Аутотрансплантация легкого в эксперименте (Петровский Б.В.) - часть 19

Консервация легкого с отсроченной аутотрансплантацией 283 

и кровоизлияния, резкое полнокровие капилляров. В 3 случаях 

отмечалась картина геморрагического инфаркта без тромбоза сосу­

дистых анастомозов. 

При гистологическом исследовании животных, погибших в те­

чение первых 3 суток после отсроченной аутотрансплантации 

легкого с консервацией в течение 24 часов, в основном от развития 

отека легких, в аутотрансплантироваяном легком наблюдались 
дистелектазы и участки очаговых ателектазов, отек интерстиция и 
стенки альвеол. В просвете альвеол и части бронхиол отмечалась 

белковая жидкость, местами с примесью эритроцитов, периваску-
лярный отек, местами кровоизлияния в альвеолярные перегородки, 
резкое полнокровие капилляров и расширение лимфатических 
щелей в адвентиции сосудов. 

Аналогичную гистологическую картину наблюдали F. Largiader 

et al. (1965) у животных, погибших после трансплантации легких 
с консервацией в течение 24 часов. 

При исследовании лимфатической системы аутотрансплантиро-

ванного легкого после консервации в течение 24 часов у животных, 

погибших в первые дни после операции, обнаружено, что поверх­
ностная и глубокая лимфатическая сети и сплетения висцеральной 

плевры образованы резко расширенными лимфатическими капил­

лярами и сосудами. Лимфатические капилляры, сопровождавшие 

мельчайшие разветвления бронхиального дерева и легочных сосу­

дов, резко расширены, и в местах их соединения с лимфатическими 
капиллярами мелкопетлистой и крупнопетлистой сетей глубоких 

слоев висцеральной плевры наблюдался массивный выход инъек­
ционной массы. Перибронхиальные и периваскулярные лимфати­
ческие сети и сплетения образованы также резко расширенными 

лимфатическими капиллярами и сосудами. Из лимфатических 

капилляров и сосудов всех сетей и сплетений легкого наблюдался 

массивный выход инъекционной массы. 

Гистологические данные и результаты исследования лимфати­

ческой системы указывали на нарушение проницаемости стенки 
кровеносных и лимфатических сосудов, которое играло важную 
роль в развитии отека легкого и в гибели животных после отсро­

ченной аутотрансплантации с консервацией в течение 24 часов. 

Исследование легкого животных, выживших после отсроченной 

аутотрансплантации с консервацией в течение 24 часов, в отдален­
ные сроки (через 6 и 10 месяцев) показало, что в легком отмеча­

лись мелкие очаговые участки дистелектазов, структура паренхимы 
легкого была не изменена, утолщения стенки альвеол и бронхиол 
не наблюдалось (рис. 135). 

Исследование лимфатической системы аутотрансплантирован-

ного легкого через 6 месяцев после этих же операций показало, 
что поверхностная сеть висцеральной плевры образована очень 

284 

Глава девятая 

Р и с. 135. Аутотрансплантация нижней доли правого легкого с консерва­
цией в течение 24 часов при -\-4°. 6 месяцев после операции 
а — структура интактного легкого; б — аутотрансплантированное легкое. Альвеолы 
и бронхиолы не расширены. Ветвь бронхиальной артерии имеет утолщенную стенку 
с подчеркнутыми эластичными мембранами. 
Окраска $уксел1Ш + Ван Гизон, X 30 

широкими лимфатическими капиллярами. В глубоких слоях вис­
церальной плевры располагались мощные мелкопетлистые и круп­
нопетлистые сплетения лимфатических сосудов, которые имели 

изрезанные контуры, на стенках их было много слепых выростов 
различной формы. Эти данные указывали на то, что в отдаленные 
сроки после отсроченной аутотрансплантации с консервацией в 
течение 24 часов наблюдалось восстановление структуры легкого. 

Таким образом, в ткани легкого после немедленной аутотранс­

плантации и отсроченной аутотрансплантации с консервацией 
в течение 2 часов не отмечено существенных изменений. После 

отсроченной аутотрансплантации с консервацией в течение 24 ча­

сов наблюдались отек и кровоизлияния в стенку альвеолярных 
перегородок, что могло свидетельствовать о нарушении проницае­
мости сосудистой стенки. 

Консервация легкого с отсроченной аутотрансплантацией 

285 

Гистологические данные и результаты исследования лимфати­

ческой системы после отсроченной аутотрансплантации с консер-

1 

вациеп легкого в течение 2 и 24 часов в первые дни после операции 

свидетельствовали о нарушении проницаемости стенки кровеносных 
и лимфатических сосудов, более выраженном после консервации, 

в течение 24 часов, которое играло важную роль в развитии отека 

легкого и в гибели животных после отсроченной аутотранспланта­
ции с консервацией легкого. 

В| отдаленные сроки после отсроченной аутотрансплантации с 

консервацией в течение 2 и 24 часов у выживших животных на­

блюдалось восстановление структуры легкого. 

Гистохимическое исследование активности ферментов 

при консервации легкого в условиях гипотермии' 

Современные представления об энергетическом обмене в живой 

клетке и о гистохимических методах выявления окислительно-вос­

становительных ферментов можно найти в монографиях и спе­
циальных работах (Пирс, 1962; Берстои, 1965; Збарский и др., 
1965; Алов и др., 1966; Ленинджер, 1966; Райхлин, 1967; и др.). 

Сложные и многообразные функции клеток и тканей требуют 

доступных источников энергии. Образование энергии осуществ­
ляется в результате окислительно-восстановительных процессов, 
связанных с ферментативным расщеплением углеводов, жиров и 
белков. 

Процесс освобождения энергии при окислении питательных веществ 

имеет четыре фазы. В первой фазе белки, жиры и углеводы распадаются на 

их составные части — аминокислоты, глицерин и жирные кислоты, гексо-

зы. Во второй фазе превращение части образованных веществ происходит 

через сложную цепь реакций в щавелевоуксуспую и а-кетоглютаровую кис­

лоты, а также в ацетилкофермент А с выделением '/з общей свободной энер­
гии, содержавшейся в указанных пищевых веществах. 

Третья фаза окисления, получившая название цикла Кребса (цикла ли­

монной кислоты), является тем общим руслом, по которому происходит окон­

чательное окисление продуктов обмена до углекислоты и воды. Кроме окис­
ления глюкозы путем ее предварительного гликолитического расщепления 

и последующего окисления в цикле Кребса существует и другой путь прямо­

го окисления глюкозы, так называемый пентозный цикл. Центральным зве­
ном в окислительных превращениях глюкозы по этому пути является обра­
зование пентоз, вновь превращающихся через ряд промежуточных продук­

тов в гексозы. Четвертая фаза (конечный путь окисления) — процесс транс-

1

 Исследования проведены совместно с проф. И. М. Кодоловой (кафедра па­

тологической анатомии 1-го ММИ им. И. М. Сеченова). 

286 

Глава девятая 

порта электронов, осуществляемый с помощью цитохромной системы. С точ­

ки зрения энергетического обмена реакции первой фазы и в значительной 
степени второй и третьей являются подготовительными. Основное количе­
ство энергии выделяется в реакциях четвертой фазы окисления. 

С биологическим окислением тесно связаны клеточные органел-

лы митохондрии, которые представляют собой многоферментные 
системы. Митохондрии способны окислять большое число субстра­
тов, в том числе различные промежуточные продукты цикла Креб-
са. Митохондрию можно рассматривать как самостоятельную 

биохимическую единицу, содержащую ферменты, кофакторы и 

вспомогательные вещества, необходимые для осуществления био­
химических реакций каталитического типа. 

Однако действие ферментов не может осуществляться без 

промежуточных термостабильных веществ, так называемых кофер-

ментов, которые при тканевом дыхании играют роль своего рода 
коллекторов — собирателей электронов и протонов, окисляющихся 
от различных субстратов тканевого дыхания под действием дегид-
рогеназ. В настоящее время известны 2 химических вещества, 

играющих в окислительно-восстановительных процессах роль 
коферментов дегидрогеназ — никотинамид-аденин-динуклеотид 

(НАД-диафораза) и никотинамид-аденин-динуклеотид-фосфат 
(НАДФ-диафораза). 

Э. Пирс (1962) считает, что гистохимическое определение ми-

тохондриально расположенных дегидрогеназ является индикатором 

физического состояния митохондрий клетки. С помощью реакций 
на эти дегидрогеназы можно обнаружить самые начальные изме­
нения физиологического состояния митохондрий. 

В соответствии с интерпретацией гистохимических данных, 

предложенной Пирсом (1962), в ткани легкого при консервации 
производилось изучение ферментов НАД-диафоразы и НАДФ-диа-

форазы. Эти ферменты связаны с общей активностью систем де­
гидрогеназ. 

Активность цикла Кребса определяли по сукцинатдегидроге-

назе, малатдегидрогеназе и глютаматдегидрогеназе, которые явля­
ются важными компонентами цикла Кребса. 

Активность ферментов пентозного цикла определяли по глюко-

зо-6-фосфатдегидрогеназе, которая обеспечивает альтернативный 
путь окисления глюкозы и создание исходных продуктов для син­

теза пентозонуклеотидов, идущих на построение нуклеопротеидов. 

Активность ферментов гликолитического цикла определяли по 

алкогольдегидрогеназе и лактатдегидрогеназе, а также по а-глице-

рофосфатдегидрогеназе. Алкогольдегидрогеназа обусловливает либо 

окисление спирта, либо образование его из ацетальдегида. Лактат-

дегидрогеназа служит индикатором той части гликолитического 

Консервация легкого с отсроченной аутотрансплантацией 287 

цикла, в котором потребляется глюкоза и вырабатывается лактат; 
ос-глицерофосфатдегидрогеназа принимает участие в метаболизме 
триозофосфата. Эта реакция образования АТФ из АДФ обеспечи­
вает наличие источника энергии в клетке. 

С помощью применения гистохимических методов в настоящее 

время представляется возможным изучить локализацию и актив­
ность ферментов непосредственно в гистологическом срезе легочной 

ткани, которая подвергается консервации. Гистохимические мето­
ды позволяют, таким образом, выявить некоторые стороны обмен­
ных процессов в ткани легкого при консервации и различные 
изменения активности обменных процессов в различные сроки прс^ 
ле операции. С помощью гистохимических методик можно обнару­
жить изменения окислительно-восстановительных процессов в от­
дельных клетках и в группах клеток в ткани легкого. Эти исследо­
вания позволяют косвенно судить о жизнеспособности ткани 

легкого при консервации и — в сочетании с данными гистологиче­

ских, биохимических и электронно-микроскопических исследова­

ний — оценивать результаты последующих пересадок консервиро­
ванного легкого. 

Гистохимические исследования активности ферментов при 

аутотрансплантации и консервации легкого проводились мало. 

И. Г. Вазина (1969) не обнаружила изменения активности фер­

ментов при немедленной аутотрансплантации легкого. В отдален­
ные сроки после операции (до 2 лет) активность дегидрогеназ 
аутотрансплантированного легкого не отличалась от интактного 

(Диденко, 1967). 

По данным И. Р. Вазиной (1969), при сохранении легкого 

в условиях нормотермии в течение 4 часов уменьшалась активность 
сукцинатдегидрогеназы. J. Takeda (1968) при консервации легкого 

в течение 8 часов не отметил изменения активности ферментов. 
Л. 3. Мошняга (1970) обнаружила, что сукцинатдегидрогеназа 
исчезает после 2 суток консервации легкого. Специальных гистохи­
мических исследований при консервации легкого не проводилось. 

С помощью гистохимических методик (Пирс, 1962; Верстой, 

1965) можно определить локализацию и активность ферментов 

в ткани консервированного легкого. 

Для определения активности ферментов применялся нитротет-

разолий синий, дающий окрашенный нерастворимый осадок зерен 
диформазана в местах активности ферментов. 

Активность и локализацию ферментов определяли в эпителии 

бронхов, эпителии слизистых желез, мышечных пучков бронхов, 
в клеточных элементах стенки бронхов, альвеолярных перегородок 
и в альвеолярных макрофагах. 

Исследование активности и локализации ферментов в ткани 

легкого при различных сроках консервации (табл. 16). НАД-диа-

288 

Глава девятая 

Таблица 16 

Активность ферментов в ткани легкого при консервации в условиях 

гипотермии (-\-4°) в течение 96 часов без последующей аутотрансплантации 

(на основании визуального исследования) 

Обозначения активности:  + + + + очень высокая,  + + + - высокая, 4~Ь умеренная, + низ­

кая, — отрицательная. 

фораза. Исследования ткани легкого до консервации (исходные 
данные) показали высокую активность фермента. Зерна диформа­
зана отмечались в большом количестве в эпителии бронхов и в кле­
точных элементах стенки бронха, меньше зерен определялось 
в клетках альвеолярных перегородок и в альвеолярных макро-

брагах. 

Через 24 часа консервации активность и локализация фермента 

в ткани легкого существенно не изменялась. Через 48 часов кон­

сервации активность фермента в ткани легкого уменьшалась. Зер­
на диформазана отмечались в эпителии мелких бронхов и в клет­
ках альвеолярных перегородок. Через 72 часа определялась низ­

кая активность в эпителии бронхов в виде мелкой диффузной 

зернистости. Через 96 часов зерна диформазана почти полностью 

отсутствовали. 

НАДФ-диафораза. До консервации легкого высокая активность 

фермента определялась в виде мелких гранул диформазана в ци­
линдрическом эпителии бронхов и слизистых желез, в клетках 
альвеолярных перегородок зерен диформазана было мало. 

Консервация легкого с отсроченной аутотрансплантацией 289 

Через 24 часа консервации зерна диформазана содержались 

в значительном количестве в эпителии бронхов и в отдельных 
клетках альвеолярного эпителия, что свидетельствовало о высокой 
активпости фермента. Через 48 часов активность фермента умень­

шалась, он определялся в виде мелких и крупных зерен в эпите­
лии мелких бронхов. Через 72 часа активность фермента значи­

тельно уменьшалась, а через 96 часов зерна диформазана почти 
полностью исчезали из ткани легкого (рис. 136). 

Таким образом, активность НАД-диафоразы и НАДФ-диафора-

зы начинала уменьшаться после консервации легкого свыше 24 ча­
сов. Поэтому можно полагать, что активность дегидрогеназ различ­
ных циклов, с которыми непосредственно связаны эти коферменты, 
также сохранялась в эти сроки и начинала снижаться после 24 ча­
сов консервации. 

Индикаторами цикла Кребса в ткани легкого являлось опреде­

ление активности сукцинатдегидрогеназы, малатдегидрогеназы и 
глютаматдегидрогеназы. 

До консервации легкого отмечалась умеренная активность 

сукцинатдегидрогеназы в виде мелких зернышек диформазана 
в эпителии бронхов и слизистых желез, в меньшем количестве 
в клетках альвеолярных перегородок. При исследовании ткани 
легкого после консервации в течение 24 и 48 часов умеренная 
активность фермента определялась в эпителии бронхов и значи­

тельно меньше в клетках альвеолярных перегородок. Через 
72 часа низкая активность фермента определялась лишь в эпите­
лии бронхов. Через 96 часов активность фермента в ткани легкого 
не определялась. 

Умеренная активность малатдегидрогеназы до консервации 

определялась в виде мелких зернышек диформазана в эпителии 

бронхов и в мышечных пучках стенки бронхов, несколько меньше 
зерен в клетках альвеолярных перегородок и в альвеолярных 
макрофагах. После консервации в течение 24 и 48 часов умеренная 
активность фермента отмечалась в эпителии бронхов, а также 
в клетках альвеолярных перегородок. Через 72 часа консервации 
активность фермента значительно уменьшалась, зерна диформаза­
на неравномерной величины отмечались лишь в эпителии бронхов, 

а через 96 часов активность фермента почти не определялась, 
встречались лишь единичные конгломераты крупных зерен. 

До консервации в ткани легкого отмечалась умеренная актив­

ность глютаматдегидрогеназы в виде неравномерно расположен­

ных мелких зерен диформазана в эпителии бронхов и в стенках 
альвеолярных перегородок. Активность фермента уменьшалась 
после суточной консервации в основном за счет исчезновения зе­
рен диформазана в стенках альвеолярных перегородок и сниже­

ния его активности в эпителии бронхов. 

19 Аутотрансплантация легкого 

290 

Глава девятая 

Консервация легкого с отсроченной аутотрансплантацией 291 

Рис. 136. Активность и лока­
лизация НАДФ-диафоразы в 

ткани легкого при консерва­
ции в условиях гипотермии 
(при + 4°) до 96 часов, X 160 
а— до консервации. Активность 

фермента высокая. Зерна ди-
формазана содержатся в зна­

чительном количестве в эпите­

лии бронхов; 

б — через 48 часов. Активность-

фермента уменьшилась. Зерна 

диформазина в эпителии мел­
ких бронхов; 

в — через 96 часов. Зерна дифор-

мазана почти полностью исчез­

ли, из эпителия бронхов 

Рис. 137. Активность и лока­
лизация алкоголъдегидрогена-

зы в ткани легкого при кон­

сервации в условиях гипотер­

мии (при -\~4°) до 96 часов 
а — до консервации. Мелкие зер-

ныъики диформазана в эпите­

лии бронхов, у.400; 

б — через 48 часов. Активность 

фермента уменьшилась. Зерна 

диформазана содержатся в 

небольшом количестве в эпи­

телии бронхов, Х200; 

в — через 96 часов. Активность 

фермента очень низкая. Зерна 
диформазана содержатся в 
виде крупных конгломератов и 
грубых зерен в эпителии брон­

хов, Х160 

19* 

292 

Глава девятая 

Следовательно, в ткани легкого при консервации в условиях 

гипотермии  ( + 4 ° ) активность сукцинатдегидрогеназы и малатде-

гидрогеназы сохранялась в течение 48 часов, а глютаматдегидроге-
назы — в течение 24 часов. В последующие сроки активность 

ферментов цикла Кребса значительно снижалась, определялись 
лишь конгломераты, состоящие из крупных зерен и глыбок дифор-

мазана. 

Гликолитический цикл. Для характеристики этого цикла было 

произведено определение активности 3 ферментов: алкоголъдеги-

дрогеназы, лактатдегидрогеназы и а-глицерофосфатдегидрогеназы. 

До консервации в ткани легкого отмечалась умеренная актив­

ность ферментов в виде мелких зерен диформазана в эпителии 

бронха и слизистых желез, в клетках альвеолярных перегородок 

зерна диформазана располагались неравномерно. После консерва­
ции ткани легкого в течение 24 и 48 часов умеренная активность 
ферментов гликолитического цикла отмечалась в виде мелких не­

равномерных зерен диформазана в эпителии бронхов, кроме алко-
гольдегидрогеназы, активность которой в эпителии бронхов умень­
шалась уже после 24 часов консервации. Через 72 и 96 часов кон­
сервации отмечалась очень низкая активность ферментов гликоли­

тнческого цикла. Диформазан определялся в виде крупных кон­
гломератов, состоящих из грубых зерен (рис. 137). 

Таким образом, проведенное гистохимическое исследование 

ткани легкого при консервации в условиях гипотермии (при  + 4 ° ) 
отражало активность и локализацию основных циклов окислитель­

но-восстановительных процессов. Эти исследования показали, что 
в течение первых 24 часов существенных изменений в активности 

и локализации дегидрогеназ не наблюдалось. Лишь после 48 часов 
консервации ткани легкого снижалась активность ферментов, о 

чем свидетельствовало уменьшение количества зерен диформаза­
на в эпителии бронхов и исчезновение зерен в стенке альвеоляр­

ных перегородок. Зерна диформазана в эти сроки располагались 
неравномерно. После 72 часов они были представлены в виде от­
дельных крупных и грубых зерен и конгломератов зерен, что сви­
детельствовало о нарушениях окислительно-восстановительных 
процессов в ткани легких при этих сроках консервации. 

Энергетические функции митохондрий легкого 

при консервации 

Изучение метаболизма ткани легкого при консервации имеет 

определенное значение в комплексной оценке пригодности легко­

го для последующей трансплантации. 

В литературе имеется очень мало сообщений об исследованиях 

метаболизма ткани легкого при консервации. А. А. Игнатенок 

Консервация легкого с отсроченной аутотрансплантацией 29Л 

(1970) установил электрометрическим методом снижение потреб­

ления кислорода тканью легкого при консервации от 1 до 6 су­
ток. К. А. Годзоева (1970) при изучении тканевого дыхания лег­
кого, консервированного при температуре  + 3 ° или при сочетании: 
с 3 ата 0

2

, обнаружила через 24 часа резкое повышение потребле­

ния 0

2

, тогда как утилизация неорганического фосфора падала. 

Через 48 часов потребление 0

2

 и утилизация фосфора снижались,, 

приближаясь к нулю к 72 часам. Содержание молочной кислоты, 
наоборот, нарастало начиная с 24 часов. Годзоева считала, что че­
рез 72 часа, когда усиливался распад гликогена и образование мо­

лочной кислоты, а дыхательный коэффициент становился значи­
тельно меньше единицы, можно было говорить о начавшемся рас­
паде белков. J. Takeda (1968) установил, что при консервации: 
легкого при  + 4 ° с одновременной перфузией и вентиляцией тка­
невое дыхание снижалось через 8 часов до 50% от исходного. 
Автор высказал предположение, что этот метод может служить 
одним из показателей жизнеспособности легкого при консерва­

ции. 

В настоящее время появляется все больше доказательств того, 

что функциональное состояние ткани определяется энергетичес­
ким метаболизмом в митохондриях, ответственных за энергоснаб­
жение ткани. В связи с этим представлялось интересным сравнить 

способность митохондрий легкого к окислению и фосфорилирова-

нию непосредственно после удаления легкого и при его консер­
вации. 

В этом разделе изложены результаты полярографического из­

мерения скоростей потребления кислорода митохондриями в раз­
ных метаболических состояниях

1

. 

Были измерены скорости потребления кислорода митохондрия­

ми легкого в метаболических состояниях: втором (дыхание в сре­
де с субстратом окисления), третьем (дыхание в среде с субстра­
том окисления и акцептором фосфата АДФ), четвертом (дыхание 
после превращения добавленной АДФ в АТФ) и при разобщении 
окисления и фосфорилирования 2,4-динитрофенолом. Полученные 

результаты приведены на диаграммах (рис. 138). 

Митохондрии, выделенные из только что удаленного легкого, 

на добавку АДФ отвечали увеличением скорости потребления кис­
лорода в 2,5 раза (рис. 138, А). Фосфорилирование 0,4 мкг-моле-
кулы АДФ длилось 3,3 минуты, после чего митохондрии перехо­
дили в четвертое метаболическое состояние. Коэффициент фосфо­
рилирования АДФ/О равнялся 2,7. Добавление 0,04 мкг-моле^-

кулы ДНФ приводило к увеличению скорости потребления кисло-

1

 Исследования проведены в ЦНИЛ им. С. И. Чечулина 1-го ММИ совместно 

с канд. биол. наук С. В. Елисеевой и канд. физ.-мат. наук К. И. Ко.товой.. 

'294 

Глава девятая 

рода до величины, имевшей место в третьем состоянии. Все это 

свидетельствовало о наличии сопряжения окисления и фосфори­
лирования в митохондриях легкого Собаки. 

Через 1 минуту после добавления ДНФ скорость потребления 

кислорода снижалась, что связано с торможением дыхания щаве-

левоуксусной кислотой, так как торможение устранялось после 
добавления глютаминовой кислоты. 

Обращала на себя внимание высокая скорость потребления 

кислорода митохондриями в течение 1 —1,5 минуты. Возможно, 
такое усиление связано с накоплением АДФ в митохондриях за 
время их выделения и хранения вследствие деятельности АТФаз, 

которых особенно много в ткани легкого (Диксон, Уэбб, 1966; 

Збарский, 1955; Павлова, 1962), и с ее фосфорилированием при 
введении митохондрий в среду инкубации с сукцинатом. 

Через сутки консервации добавка АДФ вызывала примерно 

такое же увеличение скорости потребления кислорода (см. 

рис. 138,  Б ) . Скорости потребления кислорода в третьем состоянии 

и при добавлении ДНФ по-прежнему были равны, причем их ве­

личины были близки к таковым для митохондрий из только что 
удаленного легкого. Однако время фосфорилирования добавляе­
мой АДФ увеличивалось. 

Через двое суток консервации (см. рис. 138, В) скорость по­

требления кислорода митохондриями в третьем состоянии уже не­
сколько снижалась. Время фосфорилирования добавляемой АДФ 
увеличивалось примерно в 2 раза: 3 минуты длилось фосфорили-
рование половинной дозы АДФ (0,2 микрограмм-молекулы). Ко­

эффициент фосфорилирования АДФ/О снизился до 2,2. Скорость 

потребления кислорода после добавления ДНФ выше скорости в 

третьем состоянии. Все это говорило о начавшихся повреждениях 

в цепи накопления энергии. Однако можно думать, что цепь транс­
порта электронов к этому сроку еще не была затронута, посколь­
ку скорости потребления кислорода во втором состоянии и при 

добавлении ДНФ имели значения, близкие к исходным. 

Через 3 суток консервации ткани легкого наблюдались сущест­

венные повреждения окислительного фосфорилирования (см. 
рис. 138, Г). Добавление АДФ не вызывало стимуляции дыхания, 

т. е. налицо было полное разобщение окисления и фосфорилиро­
вания. Добавление ДНФ продолжало вызывать стимуляцию дыха­
ния, однако величина скорости потребления кислорода значитель­
но снизилась, что в совокупности со снижением скорости во вто­
ром состоянии свидетельствовало о нарушениях и в процессах 

транспорта электронов. 

До последнего времени изучение дыхания ткани, гомогенатов 

и митохондрий легкого проводилось манометрическим методом, 
требующим, как известно, длительной преинкубации препарата. 

Консервация легкого с отсроченной аутотранснлантацией 

. 

29^ 

Р и с. 138. Скорость потребления кислорода митохондриями легкого собаки 

при консервации в условиях гипотермии ( + 4°) 

На оси о})динат — скорость потребления кислорода, на оси абсцисс — время пре­

бывания митохондрий в полярографической ячейке 

А — после удаления легкого; Б — через 1 сутки консервации; В — через 2 суток; 
Г — через 3 суток 

296 

Глава девятая 

Применение полярографического метода позволило зарегистриро­
вать окисление и фосфорилирование в первые минуты после выде­
ления митохондрий, т. е. более нативных препаратов. «Закрытый» 
электрод, обладающий большей стабильностью показаний, чем 

обычно применяемые «открытые» и «полузакрытые» электроды, 
дал возможность получить падежные характеристики слабого ды­
хания митохондрий легкого и их изменения при консервации лег­
кого. 

Обнаружено, что митохондрии, выделенные из только что уда­

ленного легкого, способны функционировать во всех основных ме­
таболических состояниях, с величинами дыхательных контролей 
по Ларди — Велману и Чансу — Вильямсу порядка 2,6 и 1,3. Коэф­
фициент фосфорилирования АДФ/О для сукцината был порядка 

2,7, т. е. значительно выше коэффициента фосфорилирования Р/О, 

приводимого в литературе для гомогенатов (Коган, 1967) п мито­
хондрий (Reiss, 1966) легкого. Несмотря на прочное сопряжение 
окисления и фосфорилирования, свидетельствующее о нативности 
полученного нами препарата, скорости потребления кислорода (в 

пересчете на 1 мг белка) были в 5—10 раз ниже таковых для мито­

хондрий печени. Этот результат подтверждал данные ряда авто­
ров о низких скоростях дыхания ткани легкого (Коган, 1967; 

Тринчер, 1960). 

Установлено, что суточная консервация ткани легкого не по­

влияла существенно на энергетические реакции митохондрий. Че­
рез 2 суток наблюдались нарушения в наиболее чувствительном 

звене — в цепи накопления энергии, что выражалось в увеличении 
в 2 раза времени фосфорилирования, хотя способность к фосфори-
лированию добавленной АДФ и к переходу в четвертое состояние 
сохранялась. Через 3 суток консервации наблюдались существен­

ные повреждения как фосфорилирования, так и окисления. 

Улътраструктура 

при отсроченной аутотрансплантации легкого ' 

Изучению ультраструктурной организации легкого посвящено 

много работ (Schulz, 1959; Поликар, Бо, 1962; Low, 1961; КН-

ка, 1965; Романова, 1971), но лишь в единичных исследованиях 
при трансплантации и консервации легкого применялся электрон­

но-микроскопический метод исследования (Tsuyi et al., 1964; Си-
доркин, 1966; Noirclerc et al., 1970; Рабинович и др. 1970; Masenti 
etal., 1971). 

Исследования проведены в ЦНИЛ ЦОЛИУВ совместно с канд. биол. наук 

В. В. Глаголевой. 

Консервация легкого с отсроченной аутотрансплантацией 297 

Рис. 139. Ультраструктура стенки альвеолы интактного легкого собаки. 
Видны цитоплазматические отростки клеток альвеолярного эпителия, базаль-
ная мембрана и цитоплазматические отростки эндотелия капилляров, Х.13 50u

j 

АЭ — альвеолярный эпителий; ЭНД — эндотелий капилляров; ВПА — воздушное 

пространство альвеолы; БЫ — базальная мембрана; ОТ — осмиофильные тельца; 

ЦГ — цитоплазматические гранулы; К — коллагеновые волокна 

Известно, что стенка альвеолы состоит из клеток поверхност­

ного легочного эпителия (малые клетки) с одной стороны, грани­

чащих с воздушным пространством альвеолы, а с другой — плотно 
примыкающих к базальной мембране альвеолярных клеток (боль­

шие клетки) и эндотелия мелких кровеносных капилляров. 

Малые альвеолярные клетки или клетки поверхностного ле­

гочного эпителия содержат ядро округлой или овальной формы, 

которое занимает почти всю уплощенную клетку. В сторону от 
клетки отходят цитоплазматические отростки, в которых сравни­
тельно редко встречаются мелкие округлые митохондрии. 

Наиболее характерной особенностью больших альвеолярных 

клеток является наличие в их цитоплазме крупных осмиофиль-
ных тел, в матриксе которых располагаются мембранные структу­

ры. В центре клетки находится округлое ядро, митохондрии име-

298 

Глава девятая 

Рис. 140. Часть большой альвеолярной клетки интактного легкого собаки. 

Видны плотные осмиофильные тельца, X13 500 

Я — ядро, остальные обозначения те же, что и на рис. 139 

ют плотный матрикс и небольшое число крист, агранулярный 

эндоплазматический ретикулум представлен системой пузырьков 

и трубочек различного диаметра. 

Ei настоящее время считается, что осмиофильные тела больших 

альвеолярных клеток содержат лшгопротеины и служат для фор­
мирования липопротеиновои пленки, выстилающей поверхность 
альвеолы. Основное назначение этой пленки — поддерживать по­

верхностное натяжение альвеолы и препятствовать проникновению 

жидкости в ее просвет, она также предохраняет цитоплазму кле­

ток, составляющих альвеолу, от подсыхания и облегчает газооб­
мен. Кроме того, липопротеиновая пленка поверхности альвеолы 

обладает бактерицидными свойствами, лизируя микроорганизмы 

(Macklin, 1954; Pattle et al., 1961; Comroe, 1962). 

Структура эндотелиальных клеток капилляров легкого имеет 

типичное строение. Околоядерная расширенная часть эндотели­
альных клеток содержит мелкие митохондрии, аппарат Гольджи,