ГОСУДАРСТВЕННАЯ ФАРМАКОПЕЯ РЕСПУБЛИКИ БЕЛАРУСЬ. Том III Контроль качества фармацевтических субстанций (2009 год) - часть 46

577

Треонин

ты хлористоводородной Р

 и доводят до объема 

50 мл этим же растворителем.

Раствор сравнения (b).

 5 мл испытуемого 

раствора (b) доводят 

водой Р

 до объема 20 мл.

Раствор сравнения (с). 

10 мг 

ФСО треони-

на

 и 10 мг 

ФСО пролина

 растворяют в 1 % (

об/об

) 

растворе

 кислоты хлористоводородной Р

 и до-

водят до объема 25 мл этим же растворителем.

Пластинка

: 

ТСХ пластинка со слоем

 

сили-

кагеля Р

.

Подвижная фаза

: 

кислота уксусная ледяная 

Р — вода Р — бутанол Р 

(20:20:60, 

об/об/об

).

Наносимый объем пробы

: 5 мкл.

Фронт подвижной фазы

: не менее 15 см от 

линии старта.

Высушивание

: на воздухе.

Проявление

: пластинку опрыскивают 

рас-

твором нингидрина Р

 и высушивают при темпе-

ратуре от 100°С до 105°C в течение 15 мин.

Пригодность хроматографической систе-

мы

: раствор сравнения (с):

 

– на хроматограмме обнаруживаются два 

полностью разделенных пятна.

Предельное содержание примесей

: 

 

–

любая примесь

 (не более 0,5 %): на хрома-

тограмме испытуемого раствора (а) любое пятно, 
кроме основного, должно быть не интенсивнее 
пятна на хроматограмме раствора сравнения (b).

Хлориды

 (

2.4.4

). Не более 0,02 % (200 ppm). 

10 мл раствора S доводят 

водой Р

 до 15 мл. По-

лученный раствор должен выдерживать испыта-
ние на хлориды.

Сульфаты 

(

2.4.13

). Не более 0,03 

% 

(300 ppm). 0,5 г испытуемого образца растворяют 

в 

воде дистиллированной Р

 и доводят до объема 

15 мл этим же растворителем.

 

Полученный раст-

вор должен выдерживать испытание на сульфаты.

Аммония соли 

(

2.4.1, метод В

). Не более 

0,02 % (200 ppm). 0,10 г испытуемого образца 
должны выдерживать испытание на аммония 
соли. Эталон готовят с использованием 0,2 мл 

эталонного раствора аммония (100 ppm

 

NH

4

) Р

.

Железо 

(

2.4.9

). Не более 0,001 % (10 ppm). 

1,0 г испытуемого образца помещают в дели-
тельную воронку, растворяют в 10 мл 

кислоты 

хлористоводородной разведенной Р

, встряхива-

ют трижды, каждый раз в течение 3 мин, с 

ме-

тилизобутилкетоном Р1

 порциями по 10 мл. 

Объединенные органические слои встряхивают 
с 10 мл 

воды Р

 в течение 3 мин. Водный слой 

должен выдерживать испытание на железо.

Тяжелые металлы 

(

2.4.8, метод С

). Не 

более 0,001 % (10 ррm). 2,0 г испытуемого образ-
ца должны выдерживать испытание на тяжелые 
металлы. Эталон готовят с использованием 2 мл 

эталонного раствора свинца (10 ppm

 

Pb) Р

.

Потеря в массе при высушивании 

(

2.2.32

). 

Не более 0,5 %. 1,000 г испытуемого образца 
сушат при температуре 105°С.

Сульфатная зола 

(

2.4.14, метод А

). Не 

более 0,1 %. Определение проводят из 1,0 г ис-
пытуемого образца.

#

 

Остаточные количества органических 

растворителей 

(

2.4.24

). Испытуемый образец 

должен выдерживать требования статьи (

5.4

).

#

 

Микробиологическая чистота 

(

2.6.12, 

2.6.13,

 

5.1.4

). Треонин в условиях испытания не 

обладает антимикробным действием.

Рисунок 1. 

Инфракрасный спектр пропускания ФСО треонина в дисках с калия бромидом Р.

 32

 34

 36

 38

 40

 42

 44

 46

 48

 50

 52

 54

 56

 58

 60

 62

 64

Пропускание

 500 

 1000 

 1500 

 2000 

 2000 

 3000 

 4000 

Волновое  число  (см

-1

)

578

КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ 

0,100 г испытуемого образца растворяют в 

5 мл 

кислоты муравьиной безводной Р

, прибав-

ляют 30 мл 

кислоты уксусной безводной Р

 и ти-

труют 

0,1 М раствором кислоты хлорной

 потен-

циометрически (

2.2.20

).

1 мл 

0,1 М раствора кислоты хлорной

 соот-

ветствует 11,91 мг C

4

H

9

NO

3

.

ХРАНЕНИЕ

В защищенном от света месте.

 ТРИАМЦИНОЛОНА АЦЕТОНИД

Triamcinoloni acetonidum

TRIAMCINOLONE ACETONIDE

O

F

H

O

O

H

CH

3

H

HO

H

CH

3

O

OH

CH

3

CH

3

C

24

H

31

FO

6

 

 М.м. 434,5

ОПРЕДЕЛЕНИЕ

Триамцинолона ацетонид содержит не 

менее 97,0 

% и не более 103,0 

% 9-фтор-

11β,21-дигидрокси-16α,17-(1-метилэтилиденди-
окси)прегна-1,4-диен-3,20-диона в пересчете на 
безводное вещество.

ОПИСАНИЕ (СВОЙСТВА)

Белый или почти белый кристаллический 

порошок.

Практически нерастворим в воде, умеренно 

растворим в 96 % спирте.

Обладает полиморфизмом (

5.9

).

ПОДЛИННОСТЬ (ИДЕНТИФИКАЦИЯ)

Первая идентификация: А, В.
Вторая идентификация: С, D.

А.

 Абсорбционная спектрофотометрия в ин-

фракрасной области (

2.2.24

).

# Приготовление

: в дисках.

Сравнение

: 

ФСО триамцинолона ацетони-

да 

# или спектр, представленный на рисунке 1

.

Если полученные спектры отличаются, то 

испытуемый образец и 

ФСО триамцинолона 

ацетонида 

растворяют по отдельности в мини-

мальном объеме 

метанола Р

, выпаривают до 

сухих остатков, готовят диски из солей галогени-
дов

 

или пленки в

 масле вазелиновом Р

 и записы-

вают новые спектры.

В.

 Тонкослойная хроматография (

2.2.27

). 

Растворы готовят непосредственно перед 
использованием и защищают от света. Пла-
стинку просматривают в ультрафиолетовом 
свете сразу же после хроматографирования

.

Испытуемый раствор.

 10 мг испытуемого 

образца растворяют в 

метаноле Р

 и доводят до 

объема 10 мл этим же растворителем.

Раствор сравнения (а). 

20 мг 

ФСО триамци-

нолона ацетонида 

растворяют в 

метаноле Р

 и 

доводят до объема 20 мл этим же растворителем.

Раствор сравнения (b). 

10 мг 

ФСО

 

триам-

цинолона гексацетонида

 растворяют в раство-

ре сравнения (а) и доводят до объема 10 мл 
этим же растворителем.

Пластинка

: 

ТСХ пластинка со слоем под-

ходящего

 

силикагеля F

254

 Р

.

Подвижная фаза

: к смеси из 15 объемов 

эфира Р

 и 77 объемов 

метиленхлорида Р

 при-

бавляют смесь из 1,2 объема 

воды Р

 и 8 объе-

мов 

метанола Р

.

Наносимый объем пробы

: 5 мкл.

Фронт подвижной фазы

: не менее 15 см от 

линии старта.

Высушивание

: на воздухе.

Проявление

: пластинку просматривают 

в ультрафиолетовом свете при длине волны 
254 нм.

Пригодность хроматографической систе-

мы

: раствор сравнения (b):

 

– на хроматограмме обнаруживаются два 

полностью разделенных пятна.

Результаты

: на хроматограмме испытуемо-

го раствора обнаруживается пятно, соответству-
ющее по расположению и размеру основному 
пятну на хроматограмме раствора сравнения (а).

С.

 Тонкослойная хроматография (

2.2.27

). 

Растворы готовят непосредственно перед 
использованием и защищают от света. Пла-
стинку просматривают в ультрафиолетовом 
свете сразу же после хроматографирования

.

Испытуемый раствор (a).

 10 мг испытуемо-

го образца растворяют в 

метаноле Р

 и доводят 

до объема 10 мл этим же растворителем.

Испытуемый раствор (b).

 10 мг испытуемого 

образца помещают в делительную воронку, раст-
воряют в 1,5 мл 

кислоты уксусной ледяной Р

, при-

бавляют 0,5 мл раствора 20 г/л 

хрома (VI) оксида 

Р

 и выдерживают в течение 60 мин. Прибавляют 

5 мл 

воды Р

, 2 мл 

метиленхлорида Р

 и интенсив-

но встряхивают в течение 2 мин. После полного 
разделения слоев используют нижний слой.

Раствор сравнения (a).

 10 мг 

ФСО триамци-

нолона ацетонида

 растворяют в 

метаноле Р

 и 

доводят до объема 10 мл этим же растворителем.

Раствор сравнения (b).

 10 мг 

ФСО триам-

цинолона ацетонида

 помещают в делительную 

воронку, растворяют в 1,5 мл 

кислоты уксусной 

ледяной Р

, прибавляют 0,5 мл раствора 20 г/л 

хрома (VI) оксида Р

 и выдерживают в течение 

60 мин. Прибавляют 5 мл 

воды Р

, 2 мл 

метилен-

хлорида Р

 и интенсивно встряхивают в течение 

579

Триамцинолона ацетонид

2 мин. После полного разделения слоев исполь-
зуют нижний слой.

Пластинка

: ТСХ пластинка со слоем подхо-

дящего 

силикагеля F

254

 Р

.

Подвижная фаза

: к смеси из 15 объемов 

эфира Р

 и 77 объемов 

метиленхлорида Р

 при-

бавляют смесь из 1,2 объема 

воды Р

 и 8 объе-

мов 

метанола Р

.

Наносимый объем пробы

: по 5 мкл.

Фронт подвижной фазы

: не менее 15 см от 

линии старта.

Высушивание

: на воздухе.

Проявление

: пластинку просматривают в уль-

трафиолетовом свете при длине волны 254 нм.

Результаты

: на хроматограммах испытуе-

мых растворов обнаруживаются пятна, соответ-
ствующие по расположению и размеру основ-
ным пятнам на хроматограммах соответствую-
щих растворов сравнения. Значения 

R

f

 основных 

пятен на хроматограммах испытуемого раствора 
(b) и раствора сравнения (b) превышают значе-
ния 

R

f

 основных пятен на хроматограммах испы-

туемого раствора (a) и раствора сравнения (a) 
соответственно.

D.

 5 мг испытуемого образца смешива-

ют с 45 мг 

магния оксида тяжелого P

 и сжи-

гают в тигле до получения почти белого остат-
ка (обычно менее 5 мин). Охлаждают, прибавля-
ют 1 мл 

воды Р

, 0,05 мл 

раствора фенолфта-

леина Р1

 и 1 мл 

кислоты хлористоводородной 

разведенной Р 

до обесцвечивания раствора и 

фильтруют. 1,0 мл полученного фильтрата при-
бавляют к свежеприготовленной смеси из 0,1 мл 

раствора ализарина S Р

 и 0,1 мл 

раствора цир-

конила нитрата Р

 и перемешивают. Выдержи-

вают в течение 5 мин и сравнивают окраску по-
лученного раствора с окраской контрольного 
раствора, приготовленного аналогично. Окра-
ска испытуемого раствора желтая, контрольно-
го раствора — красная.

ИСПЫТАНИЯ

Удельное оптическое вращение

 (

2.2.7

). От 

+100 до +107 в пересчете на безводное веще-
ство. 0,100 г испытуемого образца растворяют в 

диоксане Р

 и доводят до объема 10,0 мл этим же 

растворителем.

Сопутствующие примеси

. Жидкостная 

хроматография

 

(

2.2.29

). 

Испытание проводят с 

защитой от света.

Испытуемый раствор.

 25,0 мг испытуемого 

образца растворяют в 7 мл 

метанола Р 

и дово-

дят 

водой Р 

до объема 10,0 мл.

Раствор сравнения (а). 

2 мг 

ФСО триам-

цинолона ацетонида 

и 2 мг 

триамцинолона Р 

(примесь А) растворяют в подвижной фазе и 
доводят до объема 100,0 мл этим же раство-
рителем.

Раствор сравнения (b). 

1,0 мл испытуемого 

раствора доводят подвижной фазой до объема 
100,0 мл.

Условия хроматографирования:

 

–

колонка

 длиной 0,25 м и внутренним диа-

метром 4,6 мм, заполненная 

силикагелем окта-

децилсилильным для хроматографии Р 

с раз-

мером частиц 5 мкм;

Рисунок. 1 

Инфракрасный спектр пропускания ФСО триамцинолона 

ацетонида в дисках с калия бромидом Р.

 30

 35

 40

 45

 50

 55

 60

 65

 70

 75

 80

 85

 90

 95

 100

Пропускание

 1000  

 1500  

 2000  

 3000  

Волновое  число  (см

-1

)

580

 

–

подвижная фаза

: смешивают 525 мл 

ме-

танола Р

 и 400 мл 

воды Р

, выдерживают до 

установления равновесия, доводят 

водой Р

 до 

объема 1000,0 мл и перемешивают;

 

–

скорость подвижной фазы

: 1,5 мл/мин;

 

–

спектрофотометрический детектор

, 

длина волны 254 нм;

 

–

объем вводимой пробы

: 20 мкл;

 

–

время уравновешивания

: около 10 мин;

 

–

время хроматографирования

: 3,5-крат-

ное время удерживания триамцинолона ацето-
нида.

Времена удерживания

: примесь А — около 5 

мин, триамцинолона ацетонид — около 17 мин.

Пригодность хроматографической систе-

мы

: раствор сравнения (а):

 

–

разрешение

: не менее 15 между пиками 

примеси А и триамцинолона ацетонида; при не-
обходимости изменяют концентрацию метанола 
в подвижной фазе.

Предельное содержание примесей

:

 

–

любая примесь

 (не более 0,25 %): на хро-

матограмме испытуемого раствора площадь 
любого пика, кроме основного, не должна пре-
вышать 0,25 площади основного пика на хрома-
тограмме раствора сравнения (b);

 

–

сумма примесей

 (не более 0,5 

%): 

на хроматограмме испытуемого раствора сумма 
площадей всех пиков, кроме основного, не 
должна превышать 0,5 площади основного пика 
на хроматограмме раствора сравнения (b).

На хроматограмме испытуемого раствора 

не учитывают пики с площадью менее 0,05 пло-
щади основного пика на хроматограмме раст-
вора сравнения (b) (0,05 %).

Вода 

(

2.5.12

). Не более 2,0 %. Определение 

проводят из 0,500 г испытуемого образца.

# Остаточные количества органических 

растворителей 

(

2.4.24

). Испытуемый образец 

должен выдерживать требования статьи (

5.4

).

# Микробиологическая чистота 

(

2.6.12, 

2.6.13, 5.1.4

).

 

Триамцинолона ацетонид в усло-

виях испытания обладает антимикробным дей-
ствием. Посев на питательные среды № 1, № 8 
и № 2 проводят из разведения 1:10, на питатель-
ную среду № 11 — из разведения 1:50.

КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ

Испытание проводят с защитой от 

света

.

50,0 мг испытуемого образца растворяют в 

96 % спирте Р 

и доводят до объема 50,0 мл этим 

же растворителем. 2,0 мл полученного раствора 
доводят 

96 % спиртом Р

 до объема 100,0 мл. 

Измеряют оптическую плотность (

2.2.25

) полу-

ченного раствора в максимуме при 238,5 нм.

Содержание С

24

Н

31

FO

6

 рассчитывают с 

учетом удельного показателя поглощения, 
равного 355.

ХРАНЕНИЕ

В защищенном от света месте.

ПРИМЕСИ

Специфицированные примеси: А

.

O

F

H

OH

OH

H

CH

3

H

HO

H

CH

3

O

OH

А. Триамцинолон.

 ТРИБЕНОЗИД

Tribenosidum

TRIBENOSIDE

O

∗

O

OH

O

O

O

CH

3

H

и аномер у С*

C

29

H

34

O

6

 

 М.м. 478,6

ОПРЕДЕЛЕНИЕ

Трибенозид представляет собой смесь 

α- и β-аномеров этил-3,5,6-три-

О

-бензил-D-

глюкофуранозида. Содержит не менее 96,0 % и 
не более 102,0 % C

29

H

34

O

6

.

ОПИСАНИЕ (СВОЙСТВА)

Прозрачная вязкая жидкость от желтоватого 

до бледно-желтого цвета.

Практически нерастворим в воде, очень 

легко растворим в ацетоне, в метаноле и в ме-
тиленхлориде.

ПОДЛИННОСТЬ (ИДЕНТИФИКАЦИЯ)

Абсорбционная спектрофотометрия в ин-

фракрасной области (

2.2.24

).

Приготовление

: в дисках.

Сравнение

: 

ФСО трибенозида

 # или спектр, 

представленный на рисунке 1

.

ИСПЫТАНИЯ

Раствор S

. 4,00 г испытуемого образца 

растворяют в 

метаноле Р

 и доводят до объема 

20 мл этим же растворителем.

Прозрачность

  (

2.2.1

). Раствор S должен 

быть прозрачным.

Оптическая плотность

  (

2.2.25

). Не более 

0,10 при 420 нм. Измеряют оптическую плот-
ность раствора S.

Удельное оптическое вращения

  (

2.2.7

). 

От -31,0 до -40,0. 2,0 мл раствора S доводят 

ме-

танолом Р

 до объема 20,0 мл.

581

Трибенозид

Сопутствующие примеси

. Жидкостная 

хроматография

 

(

2.2.29

).

Испытуемый раствор (а). 

1,000 г испытуе-

мого образца растворяют в смеси 

вода Р — аце-

тонитрил Р 

(5:95, 

об/об

) и доводят до объема 

25,0 мл этим же растворителем.

Испытуемый раствор (b). 

50,0 мг испытуе-

мого образца растворяют в смеси 

вода Р — аце-

тонитрил Р 

(5:95, 

об/об

) и доводят до объема 

50,0 мл этим же растворителем.

Раствор сравнения (а). 

25,0 мг 

бензальде-

гида Р

 (примесь С) и 30,0 мг 

ФСО трибенозида 

примеси А 

растворяют в 

ацетонитриле Р

 и до-

водят до объема 100,0 мл этим же растворите-
лем. К 20,0 мл полученного раствора прибавля-
ют 2,5 мл 

воды Р

 и доводят 

ацетонитрилом Р

 

до объема 50,0 мл.

Раствор сравнения (b). 

50,0 мг 

ФСО три-

бенозида 

растворяют в смеси 

вода Р — аце-

тонитрил Р

 (5:95, 

об/об

) и доводят до объема 

50,0 мл этой же смесью растворителей.

Раствор сравнения (с). 

12,0 мг 

бензилово-

го эфира Р 

растворяют в смеси 

вода Р — аце-

тонитрил Р

 (5:95, 

об/об

) и доводят до объема 

100,0 мл этой же смесью растворителей.

Условия хроматографирования:

 

–

колонка

 длиной 0,15 м и внутренним диа-

метром 4,6 мм, заполненная 

силикагелем окта-

децилсилильным для хроматографии Р 

с раз-

мером частиц 3 мкм;

 

–

подвижная фаза

:

 

– подвижная фаза А: 0,1 % (

об/об

) раствор 

кислоты фосфорной Р

;

 

– подвижная фаза В: 

ацетонитрил Р

;

Время (мин)

Подвижная 

фаза А

(%, 

об/об

)

Подвижная 

фаза В

(%, 

об/об

)

0—40

55 → 10

45 → 90

40—55

10

90

55—56

10 → 55

90 → 45

56—60

55

45

 

–

скорость подвижной фазы

: 1,3 мл/мин;

 

–

спектрофотометрический детектор

, 

длина волны 254 нм;

 

–

объем вводимой пробы

: по 20 мкл испы-

туемого раствора и растворов сравнения (a), (b) 
и (c)

.
Относительное удерживание

 (по отноше-

нию к β-аномеру трибенозида; время удержива-
ния — около 18 мин): α-аномер — около 1,1; при-
месь С — около 0,2; примесь В — около 0,6; при-
месь D — около 0,8; примесь А — около 1,4.

Пригодность хроматографической систе-

мы

: раствор сравнения (b):

 

–

разрешение

: не менее 3,0 между пиками 

α-аномера и β-аномера трибенозида.

Предельное содержание примесей

:

 

–

примесь А

 (не более 0,5 %): на хромато-

грамме испытуемого раствора площадь пика, 
соответствующего примеси А, не должна пре-
вышать 1,7-кратную площадь соответствующего 
пика на хроматограмме раствора сравнения (а);

 

–

примесь С

 (не более 0,5 %): на хромато-

грамме испытуемого раствора площадь пика, 
соответствующего примеси С, не должна пре-

Рисунок 1. 

Инфракрасный спектр пропускания ФСО трибенозида в дисках с калия бромидом Р

.

 20

 25

 30

 35

 40

 45

 50

 55

 60

 65

 70

 75

 80

 85

 90

 95

 100

Пропускание

 1000 

 1500 

 2000 

 2000 

 3000 

Волновое  число  (см

-1

)

582

вышать 2-кратную площадь соответствующе-
го пика на хроматограмме раствора сравнения 
(а); если площадь пика примеси С на хромато-
грамме испытуемого раствора превышает пло-
щадь соответствующего пика на хроматограм-
ме раствора сравнения (а) (0,25 %), то испыту-
емый раствор разбавляют до получения площа-
ди пика, равной или меньшей площади пика на 
хроматограмме раствора сравнения (а); при рас-
чете содержания примеси С учитывают фактор 
разведения;

 

–

примесь D

 (не более 0,3 %): на хромато-

грамме испытуемого раствора площадь пика, 
соответствующего примеси D, не должна превы-
шать площадь основного пика на хроматограм-
ме раствора сравнения (с);

 

–

любая другая примесь

 (не более 0,3 %): 

на хроматограмме испытуемого раствора пло-
щадь любого пика, кроме основного и пиков 
примесей А, С и D, не должна превышать пло-
щадь пика примеси А на хроматограмме раст-
вора сравнения (а);

 

–

сумма примесей

 (не более 2,0 %): на хро-

матограмме испытуемого раствора сумма пло-
щадей всех пиков, кроме основного, не должна 
превышать 6,7-кратную площадь пика примеси 
А на хроматограмме раствора сравнения (а).

На хроматограмме испытуемого раствора 

не учитывают пики с площадью менее 0,17 
площади пика примеси А на хроматограмме 
раствора сравнения (а) (0,05 %).

Тяжелые металлы

  (

2.4.8, метод В

). Не 

более 0,002 % (20 ppm). 5,0 мл раствора S до-
водят 

метанолом Р

 до объема 20,0 мл. 12 мл 

полученного раствора должны выдерживать 
испытание на тяжелые металлы. Эталон го-
товят с использованием эталонного раствора 
свинца (1 ppm Pb), полученного путем разве-
дения 

эталонного раствора свинца (100 ppm 

Pb) Р метанолом Р

.

#

 

Остаточные количества органических 

растворителей 

(

2.4.24

). Испытуемый образец 

должен выдерживать требования статьи (

5.4

).

#

 

Микробиологическая чистота

 

(

2.6.12, 

2.6.13, 5.1.4

). Трибенозид в условиях испы-

тания обладает антимикробным действием. 
Посев на питательные среды № 1, № 2 и № 11 
проводят из разведения 1:10, на питательную 
среду № 8 — из разведения 1:50.

КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ

Жидкостная хроматография (

2.2.29

), как 

указано в испытании «Сопутствующие приме-
си», со следующими изменениями.

Объем вводимой пробы

: по 20 мкл испытуе-

мого раствора (b) и раствора сравнения (b).

Содержание суммы α-аномера и β-аномера 

трибенозида рассчитывают в процентах.

ХРАНЕНИЕ

В воздухонепроницаемом контейнере в 

среде азота.

ПРИМЕСИ

O

O

O

O

R

O

H

O

CH

3

CH

3

A. R = CH

2

-C

6

H

5

: 3,5,6-Три-

O

-бензил-1,2-

O

-

(1-метилэтилиден)-α-D-глюкофураноза.

B. R = H: 3,5-Ди-

O

-бензил-1,2-

O

-(1-метил-

этилиден)-α-D-глюкофураноза.

C. C

6

H

5

-CHO: Бензальдегид.

D. C

6

H

5

-CH

2

-O-CH

2

-C

6

H

5

: Дибензиловый эфир.

 ТРИМЕТАЗИДИНА ДИГИДРОХЛОРИД

Trimetazidini dihydrochloridum

TRIMETAZIDINE DIHYDROCHLORIDE

N

HN

OCH

3

OCH

3

OCH

3

2 HCl

С

14

Н

22

N

2

O

3

 · 2HCl 

 М.м. 339,3

ОПРЕДЕЛЕНИЕ

Триметазидина дигидрохлорид содержит не 

менее 98,5 % и не более 101,5 % 1-(2,3,4-триме-
токсибензил)пиперазина дигидрохлорида в пе-
ресчете на сухое вещество.

ОПИСАНИЕ (СВОЙСТВА)

Белый или почти белый кристаллический 

порошок. Слегка гигроскопичен.

Легкорастворим в воде, умеренно раство-

рим в 96 % спирте.

ПОДЛИННОСТЬ (ИДЕНТИФИКАЦИЯ)

А.

 Абсорбционная спектрофотометрия в ин-

фракрасной области (

2.2.24

).

Сравнение

: 

эталонный спектр триметази-

дина дигидрохлорида

 

по Европейской Фармако-

пее

 # или спектр, представленный на рисунке 1.

В.

 25 мг испытуемого образца растворяют в 

5 мл 

воды Р

. 2 мл полученного раствора дают 

реакцию (а) на хлориды (

2.3.1

).

ИСПЫТАНИЯ

Раствор S

. 1,0 г испытуемого образца раст-

воряют в 

воде Р

 и доводят до объема 10 мл этим 

же растворителем.

Прозрачность

  (

2.2.1

). Раствор S должен 

быть прозрачным.

Цветность 

(

2.2.2, метод II

). Окраска раствора 

S должна быть не интенсивнее эталона ВY(КЖ)

6

.

Сопутствующие примеси

. Жидкостная 

хроматография

 

(

2.2.29

).

583

Триметазидина дигидрохлорид

Испытуемый раствор.

 0,200 г испытуемо-

го образца растворяют в 

воде Р

 и доводят до 

объема 50,0 мл этим же растворителем.

Раствор сравнения (a). 

20,0 мг 

ФСО три-

метазидина для проверки пригодности хрома-
тографической системы

 растворяют в 

воде Р

 

и доводят до объема 5,0 мл этим же раствори-
телем.

Раствор сравнения (b). 

2,0 мл испытуемого 

раствора доводят 

водой Р

 до объема 100,0 мл. 

5,0 мл полученного раствора доводят 

водой Р

 до 

объема 100,0 мл.

Раствор сравнения (с). 

25,0 мл раст-

вора сравнения (b) доводят 

водой Р

 до объема 

50,0 мл.

Условия хроматографирования:

 

–

колонка

 длиной 0,15 м и внутренним ди-

аметром 4,6 мм, заполненная сферическим 

си-

ликагелем октадецилсилильным для хромато-
графии Р 

(размер частиц 5 мкм) с размером пор 

10 нм;

 

–

температура

: 30°С;

 

–

подвижная фаза

:

 

– подвижная фаза А: 

метанол Р

 — раст-

вор 2,87 г/л 

натрия гептансульфоната Р

, 

доведенный до рН 3,0 

кислотой фосфор-

ной разведенной Р

, (357:643, 

об/об

);

 

– подвижная фаза В: 

метанол Р

;

Время (мин)

Подвижная 

фаза А

(%, 

об/об

)

Подвижная 

фаза В

(%, 

об/об

)

0—50

95 → 75

5 → 25

50—52

75 → 95

25 → 5

 

–

скорость подвижной фазы

: 1,2 мл/мин;

 

–

спектрофотометрический детектор

, 

длина волны 240 нм;

 

–

уравновешивание колонки

: не менее 1 ч с 

соотношением подвижных фаз А:В (95:5, 

об/об

);

 

–

объем вводимой пробы

: 10 мкл.

Относительное удерживание

 (по отноше-

нию к треметазидину; время удерживания — 
около 25 мин): примесь D — около 0,2; примесь 
С — около 0,4; примесь Н — около 0,6; примесь 
А и примесь I — около 0,9; примесь Е — около 
0,95; примесь F — около 1,4; примесь B — 
около 1,8. 

Пригодность хроматографической сис-

темы

:

 

–

коэффициент разделения пиков

: не 

менее 3 (

H

p

 — высота пика примеси Е относи-

тельно базовой линии; 

H

v

 — расстояние между 

базовой линией и нижней точкой кривой, раз-
деляющей пики примеси Е и триметазидина на 
хроматограмме раствора сравнения (а));

 

–

отношение сигнал/шум

: не менее 10 для 

основного пика на хроматограмме раствора 
сравнения (с).

Предельное содержание примесей 

(для рас-

чета содержания примесей умножают площади 
пиков на соответствующие поправочные коэф-
фициенты: для примеси В — 0,55; для примеси 
С — 0,37, для примеси F — 0,71):

 

–

примеси А, В, С, D, E, F, H, I

 (не более 

0,1 %): на хроматограмме испытуемого раст-
вора площадь пика, соответствующего каждой 
из примесей, не должна превышать площадь 
основного пика на хроматограмме раствора 
сравнения (b);

Рисунок 1. 

Инфракрасный спектр триметазидина гидрохлорида.

 62

 64

 66

 68

 70

 72

 74

 76

 78

 80

 82

 84

 86

 88

 90

 92

 94

 96

Пропускание

 1000  

 1500  

 2000  

 3000  

Волновое  число  (см

-1

)

584

 

–

любая другая примесь

 (не более 0,1 %): на 

хроматограмме испытуемого раствора площадь 
любого пика, кроме основного и пиков примесей А, 
В, С, D, E, F, H и I, не должна превышать площадь 
основного пика на хроматограмме раствора срав-
нения (b);

 

–

сумма примесей

 (не более 0,2 %): на хрома-

тограмме испытуемого раствора сумма площадей 
всех пиков, кроме основного, не должна превышать 
2-кратную площадь основного пика на хромато-
грамме раствора сравнения (b).

На хроматограмме испытуемого раствора не 

учитывают пики с площадью менее 0,5 площади 
основного пика на хроматограмме раствора срав-
нения (c) (0,05 %).

Примесь G

. Не более 0,1 % в пересчете на 

безводный пиперазин. Тонкослойная хроматогра-
фия (

2.2.27

).

Испытуемый раствор. 

0,10 г испытуемого 

образца растворяют в 

метаноле Р

 и доводят до 

объема 10 мл этим же растворителем.

Раствор сравнения. 

22,6 мг 

пиперазина гидра-

та Р

 растворяют в 

метаноле Р 

и доводят до объема 

100 мл этим же растворителем. 10 мл полученного 
раствора доводят 

метанолом Р

 до объема 100 мл.

Пластинка

: 

ТСХ пластинка со слоем силика-

геля Р.

Подвижная фаза

: 

раствор аммиака концен-

трированный Р — 96 % спирт Р 

(20:80, 

об/об

).

Наносимый объем пробы

: 10 мкл.

Фронт подвижной фазы

: не менее 2/3 высоты 

пластинки.

Высушивание

: при температуре от 100°С до 

105°С в течение 30 мин.

Проявление

: пластинку опрыскивают 

реакти-

вом йодплатината Р

 и просматривают при днев-

ном свете.

Предельное содержание примесей

:

 

–

примесь G

: на хроматограмме испытуемо-

го раствора пятно, соответствующее примеси G, 
должно быть не интенсивнее пятна на хромато-
грамме раствора сравнения.

Потеря в массе при высушивании 

(

2.2.32

). 

Не более 2,5 %. 1,000 г испытуемого образца сушат 
над 

фосфора (V) оксидом Р

 при температуре 105°С 

и давлении не превышающем 15 кПа.

Сульфатная зола

 (

2.4.14, метод А

). Не более 

0,1 %. Определение проводят из 1,0 г испытуемого 
образца.

# Остаточные количества органических 

растворителей 

(

2.4.24

). Испытуемый образец 

должен выдерживать требования статьи (

5.4

).

# Микробиологическая чистота 

(

2.6.12, 

2.6.13, 5.1.4

). Триметазидина дигидрохлорид в 

условиях испытания не обладает антимикробным 
действием.

КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ

0,120 г испытуемого образца растворяют в 

50 мл 

воды Р

, прибавляют 1 мл 

кислоты азотной 

Р

 и титруют 

0,1 М раствором серебра нитрата 

по-

тенциометрически (

2.2.20

).

1 мл 

0,1 М раствора серебра нитрата 

соот-

ветствует 16,96 мг С

14

Н

22

N

2

O

3

·2HCl.

ХРАНЕНИЕ
В воздухонепроницаемом контейнере.

ПРИМЕСИ

Специфицированные примеси:

 

A, B, C, D, Е, 

F, G, Н, I.

N

HN

OCH

3

R1

R2

R3

R4

A. R1 = R4 = H, R2 = R3 = OCH

3

: 1-(3,4,5-Три-

метоксибензил)пиперазин.

Е. R1 = R3 = OCH

3

, R2 = R4 = H: 1-(2,4,5-Три-

метоксибензил)пиперазин.

F. R1 = R4 = OCH

3

, R2 = R3 = H: 1-(2,4,6-Три-

метоксибензил)пиперазин.

N

N

OCH

3

OCH

3

OCH

3

H

3

CO

H

3

CO

OCH

3

В. 1,4-Бис(2,3,4-триметоксибензил)пиперазин.

R

OCH

3

OCH

3

OCH

3

С. R = CHO: 2,3,4-Триметоксибензальдегид.
D. R = CH

2

OH: (2,3,4-Триметоксифенил)ме-

танол.

G. Пиперазин.

N

N

OCH

3

OCH

3

OCH

3

R

H. R = COOC

2

H

5

: Этил-4-(2,3,4-триметокси-

бензил)пиперазин-1-карбоксилат.

I. R = CH

3

: 1-Метил-4-(2,3,4-триметокси-

бензил)пиперазин (N-метилтриметазидин).

 ТРИМЕТОПРИМ

Trimethoprimum

TRIMETHOPRIM

N

N

OCH

3

OCH

3

OCH

3

NH

2

H

2

N

С

14

Н

18

N

4

O

4

 

 М.м. 290,3

585

Триметоприм

ОПРЕДЕЛЕНИЕ

Триметоприм содержит не менее 98,5 % и 

не более 101,0 

% 5-(3,4,5-триметоксибензил)-

пиримидин-2,4-диамина в пересчете на сухое 
вещество.

ОПИСАНИЕ (СВОЙСТВА)
Белый или желтовато-белый порошок.
Очень мало растворим в воде, малораство-

рим в 96 % спирте.

ПОДЛИННОСТЬ (ИДЕНТИФИКАЦИЯ)

Первая идентификация: С.
Вторая идентификация: А, В, D.

А.

 Температура плавления (

2.2.14

): от 199°С 

до 203°С.

В.

 Абсорбционная 

спектрофотометрия 

в ультрафиолетовой и видимой областях 
(

2.2.25

).

Испытуемый раствор

. 20 мг испытуемого 

образца растворяют в 

0,1 М растворе натрия 

гидроксида 

и доводят до объема 100,0 мл этим 

же растворителем. 1,0 мл полученного раствора 
доводят 

0,1 М раствором натрия гидроксида

 

до объема 10,0 мл. 

Диапазон длин волн

: от 230 нм до 350 нм.

Максимум поглощения

: при 287 нм.

Удельный показатель поглощения в макси-

муме

: от 240 до 250.

С.

 Абсорбционная спектрофотометрия в ин-

фракрасной области (

2.2.24

).

Приготовление

: в дисках.

Сравнение

: 

ФСО триметоприма

 # или 

спектр, представленный на рисунке 1

.

D.

 25 мг испытуемого образца раство-

ряют (при необходимости нагревают) в 5 мл 

0,005 М раствора кислоты серной

, прибав-

ляют 2 мл раствора 16 г/л 

калия пермангана-

та Р

 в 

0,1 М растворе натрия гидроксида

 

и нагревают до кипения. К горячему раствору 
прибавляют 0,4 мл 

раствора формальдеги-

да Р

, перемешивают, прибавляют 1 мл 

0,5 М 

раствора кислоты серной

, перемешивают, 

нагревают до кипения, охлаждают и филь-
труют. К полученному фильтрату прибавляют 
2 мл 

метиленхлорида Р

 и интенсивно встря-

хивают. Органический слой в ультрафиолето-
вом свете при длине волны 365 нм имеет флу-
оресценцию зеленого цвета.

ИСПЫТАНИЯ

Цветность

 (

2.2.2, метод II

). 0,5 г испыту-

емого образца растворяют в 10 мл смеси из 
1 объема 

воды Р

, 4,5 объемов 

метанола Р

 и 

5 объемов 

метиленхлорида Р

. Окраска полу-

ченного раствора должна быть не интенсив-
нее эталона BY(КЖ)

7

.

Сопутствующие примеси

.

А

. Жидкостная хроматография

 

(

2.2.29

).

Испытуемый раствор. 

25,0 мг испытуе-

мого образца растворяют в подвижной фазе 
и доводят до объема 25,0 мл этим же раство-
рителем.

Раствор сравнения (а). 

1,0 мл испытуе-

мого раствора доводят подвижной фазой до 
объема 200,0 мл.

Раствор сравнения (b). 

Содержимое кон-

тейнера 

ФСО триметоприма для проверки 

Рисунок 1. 

Инфракрасный спектр пропускания ФСО триметоприма в дисках с калия бромидом Р.

 10

 15

 20

 25

 30

 35

 40

 45

 50

 55

 60

 65

 70

 75

 80

 85

 90

 95

 100

Пропускание

 500 

 1000 

 1500 

 2000 

 2000 

 3000 

Волновое  число  (см

-1

)

586

пригодности хроматографической системы

 

(содержит примесь Е) растворяют в 1 мл под-
вижной фазы.

Условия хроматографирования:

 

–

колонка

 длиной 0,25 м и внутренним диа-

метром 4,0 мм, заполненная 

силикагелем окта-

децилсилильным, деактивированным по отно-
шению к основаниям, для хроматографии Р 

с 

размером частиц 5 мкм;

 

–

подвижная фаза

: 

метанол Р

 — раствор 

1,4 г/л 

натрия перхлората Р

, доведенный до 

рН 3,6 

кислотой фосфорной Р

, (30:70, 

об/об

);

 

–

скорость подвижной фазы

: 1,3 мл/мин;

 

–

спектрофотометрический детектор

, 

длина волны 280 нм;

 

–

объем вводимой пробы

: 20 мкл;

 

–

время хроматографирования

: 11-кратное 

время удерживания триметоприма.

Относительное удерживание

 (по отноше-

нию к триметоприму; время удерживания — около 
5 мин): примесь С — около 0,8; примесь Е — около 
0,9; примесь А — около 1,5; примесь D — около 
2,0; примесь G — около 2,1; примесь В — около 
2,3; примесь J — около 2,7; примесь F — около 4,0.

Пригодность хроматографической систе-

мы

: раствор сравнения (b):

 

–

разрешение

: не менее 2,5 между пиками 

примеси Е и триметоприма.

Предельное содержание примесей

 (для рас-

чета содержания примесей умножают площади 
пиков на соответствующие поправочные коэф-
фициенты: для примеси В — 0,43, для примеси 
Е — 0,53, для примеси J — 0,66):

 

–

любая примесь

 (не более 0,1 %): на хро-

матограмме испытуемого раствора площадь 
любого пика, кроме основного, не должна пре-
вышать 0,2 площади основного пика на хрома-
тограмме раствора сравнения (а);

 

–

сумма примесей

 (не более 0,2 %): на хро-

матограмме испытуемого раствора сумма пло-
щадей всех пиков, кроме основного, не должна 
превышать 0,4 площади основного пика на хро-
матограмме раствора сравнения (a).

На хроматограмме испытуемого раствора 

не учитывают пики с площадью менее 0,04 пло-
щади основного пика на хроматограмме раст-
вора сравнения (а) (0,02 %), и пик примеси H (от-
носительное удерживание — около 10,3).

В

. Жидкостная хроматография

 

(

2.2.29

).

Испытуемый раствор. 

25,0 мг испытуемого 

образца растворяют в подвижной фазе и дово-
дят до объема 25,0 мл этим же растворителем.

Раствор сравнения (а). 

1,0 мл испытуемого 

раствора доводят подвижной фазой до объема 
200,0 мл.

Раствор сравнения (b). 

5,0 мг 

ФСО триме-

топрима

 и 5,0 мг 

ФСО триметоприма

 

приме-

си В

 растворяют в подвижной фазе и доводят до 

объема 100,0 мл этим же растворителем.

Условия хроматографирования:

 

–

колонка

 длиной 0,25 м и внутренним ди-

аметром 4,6 мм, заполненная 

силикагелем ни-

трильным для хроматографии Р 

(размер 

частиц 5 мкм) с удельной площадью поверхно-
сти 350 м

2

/г и размером пор 10 нм;

 

–

подвижная фаза

: 1,14 г 

натрия гексан-

сульфоната

 

Р

 растворяют в 600 мл раствора 

13,6 г/л 

калия дигидрофосфта Р

, доводят до 

рН 3,1 

кислотой фосфорной Р

 и смешивают 

с 400 мл 

метанола Р

;

 

–

скорость подвижной фазы

: 0,8 мл/мин;

 

–

спектрофотометрический детектор

, 

длина волны 280 нм;

 

–

объем вводимой пробы

: 20 мкл;

 

–

время хроматографирования

: 6-крат-

ное время удерживания триметоприма.

Относительное удерживание

 (по от-

ношению к триметоприму; время удержива-
ния — около 4 мин): примесь Н — около 1,8; 
примесь I — около 4,9.

Пригодность хроматографической си-

стемы

: раствор сравнения (b):

 

–

разрешение

: не менее 2,0 между пиками 

триметоприма и примеси В.

Предельное содержание примесей

 (для 

расчета содержания примесей умножают пло-
щади пиков на соответствующие поправоч-
ные коэффициенты: для примеси Н — 0,50, 
для примеси I — 0,28):

 

–

любая примесь

 (не более 0,1 %): на хро-

матограмме испытуемого раствора площадь 
любого пика, кроме основного, не должна пре-
вышать 0,2 площади основного пика на хро-
матограмме раствора сравнения (а);

 

–

сумма примесей

 (не более 0,2 

%): 

на хроматограмме испытуемого раствора 
сумма площадей всех пиков, кроме основ-
ного, не должна превышать 0,4 площади 
основного пика на хроматограмме раствора 
сравнения (a).

На хроматограмме испытуемого раст-

вора не учитывают пики с площадью менее 
0,04 площади основного пика на хромато-
грамме раствора сравнения (а) (0,02 %) и 
пик примеси В (относительное удержива-
ние — около 1,3).

Примесь К

. Не более 0,0005 % (5 ppm). 

Газовая хроматография

 

(

2.2.28

).

Испытуемый раствор.

 0,500 г испытуе-

мого образца растворяют в 35,0 мл 

цитрат-

ного буферного раствора рН 5,0 Р

, прибав-

ляют 10,0 мл 

1,1-диметилэтилметилового 

эфира Р

, интенсивно встряхивают и центри-

фугируют в течение 10 мин. Используют верх-
ний слой.

Раствор сравнения. 

5,0 мл 

кислоты хло-

ристоводородной Р

 доводят 

водой Р

 до объема 

50,0 мл, прибавляют 12,5 мг 

анилина Р

 (при-

месь К) и интенсивно встряхивают. 10,0 мкл по-
лученного раствора и 10,0 мл 

1,1-диметилэ-

тилметилового эфира Р

 прибавляют к 35,0 мл 

цитратного буферного раствора рН 5,0 Р

, 

интенсивно встряхивают и центрифугируют в 
течение 10 мин. Используют верхний слой.

587

Триметоприм

Условия хроматографирования:

 

–

колонка

 капиллярная кварцевая длиной 

30 м и внутренним диаметром 0,53 мм, покры-
тая слоем 

поли(диметил)силоксана Р 

(тол-

щина слоя 3 мкм);

 

–

газ-носитель

: 

гелий

 

для хроматографии Р

;

 

–

скорость газа-носителя

: 12 мл/мин;

 

–

температура

: колонка — 80°С, блок 

ввода проб — 230°С, детектор — 270°С;

 

–

объем вводимой пробы

: 3 мкл;

 

–

детектор

: термоионизационный, азот- 

и фосфор-селективный;

 

–

время хроматографирования

: 15 мин.

Пригодность хроматографической си-

стемы

: раствор сравнения:

 

–

относительное стандартное откло-

нение

: не более 5,0 % для площадей пиков 

при шести повторных вводах пробы.

Предельное содержание примесей

:

 

–

примесь К

: на хроматограмме испыту-

емого раствора площадь пика примеси К не 
должна превышать площадь соответствующе-
го пика на хроматограмме раствора сравнения.

Тяжелые металлы

  (

2.4.8, метод С

). Не 

более 0,002 % (20 ppm). 1,0 г испытуемого об-
разца должен выдерживать испытание на тя-
желые металлы. Эталон готовят с использо-
ванием 2 мл 

эталонного раствора свинца 

(10 ppm Pb) Р.

Потеря в массе при высушивании 

(

2.2.32

). Не более 1,0 %. 1,000 г испытуемого 

образца сушат при температуре 105°С.

Сульфатная зола

  (

2.4.14, метод А

). Не 

более 0,1 %. Определение проводят из 1,0 г 
испытуемого образца.

# Остаточные количества органических 

растворителей

 (

2.4.24

). Испытуемый образец 

должен выдерживать требования статьи (

5.4

).

#

 

Микробиологическая чистота

 

(

2.6.12, 

2.6.13, 5.1.4

). Триметоприм в условиях ис-

пытания обладает антимикробным действи-
ем. Для устранения антимикробного дей-
ствия используют инактиватор — 

кислоту 

4-аминобензойную Р

, которую вносят в фос-

фатный буферный раствор из расчета 0,05 г 
на 1 л среды. Посев на питательные среды 
№ 8 и № 11 проводят для исключения воз-
можности присутствия устойчивых к тримето-
приму штаммов микроорганизмов из разве-
дения 1:50.

КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ

0,250 г испытуемого образца растворяют 

в 50 мл 

кислоты уксусной безводной Р

 и ти-

труют 

0,1 М раствором кислоты хлорной

 по-

тенциометрически (

2.2.20

).

1 мл 

0,1 М раствора кислоты хлорной 

соответствует 29,03 мг С

14

Н

18

N

4

O

3

.

ПРИМЕСИ

Определяемые жидкостной хроматогра-

фией (А): А, В, С, D, E, F, G, H, J.

Определяемые жидкостной хроматогра-

фией (В): B, H, I.

Определяемые газовой хроматографи-

ей: K.

N

N

OCH

3

OCH

3

OCH

3

NH

2

N

H

H

3

C

A. 

N

2

-Метил-5-(3,4,5-триметоксибензил)пирими-

дин-2,4-диамин.

N

N

OCH

3

OCH

3

OCH

3

NH

2

H

2

N

R

R'

и энантиомер

B. R + R′ = O: (2,4-Диаминопиримидин-5-ил)-

(3,4,5-триметоксифенил)метанон.

C. R = OH, R′ = H: (

RS

)-(2,4-Диамино-пири-

мидин-5-ил)(3,4,5-триметоксифенил)метанол.

N

N

OCH

3

OCH

3

OCH

3

R4

R2

D. R2 = NH

2

, R4 = OH: 2-Амино-5-(3,4,5-

триметоксибензил)пиримидин-4-ол.

E. R2 = OH, R4 = NH

2

: 4-Амино-5-(3,4,5-

триметоксибензил)пиримидин-2-ол.

N

N

R3

R4

OCH

3

NH

2

H

2

N

F. R3 = Br, R4 = OCH

3

: 5-(3-Бром-4,5-

диметоксибензил)пиримидин-2,4-диамин.

G. R3 = OCH

3

, R4 = OC

2

H

5

: 5-(4-Этокси-3,5-

диметоксибензил)пиримидин-2,4-диамин.

O

OCH

3

OCH

3

OCH

3

R

O

H. R = CH

3

: Метил-3,4,5-триметоксибензоат.

J. R = H: 3,4,5-Триметоксибензойная кислота.

NC

N

H

OCH

3

OCH

3

OCH

3

I. 3-(Фениламино)-2-(3,4,5-триметоксибензил)-

проп-2-еннитрил.

NH

2

К. Анилин.

588

 ТРИПТОФАН

Tryptophanum

TRYPTOPHAN

HN

CO

2

H

H

NH

2

C

11

H

12

N

2

O

2

 

 М.м. 204,2

ОПРЕДЕЛЕНИЕ

Триптофан содержит не менее 98,5 % и не 

более 101,0 % (

S

)-2-амино-3-(1

H

-индол-3-ил)про-

пионовой кислоты в пересчете на сухое вещество.

ОПИСАНИЕ (СВОЙСТВА)

Белый или почти белый кристаллический 

или аморфный порошок.

Умеренно растворим в воде, малораство-

рим в 96 % спирте. Растворяется в разведенных 
растворах минеральных кислот и растворах ги-
дроксидов щелочных металлов.

ПОДЛИННОСТЬ (ИДЕНТИФИКАЦИЯ)

Первая идентификация: А, В.
Вторая идентификация: А, С, D.

А.

 Испытуемый образец выдерживает испы-

тание «Удельное оптическое вращение» как ука-
зано в разделе «Испытания».

B.

 Абсорбционная спектрофотометрия в ин-

фракрасной области (

2.2.24

).

Приготовление

: в диска х.

Сравнение

: 

ФСО 

триптофана # или спектр, 

представленный на рисунке 1.

C.

 Просматривают хроматограммы, получен-

ные в испытании «Нингидрин-положительные ве-
щества». На хроматограмме испытуемого раст-
вора (b) обнаруживается пятно, соответствующее 
по расположению, размеру и цвету основному 
пятну на хроматограмме раствора сравнения (а).

D.

 20 мг испытуемого образца растворяют 

в 10 мл 

воды Р

, прибавляют 5 мл 

раствора ди-

метиламинобензальдегида Р6

, 2 мл 

кислоты 

хлористоводородной Р1

  и

 

нагревают на водя-

ной бане. Появляется фиолетово-синее окра-
шивание.

ИСПЫТАНИЯ

Раствор S

. 0,1 г испытуемого образца раст-

воряют в 

1 М растворе кислоты хлористоводо-

родной 

и доводят до объема 10 мл этим же раст-

ворителем.

Прозрачность 

(

2.2.1

). Раствор S должен 

быть прозрачным.

Цветность 

(

2.2.2, метод II

). Окраска раст-

вора S должна быть не интенсивнее эталона 
BY(КЖ)

6

.

Удельное оптическое вращение

  (

2.2.7

). 

От -30,0 до -33,0 в пересчете на сухое веще-
ство. 0,25 г испытуемого образца растворяют в 

воде Р

, при необходимости нагревая на водяной 

бане, и доводят до объема 25,0 мл этим же раст-
ворителем.

Нингидрин-положительные вещества

. 

Тонкослойная хроматография (

2.2.27

).

Рисунок 1. 

Инфракрасный спектр пропускания ФСО триптофана в дисках с калия бромидом Р.

 45

 50

 55

 60

 65

 70

 75

 80

 85

 90

 95

 100

Пропускание

 500 

 1000 

 1500 

 2000 

 2000 

 3000 

 4000 

Волновое  число  (см

-1

)

589

Триптофан

Смесь растворителей.

 

Кислота уксусная 

ледяная Р — вода Р

 (50:50, 

об/об

).

Испытуемый раствор (а).

 0,1 г испытуемого 

образца растворяют в смеси растворителей и до-
водят до объема 10 мл этим же растворителем.

Испытуемый раствор (b)

. 1,0 мл испытуе-

мого раствора (a) доводят смесью растворите-
лей до объема 50 мл.

Раствор сравнения (а).

 10 мг 

ФСО трипто-

фана

 растворяют в смеси растворителей и до-

водят до объема 50 мл этим же растворителем. 

Раствор сравнения (b). 

5 мл испытуемого 

раствора (b) доводят смесью растворителей до 
объема 20 мл.

Раствор сравнения (с).

 10 мг 

ФСО трипто-

фана

 и 10 мг 

ФСО тирозина

 растворяют в смеси 

растворителей и доводят до объема 25 мл этим 
же растворителем.

Пластинка

:

 ТСХ пластинка со слоем сили-

кагеля Р

.

Подвижная фаза

: 

кислота уксусная ледяная 

Р 

— 

вода Р —

 

бутанол Р

 (20:20:60, 

об/об/об).

Наносимый объем пробы

:

 

5 мкл.

Фронт подвижной фазы

: не менее 15 см от 

линии старта.

Высушивание

: на воздухе.

Проявление

: пластинку опрыскивают 

рас-

твором нингидрина Р

 и нагревают при темпера-

туре от 100°С до 105°C в течение 15 мин.

Пригодность хроматографической систе-

мы

: раствор сравнения (с):

 

– на хроматограмме обнаруживаются два 

полностью разделенных пятна.

Предельное содержание примесей

: 

 

–

любая примесь

 (не более 0,5 %): на хро-

матограмме испытуемого раствора (а) любое 
пятно, кроме основного, должно быть не интен-
сивнее основного пятна на хроматограмме раст-
вора сравнения (b).

Примесь А и другие сопутствующие при-

меси.

 Жидкостная хроматография (

2.2.29

). 

Эта-

лонный раствор, испытуемые растворы и рас-
творы сравнения готовят непосредственно 
перед использованием

.

Буферный раствор pH 2,3

. 3,90 г 

натрия 

дигидрофосфата Р 

растворяют в 1000 мл 

воды 

Р

, прибавляют около 700 мл раствора 2,9 г/л

 кис-

лоты фосфорной Р

 и доводят до pH 2,3 этим же 

раствором кислоты.

Смесь растворителей

. 

Ацетонитрил Р

 — 

вода Р

 (10:90, 

об/об

).

Эталонный раствор

. 10,0 мг 

N-ацетил-

триптофана Р

 растворяют в смеси растворите-

лей

 

и доводят до объема 100,0 мл этим же раст-

ворителем. 2,0 мл полученного раствора дово-
дят смесью растворителей до объема 100,0 мл.

Испытуемый раствор (a)

. 0,10 г испытуе-

мого образца растворяют в смеси растворите-
лей и доводят до объема 10,0 мл этим же раст-
ворителем.

Испытуемый раствор (b)

. 0,10 г испытуе-

мого образца растворяют в эталонном растворе 

и доводят до объема 10,0 мл этим же раствори-
телем.

Раствор сравнения (а).

 Содержимое кон-

тейнера 

ФСО 1,1’-этилиденбистриптофана

 

(примесь А) растворяют в 1,0 мл смеси раство-
рителей.

Раствор сравнения (b)

. Содержимое кон-

тейнера 

ФСО 1,1’-этилиденбистриптофа-

на

 (примесь А) растворяют в 1,0 мл эталонно-

го раствора.

Раствор сравнения (с).

 0,5 мл раствора 

сравнения (а) доводят смесью растворителей до 
объема 5,0 мл.

Условия хроматографирования:

 

–

колонка

 длиной 0,25 м и внутренним диа-

метром 4,6 мм, заполненная 

силикагелем окта-

децилсилильным для хроматографии Р

 с раз-

метом частиц 5 мкм;

 

–

температура

: 40°С;

 

–

подвижная фаза

:

 

– подвижная фаза А: 

ацетонитрил Р

 — 

буферный раствор pH 2,3 (115:885, 

об/об

);

 

– подвижная фаза В: 

ацетонитрил Р

 — 

буферный раствор pH 2,3 (350:650, 

об/об

);

Время (мин)

Подвижная 

фаза А

(%, 

об/об

)

Подвижная 

фаза В

(%, 

об/об

)

0—10

100

0

10—45

100 → 0

0 → 100

45—65

0

100

65—66

0 → 100

100 → 0

66—80

100

0

 

–

скорость подвижной фазы

: 0,7 мл/мин;

 

–

спектрофотометрический детектор

, 

длина волны 220 нм;

 

–

объем вводимой пробы

: по 20 мкл испы-

туемых растворов (a) и (b) и растворов сравне-
ния (b) и (с).

Времена удерживания

: триптофан — около 

8 мин; 

N

-ацетилтриптофан — около 29 мин; при-

месь А — около 34 мин.

Пригодность хроматографической сис-

темы

:

 

–

разрешение

: не менее 0,8 между пиками 

N

-ацетилтриптофана и примеси А на хрома-

тограмме раствора сравнения (b); при необ-
ходимость изменяют временную программу 
градиента (увеличение времени элюирования по-
движной фазой А приводит к увеличению времен 
удерживания и лучшему разрешению);

 

–

отношение сигнал/шум

: не менее 15 для 

основного пика на хроматограмме раствора 
сравнения (с);

 

–

фактор асимметрии

: не более 3,5 для 

пика примеси А на хроматограмме раствора 
сравнения (b);

 

– на хроматограмме испытуемого раст-

вора (а) не должно обнаруживаться пика со 
временем удерживания, соответствующим 

590

N

-ацетилтриптофану (в случае присутствия 

такого пика необходимо откорректировать пло-
щадь пика 

N

-ацетилтриптофана # на хромато-

грамме испытуемого раствора (b)).

Предельное содержание примесей:

 

–

примесь А

 (не более 10 ppm): на хромато-

грамме испытуемого раствора (b) площадь пика, 
соответствующего примеси А, не должна превы-
шать 0,5 площади основного пика на хромато-
грамме раствора сравнения (с);

 

–

сумма примесей со временами удержива-

ния, меньшими чем время удерживания трип-
тофана 

(не более 100 ppm): на хроматограм-

ме испытуемого раствора (b) сумма площадей 
пиков с временами удерживания, меньшими чем 
время удерживания триптофана, не должна пре-
вышать 0,6 площади пика 

N

-ацетилтриптофана 

на хроматограмме раствора сравнения (b);

 

–

сумма примесей со временами удержива-

ния, большими чем время удерживания трип-
тофана и меньшими чем 1,8 времени удержива-
ния N-ацетилтриптофана 

(не более 300 ppm): 

на хроматограмме испытуемого раствора (b) 
сумма площадей пиков с временами удержива-
ния, большими чем время удерживания трипто-
фана и меньшими чем 1,8 времени удержива-
ния 

N

-ацетилтриптофана, не должна превышать 

1,9-кратную площадь пика 

N

-ацетилтриптофана 

на хроматограмме раствора сравнения (b).

На хроматограмме испытуемого раст-

вора не учитывают пики с площадью менее 
0,02 площади пика 

N

-ацетилтриптофана на 

хроматограмме раствора сравнения (b) и пик 

N

-ацетилтриптофана.

Хлориды

 (

2.4.4

). Не более 0,02 % (200 ppm). 

0,25 г испытуемого образца растворяют в 3 мл 
кислоты азотной разведенной и доводят 

водой Р

 

до объема 15 мл. Полученный раствор без даль-
нейшего прибавления кислоты азотной должен 
выдерживать испытание на хлориды.

Сульфаты 

(

2.4.13

). Не более 0,03 

% 

(300 ppm). 0,5 г испытуемого образца растворяют 
в смеси 

кислота хлористоводородная разведен-

ной Р —

 

вода дистиллированная Р

 (5:25, 

об/об

) и 

доводят до объема 15 мл этим же растворителем.

Аммония соли 

(

2.4.1, метод В

). Не более 

0,02 % (200 ppm). 0,10 г испытуемого образца 
должны выдерживать испытание на аммония 
соли. Эталон готовят с использованием 0,2 мл 

эталонного раствора аммония (100 ppm NH

4

) Р.

Железо 

(

2.4.9

). Не более 0,002 % (20 ppm). 

0,50 г испытуемого образца помещают в дели-
тельную воронку, растворяют в 10 мл 

кислоты 

хлористоводородной разведенной Р

, встряхива-

ют трижды, каждый раз в течение 3 мин, с 

ме-

тилизобутилкетоном Р1

 порциями по 10 мл. 

Объединенные органические слои встряхивают 
с 10 мл 

воды Р

 в течение 3 мин. Водный слой 

должен выдерживать испытание на железо.

Тяжелые металлы 

(

2.4.8, метод D

). Не 

более 0,001 % (10 ррm). 2,0 г испытуемого об-
разца должны выдерживать испытание на тя-

желые металлы. Эталон готовят с использо-
ванием 2 мл 

эталонного раствора свинца 

(10 ppm Pb) Р

.

Потеря в массе при высушивании 

(

2.2.32

). 

Не более 0,5 %. 1,000 г испытуемого образца 
сушат при температуре 105°С.

Сульфатная зола 

(

2.4.14, метод А

). Не 

более 0,1 %. Определение проводят из 1,0 г ис-
пытуемого образца.

#

 

Остаточные количества органических 

растворителей 

(

2.4.24

). Испытуемый образец 

должен выдерживать требования статьи (

5.4

).

#

 

Микробиологическая чистота 

(

2.6.12, 

2.6.13, 5.1.4

). Триптофан в условиях испытания 

не обладает антимикробным действием.

КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ 

0,150 г испытуемого образца растворяют в 

3 мл 

кислоты муравьиной безводной Р

, прибав-

ляют 30 мл 

кислоты уксусной безводной Р

 и ти-

труют 

0,1 М раствором кислоты хлорной

, ис-

пользуя в качестве индикатора 0,1 мл 

раствора 

нафтолбензеина Р

.

1 мл 

0,1 М раствора кислоты хлорной

 соот-

ветствует 20,42 мг C

11

H

12

N

2

O

2

.

ХРАНЕНИЕ
В защищенном от света месте.

ПРИМЕСИ

N

CO

2

H

H

NH

2

CH

3

N

HO

2

C

H

NH

2

A. 3,3’-[Этилиденбис(1

H

-индол-1,3-диил)]бис

[(2

S

)-2-аминопропановая] кислота (1,1’-этили-

денбистриптофан).

∗

HN

CO

2

H

H

NH

2

OH

и эпимер у С*

O

B. (

S

)-2-Амино-3-[(3

RS

)-3-гидрокси-2-оксо-

2,3-дигидро-1

H

-индол-3-ил]пропановая кислота 

(диоксииндолилаланин).

HN

R

O

CO

2

H

H

NH

2

C. R = H: (

S

)-2-Амино-4-(2-аминофенил)-4-

оксобутановая кислота (кинуренин).

E. R = CHO: (

S

)-2-Амино-4-[2-(формил-амино)

фенил]-4-оксобутановая кислота (

N

-формил-

кинуренин).

HN

CO

2

H

H

NH

2

HO

D. (

S

)-2-Амино-3-(5-гидрокси-1

H

-индол-3-ил)про-

пановая кислота (5-гидрокситриптофан).

591

Троксерутин

H

N

CO

2

H

H

NH

2

F. (

S

)-2-Амино-3-(фениламино)пропановая 

кислота (3-фениламиноаланин).

HN

CO

2

H

H

NH

2

OH

G. (

S

)-2-Амино-3-(2-гидрокси-1

H

-индол-3-ил)про-

пановая кислота (2-гидрокситриптофан)

H

N

∗

NH

∗

R

CO

2

H

H. R = H: (3

RS

)-1,2,3,4-Тетрагидро-9

H-

β-кор-

болин-3-карбоновая кислота.

I. R = CH

3

: 1-Метил-1,2,3,4-тетрагидро-9

H

-β-

карболин-3-карбоновая кислота.

HN

∗

CO

2

H

H

H

2

N

R

∗

NH

J. R = CHOH-CH

2

-OH: (

S

)-2-Амино-3-[2-[2,3-

дигидрокси-1-(1

H

-индол-3-ил)пропил]-1

H

-индол-

3-ил]пропановая кислота.

K. R = H: (

S

)-2-Амино-3-[2-(1

H

-индол-3-илме-

тил)-1

H

-индол-3-ил]пропановая кислота.

H

N

∗

NH

∗

CO

2

H

NH

L. 1-(1

H

-Индол-3-илметил)-1,2,3,4-тетрагидро-

9

H

-β-карболин-3-карбоновая кислота.

 ТРОКСЕРУТИН

Troxerutinum

TROXERUTIN

O

O

OH

CH

3

OH

OH

OH

OH

OH

O

O

O

HO

O

O

OH

O

OH

O

HO

С

33

Н

42

О

19

 

 М.м. 743

Рисунок 1. 

Инфракрасный спектр пропускания ФСО троксерутина

.

 54

 56

 58

 60

 62

 64

 66

 68

 70

 72

 74

 76

 78

 80

 82

 84

 86

 88

 90

 92

 94

Пропускание

 500 

 1500 

 2000 

 2000 

 3000 

Волновое  число  (см

-1

)

592

ОПРЕДЕЛЕНИЕ 

Троксерутин представляет собой смесь 

О

-гидроксиэтилированных производных рутина, 

содержащую не менее 80,0 

% 2-[3,4-бис(2-

гидроксиэтокси)фенил]-3-[[6-

О

-(6-дезокси-

α-L-маннопиранозил)-β-D-глюкопиранозил]-
окси]-5-гидрокси-7-(2-гидроксиэтокси)-4

Н

-1-

бензопиран-4-он(трис(гидроксиэтил)рутин), и 
содержит не менее 95,0 % и не более 105,0 % 
С

33

Н

42

О

19

 в пересчете на сухое вещество.

ОПИСАНИЕ (СВОЙСТВА)

Желтовато-зеленый кристаллический поро-

шок. Гигроскопичен.

Легкорастворим в воде, малорастворим в 

96 % спирте, практически нерастворим в мети-
ленхлориде.

ПОДЛИННОСТЬ (ИДЕНТИФИКАЦИЯ)

А. 

Абсорбционная спектрофотометрия в 

инфракрасной области (

2.2.24

).

Сравнение

: 

ФСО троксерутина 

# или 

спектр, представленный на рисунке 1.

В. 

Просматривают хроматограммы, по-

лученные в испытании «Состав». Основной 
пик на хроматограмме испытуемого раствора 
по времени удерживания и площади соот-
ветствует основному пику на хроматограмме 
раствора сравнения (а).

ИСПЫТАНИЯ

Состав

. Жидкостная хроматография

 

(

2.2.29

): определение проводят методом вну-

тренней нормализации.

Испытуемый раствор

. 10,0 мг испытуе-

мого образца растворяют в подвижной фазе, 
при необходимости используя ультразвуко-
вую баню, и доводят подвижной фазой до 
объема 10,0 мл.

Раствор сравнения (а).

 10,0 мг 

ФСО 

троксерутина 

растворяют в подвижной 

фазе, при необходимости используя ультра-
звуковую баню, и доводят подвижной фазой 
до объема 10,0 мл.

Раствор сравнения (b

). 1 мл раствора 

сравнения (а) доводят подвижной фазой до 
объема 10 мл

.

 1 мл полученного раствора до-

водят подвижной фазой до объема 100 мл

.

Условия хроматографирования:

 

–

колонка

 длиной 0,25 м и внутренним ди-

аметром 4,6 мм, заполненная 

силикагелем 

октадецилсилильным эндкепированным для 
хроматографии Р

, с размером частиц 5 мкм;

 

–

подвижная фаза

: смесь из 20 объе-

мов 

ацетонитрила Р 

и 80 объемов

 

раствора

 

15,6 г/л

 натрия дигидрофосфата Р

, дове-

денного 

кислотой фосфорной разведенной Р

 

или 

раствором натрия гидроксида разведен-

ным Р

 до рН 4,4;

 

–

скорость подвижной фазы

: 0,5 мл/мин;

 

–

спектрофотометрический детектор

, 

длина волны 350 нм;

 

–

объем вводимой пробы

: 10 мкл;

 

–

время хроматографирования

: 2-крат-

ное время удерживания основного компонен-
та троксерутина (трис(гидроксиэтил)рутин).

Относительное удерживание

 (по отно-

шению к трис(гидроксиэтил)рутину; время 
удерживания — около 25 мин): тетракис-
(гидроксиэтил)-рутин — около 0,5; 
моно(гидроксиэтил)рутин — около 0,8; 
бис(гидроксиэтил)рутин — около 1,1.

Пригодность хроматографической си-

стемы

: раствор сравнения (а):

 

–

коэффициент разделения пиков

: не ме-

нее 2,0 (

H

p

 — высота пика бис(гидроксиэтил)-

рутин относительно базовой линии; 

H

v

 — рас-

стояние между базовой линией и нижней точкой 
кривой, разделяющей пики бис(гидроксиэтил)
рутина и трис(гидроксиэтил)рутина).

 

–

отношение сигнал/шум

: не менее 10 

для основного пика на хроматограмме раст-
вора сравнения (b).

Состав

:

 

–

основной пик

: не менее 80 %;

 

–

любые другие пики

: не более 5 %; допу-

скается присутствие одного пика более 5 %, 
но менее 10 %. 

На хроматограмме испытуемого раствора 

не учитывают пики с площадью менее пло-
щади основного пика на хроматограмме раст-
вора сравнения (b).

Этиленоксид

. Не более 0,0001 

% 

(1 ррm). Парофазная газовая хроматогра-
фия (

2.2.28

).

Испытуемый раствор

. К 1,00 г испытуе-

мого образца во флаконе прибавляют 1,0 мл 

воды Р 

и перемешивают до получения гомо-

генного раствора. Нагревают при температу-
ре 70°С в течение 45 мин.

Раствор сравнения.

 К 1,00 г испытуемо-

го образца во флаконе прибавляют 50 мкл 

этилен-оксида

 

раствора Р4 

и 950 мкл 

воды 

Р

, плотно укупоривают. Нагревают при темпе-

ратуре 70°С в течение 45 мин.

Условия хроматографирования:

 

–

колонка

 кварцевая капиллярная длиной 

30 м и диаметром 0,32 мм, покрытая слоем 

п ол и ( ц и а н о п р о п и л ) ( 7 ) ( ф е н и л ) ( 7 ) ( м ет и л )
(86)-силоксана Р

 (толщина слоя 1 мкм);

 

–

газ-носитель

: 

гелий для хроматогра-

фии Р

;

 

–

скорость подвижной фазы

: 1,1 мл/мин.

 

–

параметры парофазного пробоотбор-

ника

:

 

–

равновесная температура

: 80°С,

 

–

время достижения равновесия

: 

45 мин,

 

–

температура передающей линии

: 

110°С,

 

–

время приложения избыточного дав-

ления

: 2 мин,

 

–

время ввода пробы

: 12 с;

 

– температура: