Главная Учебники - Медицина Лабораторные методы исследования в клинике: справочник (Меньшиков В.В.) - 1987 год
поиск по сайту правообладателям
|
|
|
содержание .. 28 29 30 31 ..
Метод 3: в пробирку помещают 0,3—0,5 мл раствора краски 2 и 5—6 капель крови пипеткой от аппарата Паиченкова. Пробирку закрывают резиновой пробкой, смесь тщательно, но осто- рожно перемешивают и оставляют на I — l'/2 ч (лучше окрашиваются ретикулоциты при экс- позиции 1 1/2—3 ч). Перемешивают и готовят тонкие мазки. П о д с ч е т р е т и к у л о ц и т о в . В маз- ках эритроциты окрашены в желтовато-зелено- ватый цвет, зернисто-нитчатая субстанция — в синий или синевато-фиолетовый цвет. Приготовленные одним из указанных выше способов мазки микроскопируют с иммерсион- ным объективом. Необходимо подсчитать не ме- нее 1000 эритроцитов и отметить среди них коли- чество эритроцитов, содержащих зернисто-нит- чатую субстанцию. Практически для большей точности пользуются специальным окуляром, в котором можно уменьшить поле зрения до тре- буемых размеров. При равномерных тонких маз- ках, в которых эритроциты расположены в один ряд, подбирают такое поле зрения, в котором имеется, например, 50 эритроцитов, и затем про- считывают 20 таких полей зрения. При отсутствии готового окуляра его можно легко приготовить, для чего отвинчивают окуляр 7Х, вкладывают в него кусок бумаги с выре- занным небольшим квадратиком и завинчивают. Количество подсчитанных ретикулоцитов выра- жают на 1000 или на 100 эритроцитов. Подсч|ет количества ретикулоцнтов при по- мощи люминесцентной микроскопии. П р и н - ц и п . Использование способности субстанции ретикулоцитов флюоресцировать после обра- ботки крови акридиновым оранжевым. Р е а к т и в ы . 1. Раствор акридинового оранжевого на изотоническом растворе хлорида натрия и концентрации 1 : 5000. Для приготов- ления изотонического раствора рекомендуют ис- пользовать дистиллированную воду рН 5,8—6,8, Раствор акридинового оранжевого должен быть свежим; хранят его не более 3—5 дней в темном флаконе с притертой пробкой. 2. Нефлюоресци- рующее иммерсионное масло. Можно использо- вать афлуоль или обычное иммерсионное масло с флюоресценцией, погашенной нитробензолом (0,3 мл нитробензола на 1 мл масла). Ю. Н. Зуб- жицкий в качестве нефлюоресцирующего масла предлагает использовать перегнанный анизол. С п е ц и а л ь н о е о б о р у д о в а н и е . Микроскоп ультрафиолетовый МУФ-ЗМ или лю- минесцентный. Х о д о п р е д е л е н и я . Кровь смешивают с акридиновым оранжевым в пробирке или смеси- теле в соотношении 1 часть крови и 10 частей краски (смесь можно хранить не более 5 ч). Смесь перемешивают в течение 2 мин, каплю смеси наносят на предметное стекло и накрыва- ют покровным стеклом. Микроскопируют с по- мощью светофильтра ЖС-17. В препарате эритроциты не флюоресцируют, а в ретикулоци- тах зернисто-нитчатая субстанция светится ярко-красным цветом. Замечено, что в крови, стабилизированной гепарином или цитратом натрия, флюоресценции ретикулоцитов не на- блюдается. Метод отличается простотой и тре- бует немного времени; благодаря яркому свече- нию ретикулоциты легко подсчитать. Н о р м а л ь н ы е в е л и ч и н ы . У здоро- вых число ретикулоцитов составляет 2—12 0 / 0 о, или 0,2—1,2 %. К л и н и ч е с к о е з н а ч е н и е . Число рети- кулоцитов в крови отражает регенеративные свойства костного мозга, и оценка его широко используется при различных анемиях (см. табл. 24). Повышение количества ретикулоци- тов наблюдается после кровопотери, при гемо- литических анемиях, особенно в период криза (количество ретикулоцитов может быть 20— 30 %), а также на фоне лечения анемии Адди- сона—Бирмера витамином В12 (ретикулоци- тарный криз — подъем числа ретикулоцитов на 4—8-й день лечения). Снижение количества ретикулоцитов характерно для гипопластиче- ской анемии, редицива анемии Аддисона— Бирмера. Определение количества ретикулоцитов мо- жет быть использовано для определения про- дукции эритропоэза и вычисления срока жизни эритроцитов. Л и т е р а т у р а . Гомзякова Н. В. Лаб, дело, 1960, № 5, с. 38—39; Зубжицкий Ю. Н. Лаб. дело; 1967, № 2, с. 35; Кориков П. Н. Лаб. дело, 1961, № 4, с. 10. 180 г, дистиллированная вода — до 2 л. Раствор можно хранить в закрытой посуде в холодиль- нике в течение нескольких месяцев. Основной раствор разводят в 10 раз и полу- чают раствор, соответствующий по своей осмо- тической концентрации 1 % раствору хлорида натрия. Из этого раствора готовят рабочие раст- воры хлорида натрия следующих концентраций: 0,85; 0,75; 0,70; 0,65; 0,60; 0,55; 0,50; 0,45; 0,40; 0,35; 0,30; 0,20; 0,10%. Можно приготовить по 100 мл этих рабочих растворов и сохранять их в холодильнике. Годны в течение 2 нед. С п е ц и а л ь н о е о б о р у д о в а н и е . 1 . Фотоэлектроколориметр. 2. Термостат на 37 "С. 119 3.3.7. Резистентность эритроцитов Для оценки физико-химических свойств эрит- роцитов исследуют стойкость (резистентность) эритроцитов к различным воздействиям. Наи- большее распространение в клинической прак- тике получило исследование осмотической ре- зистентности эритроцитов. Унифицированный метод определения осмо- тической резистентностн эритроцитов в модифи- кации Л. И. Идельсона (1974). П р и н ц и п . Количественное определение степени гемолиза эритроцитов в забуферных гипотонических раст- ворах хлорида натрия. Р е а к т и в ы . Основной раствор (по своей осмотической концентрации соответствует 10 % раствору хлорида натрия) имеет рН 7,4, состав раствора: двузамещенный фосфат натрия |