Том 3. Справочник по кожным болезням - часть 389

- нарушение сроков и условий хранения плазмы и сыворотки крови, антигена и

его эмульсии, растворов;

- замена трехзамещенного цитрата натрия двухзамещенным;
-   использование   при   постановке   реакций   загрязненных   пробирок,   пипеток,

пластинок, растворов.

Вышеуказанные ошибки могут приводить к появлению как ложноотрицательных,

так и ложноположительных результатов реакции.

ИММУНОФЕРМЕНТНЫЙ АНАЛИЗ ДЛЯ СЕРО- И ЛИКВОРОДИАГНОСТИКИ

СИФИЛИСА

Принцип   иммуноферментного   анализа   заключается   в   соединении   комплекса

"антиген   -  антитело"   с  конъюгатом,   содержащим   ферментную   метку,   выявляемую   с
помощью субстратной смеси. В настоящее время в нашей стране ИФА тест - системы
разрабатываются по трем схемам проведения реакции.

В основе первой схемы лежит следующее:
На   твердофазном   носителе   (чаще   лунки   полистиролового   планшета)

зафиксирован   антиген   возбудителя   сифилиса,   который   инкубируется   с   испытуемой
сывороткой, плазмой крови или ликвором. При наличии в этом материале от пациентов
противотрепонемных   антител   происходит   их   связывание   в   комплекс   "антиген   -
антитело"   (I   фаза   реакции).   После   удаления   не   связавшихся   иммуноглобулинов
следует   инкубация   с   мечеными   ферментом   антителами   к   антивидовым
иммуноглобулинам  (конъюгат), в ходе которой на поверхности  носителя  происходит
присоединение   к   имеющимся   комплексам   "антиген   -   антитело"   антител,   меченных
ферментом (II фаза). После удаления не связавшегося конъюгата в ходе инкубации с
раствором субстрата (в случае использования пероксидазного конъюгата, это перекись
водорода   в   сочетании   с   орто   -   фенилендиамином   (ОФД),   5-аминосалициловой
кислотой   (5-АСК)   или   тетраметилбензидином   (ТМБ))   происходит   взаимодействие
фермента   с   субстратом,   в   результате   чего   развивается   цветная   реакция,
интенсивность   которой   зависит   от   количества   связанных   сывороточных   антител   (III
фаза). Результат реакции оценивается спектрофотометрически с выводом цифровых
данных,   что   исключает   субъективность   оценки,   или   визуально,   что   может   быть
полезным при отсутствии в лабораториях соответствующего оборудования. По такому
принципу   в   настоящее   время   построено   большинство   ИФА   тест   -   систем   для
диагностики сифилиса.

Вторая схема - ИФА с фиксированными антителами или "ловушка для антител".

Здесь на твердофазном носителе фиксируются аффиноочищенные антитела против
определенного   класса   иммуноглобулинов   (М,   G   или   А),   которые   связывают
находящиеся   в   испытуемых   сыворотках   крови   иммуноглобулины   соответствующего
класса   (I   фаза   реакции).   Образование   комплекса   "антитело   -   специфический
иммуноглобулин" выявляют с помощью конъюгата, состоящего из антигенов бледной
трепонемы, меченных ферментом (II фаза). При инкубации с субстратом (III фаза) в
случае наличия сифилитических антител в испытуемой сыворотке или плазме крови
наступает окрашивание раствора. В нашей стране разрабатываются подобные тест -
системы, в основном для выявления противотрепонемных IgM.

Третья   схема   ИФА  используется   для   выявления   суммарных   антител,

специфических   для   определенного   антигена,   независимо   от   их   класса.   Ее   суть
заключается   в   том,   что   специфические   сывороточные   антитела   одновременно
взаимодействуют с антигеном, зафиксированным на твердофазном носителе, и с тем
же антигеном, меченным ферментом, при совместной инкубации испытуемого образца
и   конъюгата   (I   фаза   реакции).   Наличие   образовавшегося   комплекса   определяют   с
помощью субстрата (II фаза).

В   зависимости   от   используемых   антигенов  все   ИФА   тест   -   системы   для

выявления антител подразделяются на:

1)   лизатные   (лизированный   или   обработанный   ультразвуком   возбудитель

инфекции, полученный в культуре);

2)   рекомбинантные   -   используются   полученные   генно   -   инженерным   способом

белки - аналоги определенных белковых антигенов возбудителя;

3) пептидные - использующие синтетические фрагменты белков.
Среди отечественных ИФА тест - систем для выявления сифилитических антител,

уже   рекомендованных   Министерством   здравоохранения   РФ   к   применению   в
медицинской практике, имеются лизатные, рекомбинантные и пептидные.

Иммуноферментные   тест   -  системы   для   диагностики   сифилиса   выпускаются   в

виде   многокомпонентных   наборов,   содержащих   все   реагенты,   необходимые   для
проведения реакции, и инструкцию по их применению.

При   применении   тест   -   системы   с   визуальным   учетом   результатов   также

рекомендуется   определение   титров   противотрепонемных   антител   в   резко
положительных сывороточных образцах (4+).

Отрицательной   чертой   количественного   метода   исследования   с   целью

определения   титра   антител   в   сыворотке   крови   и   ликворе   является   его
неэкономичность.  В связи с этим  целесообразно использовать  другой критерий для
характеристики   концентрации   антител   -   коэффициент   позитивности   (КП),   равный
отношению   оптической   плотности,   полученной   для   каждого   образца,   к   критической
оптической   плотности:   КП   =   ОП/ОПкрит.   КП   у   положительных   образцов   выше   1,1,
сомнительных   -   находится   в   интервале   от   0,9   до   1,1   и   отрицательных   -   ниже   0,9.
Определение   КП   целесообразно   проводить   при   выяснении   динамики   выработки
антител у пациента в процессе наблюдения за ним после лечения сифилиса, при этом
обязательно нужно использовать ту же тест - систему, что и до лечения больного. Эта
методика   не  требует  дополнительных   финансовых  затрат   и дает  представление   об
эффективности лечения.

При   использовании   тест   -   системы   иммуноферментной   для   качественного

выявления антител к возбудителю сифилиса в сыворотке крови человека ("АТ-Треп.-
ИФТС", г. Ставрополь) возможен только  визуальный учет результатов реакции.  При
резко положительном (4+) результате субстратная смесь имеет темно - коричневый
цвет,   при   положительном   (3+)   -   коричневый   цвет,   при   слабоположительном   (2+)   -
светло - коричневый, при отрицательном (+,-) - светло - бежевый цвет или бесцветна.

Образцы,   для   которых   получен   сомнительный   результат   (соответствующая   им

ОП  находится   в   пределах   "серой   зоны"   и   КП   в   интервале   от   0,9   до   1,1)   подлежат
повторному анализу. При повторном сомнительном результате рекомендуется анализ
с новой порцией крови, взятой через 3-7 дней.

МЕТОДИКА ПОСТАНОВКИ ИФА ДЛЯ ЛИКВОРОДИАГНОСТИКИ СИФИЛИСА

Для ликвородиагностики сифилиса могут быть использованы отечественные тест

-   системы   ИФА,   предназначенные   для   выявления   иммуноглобулинов   класса   О   и
работающие по первой схеме проведения реакции. 

Количественными   показателями   концентрации   противотрепонемных   антител

(степени   позитивности)   в   ликворе   являются   титр   противотрепонемных   антител   или
коэффициент   позитивности.   Определение   титров   или   коэффициентов   позитивности
целесообразно проводить как до лечения, так и после него для выяснения динамики
выработки антител с использованием одной и той же тест - системы.

По   своей   диагностической   эффективности   при   ликвородиагностике   сифилиса

ИФА близок к РИФ-ц, самой чувствительной и специфичной реакции при диагностике
нейросифилиса.   Положительной   чертой   ИФА   является   его   доступность   благодаря
наличию производственных высококачественных тест - систем.

Источники возникновения ошибок при использовании ИФА-тест - систем делятся

на вне- и внутрилабораторные. К первым относятся: нарушения техники взятия крови,
условий транспортировки и хранения тест - систем и проб. Ко вторым - некачественная
работа лаборантов, любые отклонения от инструкции по применению тест - системы,
неисправность инструментов и приборов, неаккуратность ведения документации.

Чтобы   избежать   ошибок   при   проведении   ИФА,   необходимо   придерживаться

следующих правил:

-   не   использовать   для   исследования   хилезные,   резко   гемолизированные   и

проросшие   сыворотки   крови,   добиваясь   стандартных   условий   взятия   и   хранения
образцов;

- не практиковать 2-кратного и более замораживания - размораживания образцов

сыворотки крови;

- не пользоваться просроченными наборами тест - систем;
-   соблюдать   стандартные   требования   к   чистоте   лабораторной   посуды;

использовать  отдельные  посуду и наконечники  для автоматических  пипеток  (при их
многократном использовании) для разведения конъюгатов и субстрата пероксидазной
реакции (ОФД);

- проводить периодический контроль качества работы лаборантов;
- следить за строгим соблюдением инструкций по применению тест - систем;
- пользоваться автоматическими пипетками с погрешностью измерения объемов

не более 5%, ежемесячно проводя метрологический контроль их работы;

-   соблюдать   правила   эксплуатации   оборудования   (спектрофотометры,

автоматические промыватели планшет, рН-метры);

-   спектрофотометры   для   ИФА   должны   не   реже   одного   раза   в   год   проходить

метрологический контроль, периодическому контролю подлежат также автоматические
пипетки, термостаты, рН-метры;

- в ходе каждой постановки ИФА заполнять протокол исследования.
Главным   достоинством   ИФА   является   наличие   отечественного   выпуска   тест   -

систем,   их   высокое   качество,   возможность   автоматизации   постановки   и   учета   его
результатов, что крайне важно при исследовании большого числа сывороток крови, в
частности   от   доноров.   При   использовании   тест   -   систем   ИФА   для   лабораторий   с
небольшим   объемом   работы   следует   закупать   тест   -   системы   с   разборными
планшетами (стрипы).

ИФА диагностика  сифилиса  - эффективный  метод.  Необходимым  является  его

более широкое использование в качестве скринингового и диагностического теста на
сифилис,   но   обязательным   при   этом   должно   быть   высокое   качество   выпускаемых
предприятием тест - систем. Недопустима продажа и использование в медицинской
практике   тест   -   систем,   не   имеющих   утвержденной   фармакопейной   статьи   и
разрешения   Минздрава   РФ   на   их   применение   в   практике   здравоохранения.   Все
утвержденные   и   рекомендованные   в   практику   ИФА   тест   -   системы   прошли
государственные испытания в ГИСК им. Л.А. Тарасевича и в ЦНИКВИ. В процессе их
промышленного выпуска должен осуществляться систематический контроль качества.
К применению в медицинской практике разрешаются тест - системы, чувствительность
и специфичность которых не ниже 95%.

ПРОТОКОЛ ИССЛЕДОВАНИЯ ПРИ ИСПОЛЬЗОВАНИИ ИФА

Дата анализа: ________________________________________________
Исполнитель: _________________________________________________
Тест - система: ______________________________________________
Серия: ______ Контрольный N __________ Срок годности: ________

РЕЗУЛЬТАТЫ АНАЛИЗА:

РЕАКЦИЯ ПАССИВНОЙ ГЕМАГГЛЮТИНАЦИИ ДЛЯ СЕРОДИАГНОСТИКИ

СИФИЛИСА

Принцип   метода   заключается   в   том,   что   при   соединении   сыворотки   крови,

содержащей   специфические   антитела,   с   эритроцитами,   сенсибилизированными
соответствующим антигеном, наблюдается их характерная агглютинация. Постановка
реакции может осуществляться в пробирках или планшетах.

Сенсибилизация эритроцитов при изготовлении тест - системы для диагностики

сифилиса   может   производиться   патогенными   или   культуральными   бледными
трепонемами.

В   ЦНИКВИ   на   большом   материале   с   отечественным   диагностикумом   изучена

результативность   РПГА   по   сравнению   с   другими   тестами   на   сифилис   при
исследовании сывороток крови больных с различными формами сифилиса до лечения.
В РПГА получено 99,4% положительных результатов, в РИФ-абс - 99,1%, РИФ-200 -
99,1%,   РИТ  -  87,7%,   МР  -  95,8%,   в   РСК   с  трепонемным   антигеном   -  95,8%,   РСК   с
кардиолипиновым антигеном - 90,2%. В зарубежной литературе имеются указания на
более позднюю выработку гемагглютининов у больных в ранний период заболевания,
хотя в ЦНИКВИ выявлен высокий процент положительных результатов при сифилисе
первичном, серопозитивном - 97,7%.

Общее   мнение   исследователей   заключается   в   том,   что   РПГА   является

ценным   диагностическим   тестом   при   всех   формах   сифилиса,   но   особенно
чувствительна она при поздних формах заболевания.

Существует  микро- и макромодификации  постановки  РПГА, чаще используется

первая из-за экономичности, быстроты постановки и учета результатов. Кроме того,
есть   качественный   и   количественный   варианты   постановки.   Последний   позволяет
определять   титры   антител   в   крови.   Но   при   этом,   необходимо   учесть,   что   при
повторных исследованиях крови в РПГА необходимо использовать одну и ту же тест -
систему"

Результаты РПГА учитывают через 1,5-2 ч при микрометоде или на следующий

день   при   макрометоде.   Неподвижно   стоящие   пластины   даже   при   высыхании   их
содержимого сохраняют полученную картину:

"4+" - положительная РПГА. Эритроциты равномерно выстилают всю поверхность

лунки   (в   виде   зонтика).   "3+"   -   положительная   РПГА.   Эритроциты   выстилают   всю
поверхность лунки, но часть их соскальзывает к центру.

"2+"  -  слабоположительная   РПГА.  Эритроциты  образуют  пленку на небольшом

участке нижней части лунки.

"1+"   -   отрицательный   результат   РПГА.   На   дне   лунки   эритроциты   образуют

рыхлый осадок.

"-" - отрицательная РПГА. Эритроциты ровным плотным "колечком" или "пуговкой"

лежат на самом дне лунки (без окружающего зернистого осаждения).

Испытание   сыворотки   крови   людей   в   первых   двух   разведениях   позволяет   при

качественной   постановке   реакции   быстро   выявлять   лиц,   сыворотки   крови   которых
содержат   специфические   антитела   к   антигенам   бледной   трепонемы.   Испытание
сыворотки  крови  количественным  методом  с помощью двукратных  разведений  дает
дополнительную информацию о концентрации специфических антител в крови.

При проведении серологических исследований на сифилис, в частности ИФА и

РПГА,   могут   иметь   место   как   ложноположительные,   так   и   ложноотрицательные
результаты реакций.

Ложноположительные   результаты  могут   быть   получены   при   исследовании

сывороток   крови   пациентов   с   невенерическими   трепонематозами,   за   счет
ревматоидного   фактора   и   перекрестно   реагирующих   с   трепонемным   антигеном
антител, образующихся при различных системных или индуцированных лекарствами и
наркотиками   нарушениях   обмена,   из-за   аномального   уровня   иммуноглобулинов;   у

новорожденных   детей   -   за   счет   образования   в   организме   плода   или   ребенка   IgM-
антител к IgG матери, что осложняет трактовку результатов и диагностику врожденного
сифилиса.   Ложноотрицательные   результаты   реакции   могут   быть   обусловлены
конкуренцией между IgMи IgG-антителами.

К наиболее типичным техническим ошибкам при постановке РПГА, приводящим к

получению   недостоверных   результатов,   следует   отнести   неточное   разведение
ингредиентов,   нарушение   температурного   режима,   времени   инкубации   реагентов,
сроков   нанесения   их   на   планшет,   несоответствие   рН   растворов   требуемым,
загрязнение лабораторной посуды.

Образцы,   давшие   сомнительный   результат   в   РПГА   из-за   содержания

неспецифических   агглютининов,   можно   подвергнуть   обработке   с   целью   адсорбции
этих  агглютининов.  Для   этого  20 мкл сыворотки  при  постановке   микромодификации
тщательно   смешивают   с   0,5   мл   контрольных   эритроцитов,   инкубируют   30   минут   и
центрифугируют   5   минут.   Надосадочную   жидкость   подвергают   повторному
исследованию.

Для   постановки   РПГА,   как   и   других   серологических   тестов,   должны   быть

выделены   врачи,   лаборанты,   медицинские   сестры,   прошедшие   специальную
подготовку   по   соответствующему   вопросу.   Подготовка   врачей   -   серологов   и
повышение   их   квалификации   должны   осуществляться   в   кожно   -   венерологических
учреждениях,   а   также   на   кафедрах   микробиологии   и   лабораторной   клинической
диагностики в структурах последипломного образования врачей.

При постановках ИФА и РПГА должны соблюдаться общепринятые мероприятия

по   технике   безопасности.   Антиген   для   этих   реакций   непатогенен   (консервация).
Контрольные   сыворотки,   входящие   в   состав   наборов,   инактивированы   и   также
содержат   консервант.   Его   содержат   и   другие   компоненты   наборов,   в   связи   с   чем
необходимо избегать их контакта с кожей и слизистыми оболочками. 

Испытуемые сыворотки крови при постановке всех серологических тестов

следует   рассматривать   как   потенциально   опасные   для   здоровья  человека
(гепатит,   ВИЧ-инфекция   и   др.).   При   работе   с   сыворотками   крови   необходимо
использовать резиновые перчатки, не пипетировать сыворотку ртом, все промывные
растворы   обрабатывать   5-6%   раствором   хлорамина   или   6%   раствором   перекиси
водорода   в   течение   3-х   часов   при   температуре   18-25град.С;   все   твердые   отходы
сбрасывать   в   спецконтейнер   с   пломбируемой   крышкой   и   затем   подвергать
автоклавированию, инструменты и оборудование до и после работы протирать 70%
этиловым   спиртом.   Анализ   исследуемых   образцов   следует   проводить   на   рабочем
месте, оборудованном в соответствии с требованиями, предусмотренными для работы
с инфекционным материалом.

Подробности постановки ИФА и РПГА описаны в соответствующих Пособиях (М.,

1998,1999).

РЕАКЦИЯ ИММУНОФЛЮОРЕСЦЕНЦИИ ДЛЯ СПЕЦИФИЧЕСКОЙ

СЕРО- И ЛИКВОРОДИАГНОСТИКИ СИФИЛИСА

Принцип метода заключается в соединении специфического комплекса антиген -

антитело   с   иммунной   антивидовой   сывороткой,   меченной   флюорохромом,   и
выявление его помощью люминесцентного микроскопа.

Материально - техническое обеспечение метода: 

люминисцентный микроскоп с ртутно - 

кварцевой лампой ДРШ-250, термостат, инактиватор.

Постановка  РИФ-абс  возможна   не  только   с   сывороткой   крови,   но   и  с   кровью,

взятой из пальца. Эту модификацию РИФ-абс можно использовать при обследовании

на сифилис детей, при трудности получения крови из вены у взрослых, при массовом
обследовании различных контингентов на сифилис.

Методика постановки РИФ-абс и РИФ-200 близки. 
Учет результатов РИФ-200 производят так же, как РИФ-абс.
В том случае, когда клиницистов интересует титр флюоресцирующих антител в

сыворотке крови больного, РИФ-абс и РИФ-200 следует ставить с последовательным
разведением   испытуемых   сывороток   крови   и   титром   флюоресцирующих   антител
считать   то   наибольшее   разведение   сыворотки   крови,   которое   еще   дает
положительный   результат   реакции.   Обозначать   титр   принято   числом,
характеризующим   степень   разведения   испытуемой   сыворотки   крови,   например,
5,10,20,40 и т. д. (РИФ-абс) или 200,400, 800 и т. д. (РИФ-200).

В   связи   с   возможностью   получения   отрицательных   результатов   при   наличии

флюоресцирующих антител  не следует исследовать кровь и сыворотку крови в
РИФ-абс и РИФ-200 во время лечения больных пенициллином.

Ранняя   диагностика  поражений   нервной   системы  при   сифилисе   является

актуальным вопросом в деле борьбы с этим заболеванием. В связи с тем, что РИФ-ц
обладает   большей   чувствительностью,   чем   все   другие   используемые   для
ликвородиагностики   сифилиса   тесты,  эта   модификация   РИФ   может   быть
рекомендована   для   диагностики   сифилитических   поражений   центральной   нервной
системы при всех формах сифилиса.

Для постановки РИФ-ц используют тот же антиген, люминесцирующую сыворотку,

что   и   для   постановки   РИФ-абс   и   РИФ-200   с   сывороткой   крови.   Аналогичны   также
определение флюоресцирующих антител в ликворе и сыворотке крови и учет реакции.

Спинномозговая жидкость вводится в реакцию неинактивированной и цельной. До

постановки  реакции  ее  можно  сохранять  в  морозильном   отделении  холодильника   в
пробирках   под   резиновыми   пробками   до   2   недель.   Оттаиванние   производят   при
комнатной температуре.

Источники ошибок:
-   несоблюдение   условий   приготовления,   хранения   реагентов   и   постановки

реакции;

-   низкое   качество   люминесцирующей   сыворотки   и   неточное   определение   ее

титра;

-   нанесение   исследуемого   материала   или   люминесцирующей   сыворотки   при

постановке реакции не на препарат, а на другую сторону предметного стекла;

- неправильная установка освещения в люминесцентном микроскопе;
- низкое качество антигена.

РЕАКЦИЯ СВЯЗЫВАНИЯ КОМПЛЕМЕНТА (РЕАКЦИЯ ВАССЕРМАНА)

Принцип:
Реагины,   находящиеся   в   сыворотки   крови   больных   сифилисом,   обладают

свойством   вступать   в   соединение   с   кардиолипиновым   антигеном.   Специфические
антитрепонемные   антитела   вступают   в   соединение   со   специфическими   антигенами
(ультраозвученный   трепонемный   антиген).   Образовавшиеся   комплексы   антиген   -
антитело   сорбируют   вводимый   в   реакцию   комплемент.   Индикация   образовавшихся
комплексов   достигается   введением   гемолитической   системы   (гемолитическая
сыворотка + эритроциты барана).

Взятие крови  производят натощак или не ранее 6 часов после приема пищи.

Нельзя   брать   кровь   у   больных   с   повышенной   температурой,   после   употребления
спиртных напитков ранее 24 часов, перенесших недавно инфекционное заболевание, у
женщин   во   время   менструации,   беременных   в   последние   10   дней   беременности,
рожениц в первые 10 дней после родов, новорожденных в первые 10 дней жизни.

Кровь из локтевой вены в количестве 7-10 мл берут в сухую чистую пробирку.

Пункцию производят стерильной иглой при соблюдении правил асептики. У грудных
детей кровь берут из надреза пятки узким скальпелем.

В лабораторию кровь должна быть доставлена не позднее 48 часов с момента

взятия при условии ее хранения в холодильнике при 4 град.

Сыворотка крови может быть использована для постановки реакции в день взятия

крови.

Доставленную в лабораторию кровь в день ее взятия помещают в термостат при

37 град. на 15-30 минут. Образовавшийся сгусток отделяют стеклянной палочкой от
стенок пробирки и центрифугируют 15 минут при 1000 об/мин. Над сгустком образуется
прозрачная сыворотка крови, которую при помощи пипетки с резиновым баллоном без
примеси эритроцитов переносят в другую пробирку. 

В   случаях,  если   нельзя   немедленно   доставить   кровь  для   исследования   в

лабораторию,   можно   пользоваться   высушенной   сывороткой   крови.   Для   этого   2   мл
сыворотки   крови   без   примеси   эритроцитов   наносят   на   сложенную   вдвое   вощаную
бумагу,   целлофан   (8   х   10   см)   в   виде   четырех   кружочков   по   0,5   мл   в   каждом.   К
сыворотке крови добавляют по 3 капли свежеприготовленного 40% раствора пищевого
сахара на каждые 0,5 мл сыворотки. Предварительно на вощаной бумаге, целлофане
надписывают   фамилию,   имя,   отчество,   дату   взятия   крови   и   объем   нанесенной
сыворотки крови, которую высушивают при комнатной температуре. Затем вощаную
бумагу, целлофан тщательно свертывают в виде аптечного пакетика и в конверте по
почте отправляют в ближайшую серологическую лабораторию. Такие сыворотки крови
должны   быть   исследованы   не   позднее   5   дней   с   момента   взятия   крови   в   южных
районах страны, а также в летнее время года, и не позднее 10 дней на остальных
территориях страны.

В лаборатории  полученную высушенную  сыворотку  крови  ссыпают в пробирку.

Для   ее   растворения   добавляют   изотонический   раствор   натрия   хлорида,
восстанавливая   первоначальный   объем   сыворотки   крови.   Сыворотка   крови
растворяется  в течение  одного часа стояния при комнатной температуре.  Затем  ее
инактивируют   при   56   град.   в   течение   30   минут,   после   чего   она   может   быть
использована для постановки реакции.

Желтушные, хилезные,  резко гемолизированные и проросшие сыворотки крови

для исследования не пригодны.

Реакция Вассермана должна ставиться с двумя антигенами: ультраозвученным

трепонемным и кардиолипиновым.

Ультраозвученный   трепонемный   антиген   приготовлен   из   культур   бледных

трепонем, подвергнутых действию ультразвука.

Ультраозвученный трепонемный антиген выпускают лиофильно высушенным во

флаконах по 5 и 10 мл; хранят его в холодильнике при 4 град. 

Кардиолипиновый   антиген   для   реакции   Вассермана   представляет   собой

очищенный от балластных примесей спиртовый  экстракт липидов из мышц бычьего
сердца.   Активность   антигена   обуславливается   присутствием   трех   компонентов   -
фосфолипида, лецитина и холестерина.

Гемолитическая сыворотка (гемолизин)
Это сыворотка крови кролика или осла, иммунизированных эритроцитами барана.

Гемолитическая сыворотка (жидкая или сухая) выпускается в ампулах по 1 мл с 
указанием титра. 

Эритроциты барана
Баран должен быть в возрасте от 1 до 5 лет. Кровь у него берут путем пункции

яремной вены не чаще одного раза в 10 дней, в количестве не более 200 мл в сухую
стерильную банку со стеклянными бусами, которую встряхивают в течение 5-10 минут.
Затем кровь фильтруют через двойной слой марли (отделяют образовавшиеся сгустки
нитей фибрина).

Комплемент

Применяют смесь сыворотки крови, полученной пункцией сердца у 5-10 здоровых

морских свинок. 

Оценка результатов
Для   обозначения   степени   позитивности   реакции   Вассермана   пользуются

системой четырех плюсов:

Полная   задержка   гемолиза   -  4+   (резко   положительная   реакция);   значительная

задержка гемолиза - 3+ (положительная реакция); частичная задержка гемолиза - 2+
(слабоположительная   реакция);   незначительная   задержка   гемолиза   -   1+;
сомнительная   реакция   -+/-.   Отрицательный   результат   реакции   характеризуется
полным гемолизом во всех пробирках опыта.

Оценку результатов регистрируют в книге протоколов лаборатории.
Результаты реакции следует давать по каждому антигену отдельно.
В   случае   расхождения   результатов   между   антигенами   необходимо   повторить

исследование новой порции сыворотки крови. Особое внимание следует обращать на
образцы сыворотки крови, дающие положительный результат в РСК с трепонемным
антигеном   и   отрицательный   результат   с   кардиолипиновым   и   в   МР.   Поскольку
трепонемный   антиген   является   специфическим   следует   исследовать   данную
сыворотку   крови   в   специфических   тестах,   в   частности   в   РПГА   из-за   простоты   ее
постановки и быстрого получения результата.

После лечения больных по поводу сифилиса РСК с трепонемным антигеном, как

и другие специфические тесты, может длительное время оставаться позитивной.

Повторное   исследование   необходимо   также  при  наличии   задержки   гемолиза   в

контроле сыворотки крови (третья пробирка, не содержащая антигена).

Правильность течения опыта оценивают на основании следующих результатов:
- контроля испытуемой сыворотки крови - третий ряд пробирок (отрицательный);
- контроля с заведомо отрицательной сывороткой крови (отрицательный);
-  контроля   с  заведомо  положительной   (3+  или  4+) и  слабоположительной   (2+)

сыворотками крови.

В качестве контрольных используют лиофилизированные сыворотки крови.
Сыворотки   крови   положительные   и   слабоположительные   получают   из   крови

кроликов,   зараженных   патогенными   бледными   трепонемами   (штамм   Никольса),
отрицательные - из крови здоровых кроликов.

Сухие сыворотки крови выпускают в ампулах по 1 мл. к).
Источники ошибок:
- нарушение условий и методики постановки реакции;
-   несоблюдение   условий   и   срока   хранения   испытуемой   сыворотки   крови,

антигенов, комплемента, эритроцитов барана;

- изменение процентного содержания натрия хлорида;
- неправильно выбранная рабочая доза комплемента (избыток или недостаток его

в опыте);

-   исключение   из   постановки   реакции   контрольных   положительных   и

слабоположительных сывороток крови;

-   использование   при   постановке   реакции   загрязненных   пробирок,   пипеток,

химических стаканов, мерных цилиндров.

Количественный   метод   постановки   реакции   Вассермана  ставят   с

положительными   сыворотками   крови,   давшими   4+   с   кардиолипиновым   или
трепонемным антигенами.

Оценка   результатов.   Титром   реагинов   исследуемой   сыворотки   крови   является

последнее разведение, давшее задержку гемолиза.

В выдаваемых лабораторией анализах при наличии резкоположительной реакции

(4+)   указывают,   с   каким   титром   испытуемой   сыворотки   получена   положительная
реакция.