|
|
|
содержание .. 18 19 20 21 ..
159 Гель-элеКТРоФоРеЗ в котором используется разделение компонентов сложной смеси на осно- вании различий молекул в размерах и форме. Матрицами для Г.-ф. служат обычно гели на основе декстрана (се- фадексы) или агарозы (сефарозы), ча- стицы которых характеризуются опре- деленным средним диаметром и про- ницаемы благодаря внутренним кана- лам. Разделение веществ проводят в хроматографических колонках, запол- ненных сферическими частицами на- бухшего геля. Смесь белков наносят на колонку, а затем элюируют буферным раствором. Молекулы, не способные проникать в гранулы геля, будут пере- мещаться с высокой скоростью, а мо- лекулы меньших размеров будут в той или иной степени удерживаться грану- лами геля. На выходе колонки элюат со- бирают в виде отдельных фракций. Ме- тод Г.-ф. предложен в 1959 г. Д. Пора- том и П. Флодиным, которые показали возможность фракционирования водо- растворимых макромолекул (на при- мере белков) по молекулярной массе на сшитым декстрановом геле. Син.: Гель- проникающая хроматография. Гель - электрофорез (gel eletrophore- sis ) [лат. gel(are) — застывать; греч. elektron — смола, янтарь и phoresis — несение, перенесение] — разделение биомолекул в агарозном или полиакри- ламидном геле с помощью электриче- ского тока в соответствии с их элек- трическими зарядами. Существует множество вариантов Г-э. (см., напр., Гель-электрофорез в пульсирующем поле;
Температурный градиентный гель-электрофорез, ТГГЭ). Гель - электрофорез в градиенте пульсирующего поля (pulsed field gradient gel electrophoresis , PFGGE) [лат. ge(lare) — застывать, греч. elek- tron — смола, янтарь и phoresis — не- сение, перенесение; лат. gradiens (gra- dientis) — шагающий, идущий; лат. pulsus — удар, толчок] — вариант ме- тода электрофоретического разделения фрагментов ДНК в агарозном геле, ха- рактеризуется чередующимися элек- трическими импульсами полей, рас- положенных под тупым углом друг к другу и продолжительностью импуль- сов от 1 до 90 сек; используется для вы- сокоразрешающего разделения макро- молекул, в частности фрагментов ДНК (или целых хромосом, напр. дрожжей) размером от 100 до 2000 и более тыс. п.н. Гель - электрофорез в денатурирую- щем градиенте (denaturing gradi- ent gel electrophoresis) —
см. Де- натурирующий градиентный гель- электрофорез, ДГГЭ. Гель - электрофорез в пульсирующем поле (pulsed field gel eletrophoresis ,
PFGE) [лат. gel(are) — застывать, греч. elektron — смола, янтарь и phoresis — несение, перенесение; лат. pulsus — удар, толчок] — вариант метода элек- торофоретического разделения круп- ных (до 10 млн. п.н.) фрагментов ДНК, при котором с помощью специального оборудования в электрофоретической камере чередуются импульсы электри- ческого поля, имеющие разное направ- ление. Существуют различные вари- анты метода, гл. обр. связанные с гео- метрическим расположением направ- лений полей (ортогональный, гексого- нальный, инверсионный). Эффектив- ность разделения фрагментов ДНК за- висит не только от их размеров, но и от условий проведения электрофореза (напряжение, температура буфера, кон- центрация агарозы, время одного им- пульса). В качестве маркеров для опре- деления величины больших молекул ДНК обычно используют целые хромо- сомы дрожжей с известной молекуляр- ной массой. Традиционно применяется для картирования генов и в молекуляр- ной эпидемиологии. Метод предложен Д. Шварцем и Ч. Кантором в 1984 г. Гель - электрофорез в температурном градиенте (temperature gel gradient electrophoresis) — см. Температур- |