Главная Учебники - Медицина Лабораторные методы исследования в клинике: справочник (Меньшиков В.В.) - 1987 год
поиск по сайту правообладателям
|
|
|
содержание .. 39 40 41 42 ..
субстратная. Смесь равных количеств 5—10 об- разцов бестромбоцитной плазмы здоровых лю- дей (готовят заранее и хранят небольшими порциями при —20 °С). 5. Плазменный компо- нент здорового человека. Смешивают 3 г геля гидроокиси алюминия фабричного производства с 4 мл дистиллированной воды, а затем разводят буфером (см. 4.3.5) в соотношении 1 : 4 (разве- дение в 5 раз). После этого к 4,5 мл цитратной нормальной бестромбоцитной плазмы добав- ляют 0,5 мл приготовленной суспензии гидро- окиси алюминия, ставят смесь в водяную баню при 37 °С и помешивают стеклянной палочкой в течение 3 мин. Далее смесь центрифугируют при 3000 об/мин в течение 5—10 мин, отсасы- вают адсорбированную плазму (протромбиновое время такой плазмы должно быть не менее 2—2'/2 мин; если оно короче, то процедуру ад- сорбции повторяют), разливают небольшими порциями в пластиковые или стеклянные сили- коновые пробирки, укупоривают и заморажи- вают при —20 °С. В адсорбированной плазме сохраняются факторы I, V, V I I I , XI и X I I , но отсутствуют факторы II, V I I , IX и X. Адсорби- рованную плазму (алюминиевую) перед работой размораживают и разводят 0,85 % раствором хлорида натрия в соотношении 1 : 4 (разведение в 5 раз). 6. Сывороточный компонент здорового человека. Готовят заранее сыворотку крови здо- рового человека (см. 4.1), расфасовывают ее по 1—2 мл и замораживают при — 20 °С. В ней сохраняются факторы V I I , IX, X, XI и XII, но отсутствуют факторы II, V и V I I I . Перед работой нормальную сыворотку размораживают и раз- водят 0,85 % раствором хлорида натрия в соот- ношении 1 : 9 (разведение в 10 раз). 7. Тромбо- цитарный компонент здорового человека. Оса- док тромбоцитов, получаемый после центрифу- гирования 5—6 мл тромбоцитной плазмы при 4 °С в течение 15—20 мин при 3000—4000 об/мин и отсасывания бестромбоцитной плазмы, заливают 5—6 мл охлажденного (4 °С) 0,85 % раствора хлорида натрия, взбалтывают и цент- рифугируют на холоде при том же режиме. Над- осадочную жидкость отбрасывают, еще дважды повторяют процедуру отмывания тромбоцитов, а затем к осадку тромбоцитов добавляют 0,85 % раствор хлорида натрия в объеме, равном объ- ему взятой тромбоцитной плазмы, и с помощью стеклянной палочки готовят суспензию тромбо- цитов. О б о р у д о в а н и е . 1. Водяная баня на 37 °С. 2. Секундомеры. М а т е р и а л д л я и с с л е д о в а н и я . Плазменный, сывороточный и тромбоцитарный компоненты обследуемого (готовят так же, как соответствующие компоненты здорового чело- века). Х о д о п р е д е л е н и я . Составляют сле- дующие 5 рядов смесей: 1-й ряд (плазмен- ный) — адсорбированная плазма больного + + сыворотка здорового + суспензия тромбо- цитов здорового; 2-й ряд (сывороточный) — адсорбированная плазма здорового + сыво- ротка больного + суспензия тромбоцитов здо- рового; 3-й ряд (плазменно-сывороточный) — адсорбированная плазма больного + сыворот- ка больного + суспензия тромбоцитов здоро- вого; 4-й ряд (тромбоцитарный) — адсорбиро- ванная плазма здорового + сыворотка здоро- вого + суспензия тромбоцитов больного; 5-й ряд (контрольный) — адсорбированная плазма здорового + сыворотка здорового + суспензия тромбоцитов здорового. Т е с т и р о в а н и е всех рядов проводят одинаково, начиная с контрольного ряда. В 5— 6 пробирок разливают по 0,1 мл раствора хло- рида кальция и устанавливают пробирки в во- дяную баню. Ставят туда же пробирку с 0,6— 0,8 мл субстратной плазмы (пул-плазмы). В но- вую пробирку набирают 0,2 мл адсорбированной нормальной плазмы, 0,2 мл нормальной сыво- ротки и 0,2 мл нормальной суспензии тромбо- цитов. Компоненты перемешивают, ставят про- бирку в водяную баню, добавляют 0,2 мл раст- вора хлорида кальция и немедленно включают секундомер. Через 2 мин 0,1 мл смеси переносят в одну из пробирок, содержащую 0,1 мл раст- вора хлорида кальция, и вводят туда же 0,1 мл прогретой субстратной плазмы. В момент добав- ления субстратной плазмы включают второй секундомер и отмечают время образования сгустка. Исследование повторяют через 4; 6; 8; 10 и 12 мин инкубации смеси (результат обыч- но регистрируется на 4-й и 6-й минуте). Подоб- ным образом исследуют и все остальные ряды. Н о р м а л ь н ы е в е л и ч и н ы . Наиболее короткое время варьирует в пределах 7—11 с и регистрируется на 4-й или 6-й минуте инку- бации. К л и н и ч е с к о е з н а ч е н и е . Возмож- ные результаты теста в зависимости от недоста- точности охватываемых им факторов (включая формы, обусловленные появлением ингибиторов факторов) представлены в табл. 37. Т а б л и ц а 37. Результаты теста генерации тромбопластина при различных нарушениях свертывания крови сле- дуе- мые ряды 1-й 2-й 3-й 4-й Показания теста при различных наруше- ниях свертывания крови дефицит факторов V I I I Нару- шение Нор- ма Нару- шение Нор- ма IX Нор- ма Нару- шение » Нор- ма XI + XII Нор- ма » Наруше- ние Норма фактор 3 тром- боци- тов Нор- ма » » Нару- шение ингибито- ры факто- ров свер- тывания Наруше- ние » » Норма П р и м е ч а н и е . Тест генерации тромбо- пластина чувствительнее к нарушениям тромбопластинообразования, чем АЧТВ (см. 4.4.3) и основанные на его определении кор- рекционные пробы, но и он выявляет лишь 163 |