В.) - 1987 год
поиск по сайту правообладателям
|
|
|
содержание .. 40 41 42 43 ..
4.4.14. Одностадийное определение фактора V Метод Оврена. П р и н ц и п . Определяется протромбиновое время свертывания разведен- ной исследуемой плазмы при компенсации воз- можного дефицита всех факторов протромбино- вого комплекса, кроме фактора V. Р е а к т и в ы . 1. 3,8 % раствор цитрата нат- рия (см. 4.1). 2. 0,025 моль/л раствор хлорида кальция (см. 4.4.2). 3. Тромбопластин-кальцие- вая смесь (см. 4.4.4). 4. Буфер Михаэлиса рН 7,35 (см. 4.3.5). 5. Субстратная плазма: цитратная бестромбоцитарная плазма больного с тяжелой недостаточностью фактора свертыва- ния V. Плазма, лишенная фактора V, может быть приготовлена также искусственно. Для этого венозную кровь здорового человека сме- шивают с реактивом Винтроба (см. 4.4.12) в соотношении 9 : 1 , после чего центрифугируют 20 мин при 4500—6000 об/мин. Супернатант от- сасывают, разливают в пробирки по 3—5 мл, герметично закрывают последние и инкубируют при 37 °С в течение 18—36 ч, периодически проверяя протромбиновое время плазмы. Инку- бацию прекращают, когда оно станет равным 60 с и более. В такой плазме сохраняются фак- торы II, V I I и X, но отсутствует фактор V. При- готовленную субстратную плазму разливают по 1—3 мл в пенициллиновые флаконы, укупори- вают их и хранят при —20 °С. О б о р у д о в а н и е . 1 . Водяная баня на 37 °С. 2. Секундомеры. М а т е р и а л д л я и с с л е д о в а н и я . Тромбоцитная плазма. Х о д о п р е д е л е н и я . Исследование про- водят так же, как при одностадийном определе- нии фактора II (см. 4.4.13), но вместо субстрат- ного реактива используют субстратную плазму, лишенную фактора V. Построение калибровоч- ной кривой и определение по ней содержания фактора V в исследуемой плазме проводят так же, как при определении фактора I I . К л и н и ч е с к о е з н а ч е н и е . Снижение уровня фактора V наблюдается при наследст- венном дефиците фактора V, а также при ряде заболеваний, сопровождающихся нарушением его синтеза (болезни печени), повышенным по- треблением (внутрисосудистое свертывание кро- ви) или расщеплением (активация системы фиб- ринолиза). Л и т е р а т у р а . Баркаган 3. С. Исследо- вание системы гемостаза в клинике (методи- ческие указания).— Барнаул, 1975, с. 127—130; Methodes d'exploration et diagnostic pratique.— Paris, 1968, p. 120—122, 129. 4.4.15. Одностадийное определение фактора V I I Метод Оврена. П р и н ц и п . Определяется протромбиновое время разведенной исследуемой плазмы при компенсации возможного дефицита всех факторов протромбинового комплекса, кроме фактора V I I . Р е а к т и в ы . 1. 3,8 % раствор цитрата нат- рия (см. 4 . 1 ) . 2. 0,025 моль/л раствор хлорида кальция (см. 4.4.2). 3. Буфер Михаэлиса рН 7,35 (см. 4.3.5). 4. Тромбопластин и тромбопластин- кальциевая смесь (см. 4.4.4). 5. Субстратная плазма (цитратная бестромбоцитарная плазма больного с тяжелой недостаточностью фак- тора V I I ) . О б о р у д о в а н и е . 1. Водяная баня на 37 °С. 2. Секундомеры. М а т е р и а л д л я и с с л е д о в а н и я . Тромбоцитарная плазма. Х о д о п р е д е л е н и я . Исследование про- водят так же, как при определении активности фактора V. К л и н и ч е с к о е з н а ч е н и е . Уменьше- ние содержания (активности) фактора V I I на- блюдается при врожденном дефиците или моле- кулярном дефекте фактора VII, приеме непря- мых антикоагулянтов, паренхиматозных пора- жениях печени и К-витаминной недостаточности (механическая желтуха, кишечный дисбакте- риоз). П р и м е ч а н и е . В качестве субстратной плазмы можно использовать также профиль- трованную через фильтр Зейтца нормальную плазму (см. 4.4.12). В ней отсутствуют фак- торы V I I и X, поэтому с применением описан- ного принципа можно оценить суммарную ак- тивность факторов V I I и X. После этого сле- дует определить лебетокс-время испытуемой плазмы и таким образом отдифференциро- вать недостаточность фактора V I I (лебетокс- время нормальное) от недостаточности фак- тора X (лебетокс-время удлиненное). вание системы гемостаза в клинике (методи- ческие указания).— Барнаул, 1975, с. 130—132, 135; Caen J., Larrieu М. 1., Samama M. L'hemo- stase. Methodes d'exploration et diagnostic pra- tique.—Paris, 1968, p. 125—127, 129. 4.4.16. Методы, характеризующие концентрацию (активность) антикоагулянтов Наибольшее значение имеют методы опреде- ления циркулирующих антикоагулянтов (см. примечание 4.4.3) и антитромбинов. Из числа быстродействующих антитромбинов наиболее известными являются гепарин (точнее образую- щийся при его введении комплекс гепарин — ан- титромбин I I I ) и продукты деградации фибрин- (оген)а, а из медленно действующих — анти- тромбин I I I . Методы определения продуктов де- градации фибрина рассмотрены в подразделе 4.5, а методы определения антитромбина I I I не приводятся, так как они очень трудоемкие (коагулологические) или требуют применения иностранных реактивов (амидолитические, иммунологические). Определение концентрации гепарина в плаз- ме. П р и н ц и п . Определяют минимальную концентрацию протамина сульфата, необходи- мую для нейтрализации гепарина в исследуемой 167 |