- нанесение исследуемого материала или люминесцирующей сыворотки при постановке реакции
не на препарат, а на другую сторону предметного стекла;
- неправильная установка освещения в люминесцентном микроскопе;
- низкое качество антигена.
РЕАКЦИЯ СВЯЗЫВАНИЯ КОМПЛЕМЕНТА (РЕАКЦИЯ ВАССЕРМАНА)
Принцип:
Реагины, находящиеся в сыворотки крови больных сифилисом, обладают свойством вступать в
соединение с кардиолипиновым антигеном. Специфические антитрепонемные антитела вступают в
соединение со специфическими антигенами (ультраозвученный трепонемный антиген).
Образовавшиеся комплексы антиген - антитело сорбируют вводимый в реакцию комплемент.
Индикация образовавшихся комплексов достигается введением гемолитической системы
(гемолитическая сыворотка + эритроциты барана).
Оборудование:
- термостат с температурой 37 град.;
- холодильник с температурой 4 град.;
- инактиватор (водяная или суховоздушная баня) с температурой 56 град.;
- центрифуга;
- пробирки размером 14х60 мм, 15х100 мм, 15х150 мм;
- пипетки градуированные 1,2 мл с делениями на 0,01 мл;
- пипетки градуированные 5,19 мл с делениями на 0,1 мл;
- цилиндры мерные емкостью 100,250,500,1000 мл с делениями на 5 мл;
- стаканы химические, емкостью 100,250,500 мл;
- приборы дозировочные для серологических исследований (Флоринского) - ФЛ-3 и ФЛ-4.
Ингредиенты
1. 0,9% изотонический раствор натрия хлорида.
2. Испытуемая сыворотка крови.
Взятие крови производят натощак или не ранее 6 часов после приема пищи. Нельзя брать кровь у
больных с повышенной температурой, после употребления спиртных напитков ранее 24 часов,
перенесших недавно инфекционное заболевание, у женщин во время менструации, беременных в
последние 10 дней беременности, рожениц в первые 10 дней после родов, новорожденных в первые 10
дней жизни.
Кровь из локтевой вены в количестве 7-10 мл берут в сухую чистую пробирку. Пункцию
производят стерильной иглой при соблюдении правил асептики. У грудных детей кровь берут из
надреза пятки узким скальпелем.
В лабораторию кровь должна быть доставлена не позднее 48 часов с момента взятия при условии
ее хранения в холодильнике при 4 град.
Сыворотка крови может быть использована для постановки реакции в день взятия крови.
Доставленную в лабораторию кровь в день ее взятия помещают в термостат при 37 град. на 15-30
минут. Образовавшийся сгусток отделяют стеклянной палочкой от стенок пробирки и центрифугируют
15 минут при 1000 об/мин. Над сгустком образуется прозрачная сыворотка крови, которую при помощи
пипетки с резиновым баллоном без примеси эритроцитов переносят в другую пробирку. При наличии в
сыворотке крови примеси эритроцитов ее центрифугируют и отделяют от них. Кровь, доставленную в
лабораторию накануне постановки реакции, отделяют стеклянной палочкой от стенок пробирки и
помещают в холодильник при 4 град. Перед постановкой реакции образовавшуюся над сгустком крови
сыворотку переносят в другую пробирку.
Снятую со сгустка сыворотку крови инактивируют в суховоздушном инактиваторе или водяной
бане в течение 30 минут при 56 град. для уничтожения естественного комплемента и стабилизации
глобулиновых фракций испытуемой сыворотки крови.
Инактивированные сыворотки крови могут храниться в холодильнике в течение 5-6 дней.
Сыворотки крови, ранее инактивированные, в день постановки реакции должны быть повторно
прогреты в течение 15 минут при 56 град. Для более длительного хранения к сыворотке крови после
инактивации добавляют сухую борную кислоту (из расчета 2%), что позволяет ею пользоваться в
течение 3-4 недель, или замораживают в морозильной камере холодильника на тот же срок, не
допуская повторного замораживания и оттаивания.
В случаях, если нельзя немедленно доставить кровь для исследования в лабораторию, можно
пользоваться высушенной сывороткой крови. Для этого 2 мл сыворотки крови без примеси эритроцитов
наносят на сложенную вдвое вощаную бумагу, целлофан (8 х 10 см) в виде четырех кружочков по 0,5
17