Лабораторные методы исследования в клинике (Меньшиков В.В.) - часть 29

К л и н и ч е с к о е  з н а ч е н и е . Резуль-

таты эрнтроцитометрии являются важными для

уточнения характера анемии (см. табл. 24).

При железодефицитной анемии, как правило,

имеют место микроцитоз эритроцитов до 30—50 %

и соответственно сдвиг эритроцитометрической

кривой влево. Увеличение процента микроцитов

наблюдается также при наследственном мнкро-

сфероцитозе, талассемии, свинцовом отравле-

нии. Увеличение числа макроцитов является

признаком макроцитарной анемии, наблюдаю-

щейся при В[2-дефицитных и фолиеводефицит-

ных состояниях. Количество макроцитов при

этих анемиях может достигать 50 % и более,

при этом в небольшом числе (1—3 %) обнару-

живают и мегалоциты (эритроциты с диаметром

12 мкм и более). Макроцитоз эритроцитов может

наблюдаться независимо от анемии при алко-

голизме, диффузных поражениях печени.

Л и т е р а т у р а . Гольдберг Д. И., Гольд-

берг Е. Д. Справочник по гематологии. 6-е

изд.— Томск, 1980, с. 72.

3.3.4. Общий объем эритроцитов

(гематокритная величина)

Гематокритная величина, или показатель ге-

матокрита, дает представление о соотношении

между объемами плазмы и форменных элемен-

тов крови (главным образом эритроцитов), по-

лученном после центрифугирования крови. При-

нято гематокритнои величиной выражать объем

эритроцитов. В качестве унифицированных ме-

тодов определения гематокритнои величины (ге-

матокрита) утверждены два метода: с помощью

микроцентрифуги и микрометод в модификации

И. Тодорова.

Унифицированный метод с помощью мнкро-

цеитрнфуги (1979).  П р и н ц и п . Центрифуги-

рование крови определенное время при постоян-

ном числе оборотов центрифуги с последующим

определением результата по специальной шкале.

Р е а к т и в ы . Антикоагулянты: гепарин —

5000 ЕД/мл разводят дистиллированной водой

в соотношении 1 : 5 или этилендиаминтетраук-

сусной кислоты динатриевая соль (ЭДТА Na2,

трнлон Б), 40 г/л.

О б о р у д о в а н и е . 1. Микроцентрифуга

МЦГ-8. 2. Капиллярные трубки (в комплекте

с центрифугой). Можно использовать капил-

ляры для определения С-реактивного белка.

Х о д  о п р е д е л е н и я . Предварительно

обработанный антикоагулянтом и высушенный

капилляр заполняют кровью из пальца (или ве-

нозной) на

 7

/8 длины. Укупоривают капилляр

с одного конца специальной пастой (можно

пластилином). Помещают в ротор центрифуги

так, чтобы укупоренные концы упирались в ре-

зиновую прокладку, и центрифугируют 5 мин

при 8000 об/мин. По отсчетной шкале, прило-

женной к центрифуге МЦГ-8, определяют гема-

токритную величину.

Унифицированный микрометод (модифика-

ция Я. Тодорова) (1979).  П р и н ц и п . Цент-

рифугирование крови определенное время при

постоянном числе оборотов центрифуги с после-

дующим определением результата по градуиро-

ванным капиллярам.

Р е а к т и в ы те же.

О б о р у д о в а н и е . 1. Центрифуга. 2. Пи-

петки от аппарата Панченкова (с отрезанным

верхним концом и длиной 10—11 см).

Х о д  о п р е д е л е н и я . В обработанную

антикоагулянтом и высохшую пипетку набирают

кровь из пальца (или венозную) до верхней мет-

ки (100 делений). Пипетку укупоривают, обтя-

гивая ее резиновым кольцом, и центрифугируют

30—40 мин при. 3000 об/мин. Результат отме-

чают по градуировке капилляра, вычитая из 100

высоту столбика эритроцитов.

Определение с помощью автомата. Иссле-

дование гематокрита входит в программу всех

известных гематологических автоматов и многих

счетных приборов.

П р и н ц и п . В автоматах используется кон-

дуктометрический метод (автомат SMA-7a)

либо центрифужный метод (автомат «Гемалог-

8"). В некоторых автоматах н счетных приборах

гематокрит определяют расчетным путем, исходя

из количества эритроцитов в 1 мкл крови и сред-

него объема одного эритроцита в 1 мкм

3

.

Х о д  и с с л е д о в а н и я соответствует ни-,

струкции, приложенной к прибору.

Н о р м а л ь н ы е  в е л и ч и н ы . У здоро-

вых гематокрит венозной и капиллярной крови

равен 40—48 % (или 0,40—0,48) для мужчин

и 36—42 % (или 0,36—0,42) для женщин.

К л и н и ч е с к о е  з н а ч е н и е . Показа-

тель широко используют для суждения о степени

анемии, при которой, как правило, отмечается

его снижение, иногда до значительных цифр

(20—25%). Выраженное повышение (55—65%)

характерно для эритремии, менее резкое увели-

чение (50—55 %) наблюдается при симптома-

тических эритроцитозах, сопутствующих вро-

жденным порокам сердца, легочной недостаточ-

ности, некоторым гемоглобинопатиям. Показа-

тель гематокрита дает представление о гемокон-

центрационных сдвигах, он снижается при гемо-

дилюции. Используют гематокрнт для расчетных

показателей, отражающих различные характе-

ристики эритроцитов: средний объем, средняя

концентрация гемоглобина (см. ниже), а также

для ряда биохимических показателей.

Л и т е р а т у р а . Тодоров Я. Клинические

лабораторные исследования в педиатрии. 3-е

изд.— София, 1961, с. 263.

3.3.5. Индексы эритроцитов

В клинической практике используют различ-

ные расчетные характеристики, отражающие

физико-химические свойства эритроцитов. Наи-

более широко применяют расчет цветового по-

казателя.

Цветовой показатель. Индекс отражает от-

носительное содержание гемоглобина в эритро-

цитах. Вычисляют цветовой показатель опреде-

лением отношения двух частных, полученных от

деления количества гемоглобина на количество

эритроцитов в норме и в исследуемой крови по

следующей формуле:

115

нормальное количество эритроцитов.

Если принять, что в норме в 100 мл крови со-

держится 16,7 % гемоглобина и 5000000 эрит-

роцитов в 1 мкл крови, то рассчитывают по фор-

муле:

В практической работе удобно пользоваться

для подсчета цветового показателя пересчет-

ными таблицами, а также номограммами.

Н о р м а л ь н ы е  в е л и ч и н ы . У здоро-

вых цветовой показатель находится в пределах

0,86—1,05.

К л и н и ч е с к о е  з н а ч е н и е .  П о вели-

чине цветового показателя принято делить ане-

мии на гипохромные, иормохромные и гипер-

хромные. Гипохромные анемии (с цветовым по-

казателем менее 0,86} широко распространены

н наблюдаются прежде всего при дефиците же-

леза, вызванном различными причинами. Осо-

бенно выраженной гипохромией (0,6 — 0,5 и

ниже) характеризуются железодефицитные ане-

мии, обусловленные хроническими кровопоте-

рями.

Менее выраженная гипохромия эритроцитов

(0,7 — 0,8) наблюдается при железодефицитной

анемии беременных, при инфекциях, опухолях,

Редко встречаются гипохромные анемии, не свя-

занные с дефицитом железа и обусловленные

нарушением синтеза гемоглобина в результате

свинцового отравления или наследственного по-

вреждения синтеза порфиринов и цепей глобина

(b-талассемии, а-талассемии н др.).

Повышение цветового показателя — гипер-

хромия — является характерным лабораторным

признаком различных Виг-дефицитных и фолие-

водефицитных анемий. Особенно выражена ги-

перхромия эритроцитов (1,2 — 1,3) при рецидиве

анемии Аддисона — Бирмера. Нормохромные

анемии наблюдаются при некоторых гемолитиче-

ских формах малокровия, острых кровопотерях,

лейкозах, сопутствуют циррозу печени.

Среднее содержание гемоглобина в эритро-

ците. Показатель отражает абсолютное содер-

жание гемоглобина в одном эритроците в пико-

граммах (пг). Определяют путем деления кон-

центрации гемоглобина в I мкл крови на число

эритроцитов в том же объеме.

Пример: концентрация гемоглобина в крови

равна 12 г/100 мл, количество эритроцитов в

1 мкл крови — 4 000 000 .

12 г % = 12000 мг/100 мл=12 мг в 1 мкл =

надо содержание гемоглобина в г/100 мл умно-

жить на 10 и разделить на число миллионов

эритроцитов в крови. Расчет показателя можно

произвести по номограмме (по Мазону). В сов-

ременных гематологических автоматах этот по-

казатель (МСН)' определяют расчетным путем.

Нормальные величины составляют 24—33 пг.

К л и н и ч е с к о е  з н а ч е н и е . Снижение

отражает гипохромию и наблюдается при желе-

зодефицитных анемиях, повышение имеет место

при макроцитарных и особенно мегалоцитарных

анемиях.

Л и т е р а т у р а . Тодоров Я. Клинические

лабораторные исследования в педиатрии. 3-е

изд., русск.—София, 1961, с. 272.

Средняя концентрация гемоглобина в эрит-

роците. Показатель отражает степень насыще-

ния эритроцита гемоглобином в процентах. Вы-

числяют путем деления концентрации гемогло-

бина в г/100 мл на гематокритную величину и

умножения на 100.

Пример: концентрация гемоглобина

12 г/100 мл, гематокрит 40 об. %.

Средняя концентрация . гемоглобина

1

 Для выявления гипохромии необходимым

условием является правильный подсчет числа

эритроцитов в крови.

1

 МСН — Mean Corpuscular Hemoglobin.

2

 МСНС — Mean Corpuscular Hemoglobin

Concentration.

116

Можно легко рассчитать, используя номо-

грамму по Мазону (рис. 6). Показатель включен

в программу современных гематологических ав-

томатов.

Н о р м а л ь н ы е  в е л и ч и н ы . МСНС ко-

леблется в пределах 30—38 %. Величина наибо-

лее константная, насыщения выше 38 % не

бывает.

К л и н и ч е с к о е  з н а ч е н и е . Снижение

показателя отражает абсолютную гипохромию

и является характерным для железодефицитных

анемий. Чувствительность этого индекса эритро-

цитов при железодефицитных анемиях состав-

ляет 85 %. Снижение показателя выявлено так-

же при макроцитарных и особенно мегалоцитар-

ных анемиях, когда объем эритроцитов увеличен

непропорционально более значительно по срав-

нению с увеличением насыщения эритроцитов

гемоглобином.

Рис. 6. Номограмма для вычисления индексов эритроцитов по Мазону [из кн.: М. М, Wintrobe.

Clinical Hematology. Ed. 4.—Filadelphia: Lea Fiebiger, 1956]. Объяснение в тексте.

Л и т е р а т у р а . Тодоров И. Клинические

лабораторные исследования в педиатрии.— Со-

фия, 1966, с. 341.

Средний объем эритроцитов. Показатель яв-

ляется важным при диагностике различных

форм малокровия. Вычисляют путем деления re-

матокритной величины на общее количество

эритроцитов в крови. Средний объем эритроци-

тов (MCV) ' выражают в кубических микронах

или кубических микрометрах.

П р и м е р : гематокрит — 40 об.% (или

0,40 мм

3

, или 400000000 мкм

3

); эритроциты

4 500 000 в 1 мкл;

' MCV — Mean corpusculare Volume.

Практически для вычисления показателя

надо величину гематокрита разделить на число

эритроцитов в миллионах н умножить на 10.

Можно расчет вести по номограмме.

В программе современных гематологических

комплексов и автоматов этот параметр опреде-

ляют либо кондуктометрически (отечественный

гематологический комплекс КГ-2), либо расчет-

ным путем.

Нормальные величины составляют 75—

95 мкм

3

.

П7

Н о р м а л ь н ы е  в е л и ч и н ы СДЭ

7,55±0,009 мкм.

К л и н и ч е с к о е  з н а ч е н и е . Показа-

тель значительно менее информативен, чем раз-

вернутые данные эритроцитометрии. Снижение

СДЭ наблюдается при резко выраженных же-

лезодефицитных анемиях, повышение — при ре-

цидиве анемии Аддисона — Бирмера и других

В12

Г

дефнцитных анемиях.

3.3.6. Ретикулоциты

Ретикулоцнты — молодые эритроциты, обра-

зующиеся после потери нормобластами ядер.

Характерной особенностью ретикулоцитов явля-

ется наличие в цитоплазме зернисто-нитчатой

субстанции, представляющей агрегированные

рибосомы и митохондрии. Эта субстанция выяв-

ляется при специальном методе окраски — суп-

равитальном, т. е. без предварительной фикса-

ции клеток. Зернисто-нитчатая субстанция в

различных рётикулоцитах отличается полимор-

физмом; чем клетка моложе, тем субстанция

более обильная. У самых молодых ретикуло-

цитов она имеет форму густого клубка, у более

зрелых клеток выявляется в виде сеточки, от-

дельных нитей и затем отдельных зерен. В маз-

ках, окрашенных обычными гематологическими

методами, ретикулоциты серовато-розового цве-

та — полихроматофильны, т. е. окрашены раз-

ными красителями.

Определение количества ретикулоцитов про-

изводится при микроскопии специально окра-

шенных мазков.

Унифицированный метод подсчета количест-

ва ретикулоцитов после окраски их бриллиан-

товым крезиловым синим, азуром I или азуром II

непосредственно на стекле или в пробирке

(1972).  П р и н ц и п . Суправитальная окраска

красителями, выявляющими зернисто-ннтчатую

субстанцию ретикулоцитов.

Р е а к т и в ы . Можно использовать один из

следующих красителей.

1. Насыщенный раствор бриллиантового кре-

зилового синего в абсолютном спирте (для при-

готовления абсолютного спирта надо выдержать

этанол 96 % в нескольких сменах прокаленного

порошка медного купороса). На 100 мл абсолют-

ного спирта берут 1,2 г краски.

2. Раствор азура I, предложенный П. Н. Ко-

риковым: азур 1 — 1 г, аммония оксалат — 0,4 г,

натрия хлорид — 0,8 г, этиловый спирт 96 % —

10 мл, дистиллированная вода — 90 мл. Раствор

краски в закрытом флаконе помещают на 2—3

дня в термостат при 37 °С и периодически энер-

гично взбалтывают. Затем охлаждают до ком-

натной температуры и фильтруют через бумаж-

ный фильтр. Раствор сохраняют в посуде из

темного стекла. При появлении осадка краску

следует снова профильтровать.

3. Раствор азура II следующего состава:

азур II — 1 г, натрия цитрат — 5 г, натрия хло-

рид — 0,4 г, дистиллированная вода — 45 мл.

Раствор оставляют в термостате при 37 °С на

2 сут, периодически помешивая. Для ускорения

растворения краску можно прогреть на слабом

огне в течение 15—20 мин, не доводя до кипения.

Охлаждают до комнатной температуры и фильт-

руют.

Хранят в посуде из темного стекла.

С п е ц и а л ь н о е  о б о р у д о в а н и е .

Микроскоп.

Х о д  о п р е д е л е н и я . Окраска на стекле.

Хорошо вымытое и обезжиренное предметное

стекло подогревают над пламенем горелки. Стек-

лянной палочкой наносят на стекло каплю од-

ного из красителей и готовят мазок из краски

шлифованным стеклом. Маркируют сторону

стекла, на которую нанесен мазок краски, стек-

лографом. В таком виде стекла можно загото-

вить впрок и хранить в сухом темном месте.

Наносят каплю крови на мазок краски, готовят

из нее тонкий мазок и тотчас помещают во влаж-

ную камеру на 3—4 мин (можно пользоваться

чашкой Петри с уложенными по краям валиками

смоченной ваты или фильтровальной бумаги).

Затем высушивают мазки на воздухе.

В приготовленных таким образом мазках

эритроциты окрашены в желтовато-зеленова-

тый цвет, зернисто-нитчатая субстанция — в си-

ний цвет.

Окраска в пробирке. Метод 1: перед упот-

реблением готовят в пробирке рабочий раствор

бриллиантового крезилового синего из расчета

на каплю 1 % раствора оксалата калия 4 капли

раствора краски 1. В краску добавляют 0,04 мл

крови (две пипетки до метки 0,02). Смесь тща-

тельно, но осторожно перемешивают и остав-

ляют на 30 мин. Перемешивают и готовят тонкие

мазки.

Метод 2: в пробирку помещают 0,05 мл раст-

вора краски 3 и 0,2 мл крови. Смесь тщательно

перемешивают и оставляют на 20—30 мин. Пе-

ремешивают и готовят тонкие мазки.

118

К л и н и ч е с к о е  з н а ч е н и е . Повыше-

ние показателя наблюдается при наследственном

микросфероцитозе, макроцитарных и мегалоци-

тарных анемиях, особенно высокое значение

(более 130 мкм

3

) выявлено при В12-дефицитных

анемиях. Объем эритроцитов часто увеличен

при диффузных поражениях печени, алкого-

лизме. Снижение наблюдается при микроци-

тарных анемиях, талассемии.

Л и т е р а т у р а . Тодоров И. Клинические

лабораторные исследования в педиатрии.— Со-

фия, 1966, с. 341.

Средний диаметр эритроцитов. Вычисляют

из результатов эритроцитометрии путем умно-

жения каждого процента клеток с определенным

диаметром на его значение в мкм, суммирова-

нием этих произведений н делением на 100.

П р и м е р : при эритроцитометрии 100 эрит-

роцитов выявлено 10 % эритроцитов с диамет-

ром 6 мкм, 70 % — с диаметром 7,5 мкм и

20 % — с диаметром 9 мкм.

Средний диаметр эритроцитов (СДЭ) вычис-

ляют следующим образом: