Цитогенетика эмбрионального развития - часть 46

а)

б)

Рис.10.31. Фрагмент метафазной пластинки из клеток триплоидной бластоцисты. 

Метод QFH (а) и иммунофлуоресцентная детекция 5-метилцитозина с помощью мо-

ноклональных антител, FITC (б)

Рис.10.32. Тканеспецифичный и стадиоспецифичный паттерн метилирования мета-

фазной  хромосомы  1  (иммунофлуоресцентная  детекция  5-метилцитозина  с  помо-

щью моноклональных антител, FITC): М-сегментация хромосомы 1 из триплоидного 

бластомера эмбриона человека (а); диплоидных клеток цитотрофобласта хориона 

(б) легкого (в), печени (г) и лимфоцита пуповинной крови (д). Сроки развития: первые 

деления дробления (а), 5-6 недель (б, в, г) и 22 недели (д) беременности

Рис.10.34.  Схема  инкубации  ворсин  хо-

риона  и  фрагментов  эмбриональных 

тканей с импульсным добавлением БДУ. 

Зеленым  цветом  обозначена  инкубация 

материала  в  культуральной  среде  при 

температура 37 °С; желтым – инкуба-

ция биоптатов с БДУ; красным – инку-

бация с колхицином

Рис.10.35.  Распределение  флуоресцентного  сигнала  в  метафазных  хромосомах  из 

клетки цитотрофобласта (46,ХХ) после импульсного введения БДУ во второй поло-

вине S-периода: (а) иммунофлуоресцентная детекция БДУ (FITC); (б) окрашивание 

флуорохромом DAPI

а)

б)

а)

Рис.10.36.  Особенности  репликации 

хроматина в ранней S-фазе клеточного 

цикла.  Иммунофлуоресцентная  детек-

ция АТ-БДУ на метафазных хромосомах 

из клетки цитотрофобласта (а, слева) 

и белка PCNA (ядерный антиген проли-

фелирующих  клеток)  на  интерфазном 

ядре  из  клетки  лимфоцита  человека  

(б, [381])

б)

а)

б)

Рис.10.37.  Особенности  репликации  хрома-

тина во второй половине S-фазы клеточного 

цикла. Иммунофлуоресцентная детекция АТ-

БДУ  на  метафазных  хромосомах  из  клетки 

цитотрофобласта человека (а, слева) и белка 

PCNA  (ядерный  антиген  пролифелирующих 

клеток) на интерфазном ядре из клетки лим-

фоцита человека (б, [381])

Рис.10.38. Различия в распределении флуоресцентного сигнала в метафазных хромо-

сомах из клеток цитотрофобласта (а) и эмбриональных клеток (б) после импульсно-

го введения БДУ во второй половине S-периода. Иммунофлуоресцентная детекция 

БДУ (FITC)

а)

б)

353

Глава 9. 

Пренатальная диагностика хромосомных болезней

9.8. Принципы и методы

 диагностики моногенных болезней

В  настоящее  время  диагностика  практически  всех  моногенных 

болезней проводится с использованием молекулярных методов, назы-

ваемых  также  методами  ДНК-анализа  (отсюда  часто  упоминаемая  в 

современной научной литературе «ДНК-диагностика»). Принимая во 

внимание их высокую точность и большую чувствительность, необхо-

димо помнить, что эффективность пренатальной ДНК-диагностики в 

значительной мере предопределяется соблюдением следующих основ-

ных требований.

Точностью клинического диагноза.

1. 

Своевременным  обследованием  семьи  высокого  риска  и  боль-

2. 

ного молекулярными методами.

Правильностью оценки риска рождения больного ребенка.

3. 

Выбором оптимального срока ПД.

4. 

Возможностью получения материала плода.

5. 

Четкостью рекомендаций после ПД.

6. 

Наличием скринирующих программ в ДНК-диагностике.

7. 

Основу методов ДНК-диагностики, направленных на идентификацию 

мутаций или молекулярное маркирование мутантных хромосом, состав-

ляет полимеразная цепная реакция (ПЦР) синтеза ДНК. Метод позволя-

ет избирательно синтезировать (амплифицировать) in vitro относительно 

небольшие участки ДНК длиной от нескольких десятков до нескольких 

тысяч пар нуклеотидов, используя в качестве матрицы любые образцы 

ДНК,  содержащие  исследуемую  (амплифицируемую)  последователь-

ность. Метод ПЦР — один из основных в молекулярной диагностике на-

следственных болезней. Разработаны и широко используются на практике 

различные варианты данного метода, позволяющие быстро и эффективно 

идентифицировать мутации, изучать ДНК-полиморфизмы, применяемые 

для молекулярного маркирования мутантных хромосом.

В настоящее время существуют два основных подхода к ПД, равно 

как вообще к диагностике генных болезней.

Прямая диагностика, основанная на непосредственной идентифи-

кации мутаций в определенном гене.

Косвенная  (непрямая)  диагностика —  маркирование  мутантного 

гена (иногда называемая маркированием «больной» хромосомы, несу-

щей мутантный ген) с помощью молекулярных маркеров.

Цитогенетика эмбрионального развития человека

354

Подробно  принципы  и  методы  молекулярной  диагностики  изло-

жены в соответствующих главах наших монографий и методических 

рекомендаций [14, 44, 69, 133, 151].

В  настоящее  время  молекулярной  диагностике  в  России  доступно 

свыше 40 различных, в том числе и наиболее частых моногенных наследс-

твенных болезней. Список этих заболеваний, с указанием центров, где 

такая диагностика проводится, приведен в таблице 9.8. Отметим в заклю-

чение, что для практических врачей важно не только руковод ствоваться 

этой  информацией  при  направлении  женщин  групп  риска  на  ПД  этих 

заболеваний,  но  и  помнить  о  том,  что  эффективная  ПД  моногенных 

заболеваний  требует  обязательного  предварительного  обследования 

таких семей на информативность до беременности (для решения вопроса 

о том, на каком сроке беременности и каким способом будет проведена 

такая  диагностика).  Главное  при  этом  учесть  необходимость  своевре-

менного молекулярного обследования больного ребенка или, по крайней 

мере, сохранить пятно крови на фильтре или парафиновые блоки секци-

онного материала для исследования его ДНК.

9.9. Прерывание беременности

 и верификация диагноза

При выявлении хромосомной или генной патологии обязательным 

этапом  ПД  является  консультирование  женщины  с  предоставлением 

ей всей информации о прогнозе жизни ребенка в случае его рождения. 

Важно, что решение вопроса о сохранении или прерывании беремен-

ности женщина принимает самостоятельно. Конечно, ее решение во 

многом определяется объективностью консультирования по результа-

там диагностики.

Важным этапом ПД является верификация диагноза. В случае ве-

рификации  диагноза  хромосомной  патологии  плода  необходимо  не 

только подтвердить хромосомную аномалию, но и провести патомор-

фологическое изучение абортуса. Учитывая отсутствие общепринятой 

схемы комплексного исследования плодов с хромосомными аберраци-

ями,  эмбриологические  и  цитогенетические  особенности  хориона,  а 

также опыт, накопленный при исследовании сложных случаев, нами 

разработана собственная схема верификации пренатального диагноза 

(рис. 9.10). Схема предусматривает активное участие патоморфолога, 

врача-генетика, врача УЗД, цитогенетика и молекулярного биолога.

355

Глава 9. 

Пренатальная диагностика хромосомных болезней

№

п/п

Наследственные заболевания

Медицинские центры

1

Агаммаглобулинемия

МГНЦ

2

Адреногенитальный синдром 

ИАГ, ГНЦ, МГНЦ, ЦОЗМиР

3

Альбинизм тип ОСА1

МГНЦ

4

Альпорта синдром 

ГНОКДЦ, МНГЦ

5

Альфа-1-антитрипсина недостаточность 

ИЭМ

6

Амиотрофия спинальная Верднига–Гоффмана, 

Кугельберга–Веландера 

ИАГ, МГНЦ, ТИМГ

7

Амиотрофия невральная Шарко–Мари–Тус

МГНЦ, ТИМГ, УНЦ 

8

Амиотрофия спинальная Х-сцепленная 

МГНЦ

9

Анжельмана синдром 

МГНЦ, ТИМГ

10 Апера синдром 

МГНЦ

11 Атаксия Фридрейха 

МГНЦ

12 Ахондроплазия

МГНЦ

13 Беквита–Видемана синдром 

МГНЦ

14 Бета-талассемия 

ГНЦ

15 Виллебранда болезнь 

ГНЦ, ИАГ

16 Врожденная контрактурная арахнодактилия 

МГНЦ

17 Врожденная мышечная дистрофия, тип Фукуяма  МГНЦ
18 Гемофилия А 

ГНОКДЦ, ГНЦ, ИАГ, ТИМГ

19 Гемофилия В 

ГНОКДЦ, ГНЦ, ИАГ, ТИМГ

20 Гепатолентикулярная дегенерация 

(болезнь Вильсона–Коновалова) 

МГНЦ

21 Гиперхолестеринемия семейная 

ГНОКДЦ, ИЭМ

22 Гипофизарный нанизм (дефицит гормона роста) МГНЦ
23 Гликогенозы

МГНЦ

24 Глухота нейросенсорная несиндромальная 

МГНЦ

25 Грейга синдром 

МГНЦ

26 Дефицит ацил-КоА дегидрогеназы 

МГНЦ

27 Длинного QT синдром 

МГНЦ, ТИМГ, УНЦ

28 Жильбера синдром 

МГНЦ

29 Зонулярная катаракта 

МГНЦ

30 Коффина–Лоури синдром 

МГНЦ

31 Криглера–Найара синдром 

МГНЦ

32 Лимфопролиферативный синдром, Х-сцеплен

-

ный (болезнь Дункана, синдром Пуртильо) 

МГНЦ

33 Лимфидема Минроя 

МГНЦ

34 Луи–Барр синдром (телеангиоэктазия) 

МГНЦ

35 Леш–Нихана синдром 

ИАГ

36 Мартина–Белл (ломкой Х-хромосомы) синдром  ИАГ, ТИМГ
37 Марфана синдром 

МГНЦ

Таблица  9.8.  Моногенные  болезни,  диагностируемые  молекулярными  методами  в 

России (с указанием медицинских диагностических центров)

Цитогенетика эмбрионального развития человека

356

№

п/п

Наследственные заболевания

Медицинские центры

38 Миллера–Дикера синдром

МГНЦ

39 Милроя синдром 

МГНЦ

40 Миодистрофия Дюшенна–Беккера 

ГНОКДЦ,  ИАГ,  МГНЦ, 

ТИМГ, УНЦ

41 Миодистрофия Эмери-Дрейфуса 

МГНЦ

42 Миотоническая дистрофия 

ИАГ, МГНЦ

43 Муковисцидоз

ГНОКДЦ, ИАГ, ИЭМ, 

МГНЦ, ТИМГ, УНЦ

44 Мукополисахаридозы 

МГНЦ

45 Несиндромальная нейросенсорная тугоухость 

МГНЦ, УНЦ, ТИМГ

46 Ниймегена синдром 

МГНЦ

47 Норри болезнь 

МГНЦ

48 Окулофарингеальная миодистрофия 

МГНЦ

49 Периодическая болезнь 

МГНЦ

50 Псевдоахондропластическая дисплазия 

МГНЦ

51 Прадера–Вилли синдром 

ИАГ, МГНЦ, ТИМГ

52. Рецессивный поликистоз почек 

МГНЦ

53 Ретинобластома

МГНЦ

54 Смита–Лемли–Опитца синдром 

МГНЦ

55 Спастическая параплегия Штрюмпеля 

МГНЦ

56 Спинобульбарная мышечная атрофия 

(болезнь Кеннеди)

ИАГ, МГНЦ, НИИН, ТИМГ

57 Тестикулярной феминизации синдром 

ИАГ, ТИМГ, УНЦ, МГНЦ

58 Унферрихта–Лундберга болезнь 

МГНЦ

59 Фенилкетонурия 

ГНОКДЦ, ГНЦ, ИАГ, 

МГНЦ, ТИМГ 

60 Хантера болезнь 

ИАГ

61 Хольт–Орана синдром 

МГНЦ

62 Хорея Гентингтона 

ИАГ, МГНЦ, НИИН

63 Эктодермальная ангидротическая дисплазия 

МГНЦ

64 Элерса–Данло (классический тип) синдром

МГНЦ

Таблица 9.8. (продолжение)

Примечание:

ГНОКДЦ — Государственный Новосибирский областной клинический диагнос-

тический центр, г. Новосибирск.

ГНЦ — Гематологический научный центр МЗ РФ, Москва.

ИАГ — ГУ НИИ акушерства и гинекологии им. Д. О. Отта РАМН, г. Санкт-Пе-

тербург.

ИЭМ — НИИ экспериментальной медицины РАМН, г. Санкт-Петербург.

МГНЦ — ГУ Медико-генетический научный центр РАМН, г. Москва.

НИИН — Научно-исследовательский институт неврологии РАМН, г. Москва.

ТИМГ — НИИ медицинской генетики ТНЦ СО РАМН, г. Томск.

УНЦ — Уфимский научный центр, г. Уфа.

ЦОЗМиР — Центр охраны здоровья матери и ребенка, г. Москва.

357

Глава 9. 

Пренатальная диагностика хромосомных болезней

 

 

 

Прижизненное

 

плода 

 

 

Пренатальное 

кариотипирование 

Этапы         

1

 и 

2

 

3 

 

Патоморфологическое 

исследование 

4 

 

Гистологическое 

исследование 

4

 

 

Молекулярное и молекулярно-

цитогенетическое исследование 

аутопсийного материала: 

Определение хромосомного статуса плода, 

анализ механизмов возникновения геномной 

(хромосомной) мутации  

 

 

ультразвуковое исследование

Рис. 9.10. Принципиальная схема верификации хромосомных болезней у плода