Том 1. Справочник по кожным болезням - часть 85

 

  Главная      Учебники - Разные     Том 1. Справочник по кожным болезням

 

поиск по сайту            правообладателям  

 

 

 

 

 

 

 

 

содержание   ..  83  84  85  86   ..

 

 

Том 1. Справочник по кожным болезням - часть 85

 

 

ввиду продукции самых разнообразных бактериоцинов, без которых выживание бактерий в 
условиях исключительно мощной конкуренции стало бы невозможным [20]. 

Клинически БВ характеризуется отсутствием воспалительных изменений, присущих 
инфекционно-
воспалительным заболеваниям аналогичной локализации, этиологическим агентом которых 
могут быть как условнопатогенные микроорганизмы (E.coli, P.aeruginosa, S.aureus, E.fecalis, 
E.faecium, U.urealyticum 
и др.), так и строгие патогены (N.gonorhoeae, C.trachomatis и др.), при 
колонизации которыми отмечаются лейкоцитоз с инфильтрацией слизистой и 
соответствующие серологические изменения (появление специфических антител). 

Инкубационный период составляет в среднем 10 дней. Основной симптом – жалобы на 
выделения с неприятным запахом, которые отмечают лишь 50% больных [81]. Выделения 
чаще умеренные, реже – обильные, в ряде случаев они могут вообще отсутствовать. 
Выделения при БВ серовато-белого цвета, гомогенны, без комков, имеют специфический 
"рыбный запах", который может быть постоянным, отсутствовать, появляться во время 
менструации и полового акта. Длительность существования этих симптомов может 
исчисляться годами. При длительно текущем процессе выделения приобретают желтовато-
зеленую окраску, становятся более густыми, нередко напоминают творожистую массу, 
обладают свойством пениться, слегка тягучие и липкие, равномерно распределяются по 
стенкам влагалища. Другие жалобы, на зуд и дизурические расстройства, встречаются редко: 
они могут совсем отсутствовать или появляться периодически. Эти симптомы выявляются у 
15,9 - 22,9% пациенток с нарушениями микрофлоры влагалища [2, 39, 87]. 

Нередко женщины с БВ предъявляют жалобы на обильное менструальное кровотечение, боли 
в области низа живота, аднексит [11]. В то же время, в ряде случаев у части больных не 
выявляют никаких объективных и субъективных симптомов [85]. 

Раздражение вульвы и влагалища наблюдается редко, что отличает БВ от 
кандидоза и трихомониаза, которые обычно сопровождаются сильным зудом. 

ЛАБОРАТОРНАЯ ДИАГНОСТИКА НАРУШЕНИЙ МИКРОЭКОЛОГИИ ВЛАГАЛИЩА 

В полной мере оценить состояние микроэкологии влагалища возможно только при комплексом
подходе с учетом данных анамнеза, жалоб пациентки, состояния влагалища непосредственно в
момент осмотра и комбинации методов лабораторной диагностики. 

Предварительный диагноз БВ может быть поставлен уже во время гинекологического 
исследования. 

Осмотр начинают с наружных половых органов, при котором обращают внимание на окраску 
и отечность слизистой оболочки вульвы, парауретральных ходов, наружного отверстия уретры
и выводных протоков больших желез преддверия влагалища. После этого при помощи 
влагалищных зеркал производят осмотр стенок влагалища, обращая внимание на их 
отечность. Для кандидоза характернна сильная гиперемия вульвы и влагалища, при 
трихомониазе отмечают поверхностную очаговую гиперемию вульвы, а также появление на 
слизистых оболочках шейки матки и стенок влагалища ярко-красных пятен. При осмотре 
шейки матки обращают внимание на наличие гнойного цервицита, эрозий или 
пролиферативных изменений. Во время осмотра отмечают наличие и характер выделений. 
Выделения – густые, обильные, беловатого цвета нередко сопровождают кандидоз; 
желтоватые или зеленовато-серые выделения, пенистые, часто зловонные обнаруживаются при
инфекциях вызванных, T.vaginalis [9]. 

После осмотра производят взятие отделяемого из задненижнего свода влагалища. Для 
диагностики БВ не рекомендуется взятие мазков из цервикального канала или уретры, 
поскольку их микрофлора не идентична и не может характеризовать БВ, хотя и несет 
определенную информацию о наличии воспалительного процесса, но он, как правило, 
вторичен и является результатом БВ. Для проведения бактериологического исследования с 
целью определения качественного и количественного состава вагинальной микрофлоры, 
материал забирают при помощи стерильного ватного тампона, калиброванной петли 
диаметром 3 мм или ложечки Фолькмана и затем помещают в пробирку с универсальной 
транспортной средой (Stuart,s transport medium; BioMerioux, Becton Dickinson). Для 
определения рН вагинального содержимого взятие материала производится при помощи 

стерильного ватного тампона. Далее материал наносится на бумагу. Затем, используя, этот же 
тампон готовят два мазка на предметных стеклах, один для проведения темнопольной 
микроскопии, другой для проведения световой микроскопии мазка, окрашенного по Граму. 
При помощи темнопольной микроскопии материал изучают на присутствие T.vaginalis, 
Mobiluncus spp.

, нитей мицелия или дрожжеподобных грибов. На выделения, 

оставшиеся на тампоне, наносят несколько капель 10% КОН для проведения 
аминного теста. 

ПРЕДВАРИТЕЛЬНЫЙ ДИАГНОЗ

Диагноз БВ может быть поставлен при наличии 3-х из 4-х перечисленных признаков[24]: 

- специфический характер выделений; 
- рН >4,5; 
- положительный аминотест; 
- наличие "ключевых" клеток. 

Выполнение одного из 4-х тестов недостаточно для постановки диагноза. 

Определение рН вагинального отделяемого 
В норме водородный показатель вагинального отделяемого, характеризующий его 
кислотность, составляет 3,8-4,5. Значение рН вагинального отделяемого при БВ превышает 
нормативные показатели (более 4,5). Определение рН вагинального содержимого проводится с
помощью различных модификаций рН метров, например, анализатором ABL-330 (Radiometr). 
Так же индикаторной бумаги (Lachema) с эталонной шкалой от 0 до 12 или лакмусовой 
бумажки, которые вводятся пинцетом во влагалище или помещаются в каплю выделений, 
нанесенных на предметное стекло. Во избежании ошибок в клиническом диагнозе 
обследование не проводят во время менструации, в течении 2-3 дней после полового сношения
(сперма может изменять рН вагинального отделяемого), а также на фоне использования 
антибактериальных или гормональных препаратов. Чувствительность и специфичность этого 
метода составляют 89% и 85% соответственно [17, 34, 35]. 

Аминотест 
Для БВ характерен положительный аминотест. Вагинальное содержимое часто имеет запах 
"тухлой рыбы", который является результатом выработки диаминов (путрецин, кадаверин) в 
процессе реакции декарбоксилирования аминокислот облигатными анаэробами. Соли этих 
соединений превращаются в летучие амины при щелочном значении рН. При проведении 
аминотеста в каплю вагинального содержимого, нанесенного на предметное стекло вносится 
равное количество 10% раствора КОН. При положительном аминотесте определяется запах 
"тухлой рыбы". Вместе с тем, G.vaginalis, с высокой частотой выделяемая при БВ, не 
продуцирует эти соединения. Поэтому в случае полного доминирования G.vaginalis

 в составе

вагинального микроценоза аминотест будет отрицательным. Тест на наличие 
специфического запаха явно субъективен, результаты его подвержены 
искажению в связи с индивидуальными особенностями личного восприятия 
процедуры непосредственным исполнителем. Тем не менее, чувствительность 
и специфичность этого диагностического теста равны 79% и 97% 
соответственно [17]. 

МИКРОСКОПИЧЕСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ

Для проведения микроскопического исследования мазки высушивают на воздухе, фиксируют 
и после этого окрашивают. 

Приготовление мазков 
Исследуемый материал распределяют тонким слоем по поверхности предметного хорошо 
обезжиренного стекла. 
Влагалищное отделяемое, нанесенное на предметное стекло ближе к узкому краю, накрывают 
другим предметным стеклом. Стекла слегка придавливают друг к другу. После этого 
свободные концы стекол захватывают I и II пальцами обеих рук и разводят в 
противоположные стороны так, чтобы при движении оба стекла плотно прилегали друг к 
другу. Таким образом, получаются мазки с равномерно распределенным материалом. 

Высушивание и фиксирование мазков 
Приготовленный на предметном стекле мазок высушивают на воздухе и после полного 
высыхания фиксируют. При фиксировании мазок закрепляется на поверхности предметного 
стекла, и поэтому при последующей окраске препарата микробные клетки не смываются. 
Кроме того, убитые микробные клетки окрашиваются лучше, чем живые. 
Различают физический способ фиксации, в основу которого положено воздействие высокой 
температуры на микробную клетку, и химические способы, предусматривающие применение 
химических средств, вызывающих коагуляцию белков цитоплазмы. 

- Физический способ фиксации 
Предметное стекло с препаратом берут пинцетом или I и II пальцами правой руки за ребра 
мазком кверху и плавным движением проводят 2-3 раза над верхней частью пламени горелки. 
Весь процесс фиксации должен занимать не более 2с. Надежность фиксации проверяют 
следующим приемом: свободную от мазка поверхность предметного стекла прикладывают к 
тыльной поверхности левой кисти. При правильном фиксировании мазка стекло должно быть 
горячим, но не вызывать ощущения ожога. 

- Химический способ фиксации 
Для фиксации мазков применяют также химические вещества и соединения - этиловый 
(винный) спирт 96

0

, ацетон, смесь Никифорова (смесь спирта и наркозного эфира в 

соотношении 1:1), жидкость Карнуа (спирта 96% 60 мл, хлороформа 30 мл, ледяной уксусной 
кислоты 10 мл). 
Предпочтительнее считается щадящая химическая фиксация (ацетон, смесь Никифорова, 
жидкость Карнуа) [15]. Предметное стекло с высушенным мазком погружают в склянку с 
фиксирующим веществом на 10-15 минут и затем высушивают на воздухе. Далее проводится 
классическая окраска мазка по методу Грама. Для проведения этой окраски могут быть 
использованы специальные комерческие красители, например, фирмы BioMerioux или 
красители, приготовленные непосредственно в лаборатории. 

Окраска по Граму 
Окраска по Граму относится к сложному способу окраски. При сложных способах окраски на 
мазок воздействуют двумя красителями, из которых один является основным, а другой – 
дополнительным. Кроме красящих веществ, при сложных способах окраски применяют 
различные обесцвечивающие вещества: спирт, кислоты и т.д. Особенностью окраски по Граму 
является неодинаковое отношение различных микроорганизмов к красителям 
трифенилметановой группы: генциановому, метиловому или кристаллическому фиолетовому. 
Микроорганизмы, входящие в стафилококки, стрептококки, дают прочное соединение с 
указанными красителями и йодом. Окрашенные микроорганизмы не обесцвечиваются при 
воздействии на них спиртом, вследствие чего при дополнительной окраске фуксином Грам(+) 
микроорганизмы не изменяют первоначально принятый фиолетовый цвет. 
Грамотрицательные (Грам-) микроорганизмы (бактероиды, фузобактерии и др.) образуют с 
генциановым кристаллическим или метиленовым фиолетовым и йодом легко разрушающееся 
под действием спирта соединение, в результате чего они обесцвечиваются и затем 
окрашиваются фуксином, приобретая красный цвет. Отношение микроорганизмов к 
окрашиванию по Граму имеет большое диагностическое значение. 

Приготовление растворов 

Кристаллический фиолетовый (фуксин Циля карболовый) – карболовый раствор: 1г 
кристаллического метилового фиолетового растирают в фарфоровой ступке с 5г 
кристаллической карболовой кислоты и несколькими каплями глицерина. Во время растирания
небольшими порциями прибавляют 10 мл спирта. После того как краситель хорошо 
разотрется, прибавляют при постоянном помешивании 100 мл дистиллированной воды. 
Раствор красителя фильтруют через влажный бумажный фильтр. Фуксин очень стойкий и 
может храниться долгое время во флаконе темного стекла с притертой пробкой. 

Раствор Люголя – 2г йодида калия растворяют в 5-10 мл дистиллированной воды, затем 
прибавляют 1г кристаллического йода, оставляют на несколько часов до полного его 

растворения и после этого приливают приливают 295-290 мл дистиллированной воды. 
Фуксин спирто-водный (раствор Пфейфера) – к 1 части карболового фуксина Циля приливают 
9 частей дистиллированной воды. Раствор очень не стойкий, поэтому его готовят в небольших 
количествах непосредственно перед употреблением. 

Методика окраски 
1. Фиксированный мазок окрашивают через фильтровальную бумагу основным красителем – 
раствором основного карболового кристаллического фиолетового. Прокрашивание длится 1-2 
минуты. 
2. Снимают бумагу, сливают избыток красителя и, не промывая препарата водой, наливают 
раствор Люголя на 1-2 минуты до почернения препарата. 
3. Раствор Люголя сливают. Предметное стекло для обесцвечивания мазка погружают 
несколько раз в стаканчик со спитртом, процесс обесцвечивания считается завершенным, 
когда от мазка перестают отделяться окрашенные в фиолетовый цвет струйки жидкости. 
4. Препарат тщательно промывают водопроводной водой. 
5. Докрашивают спирто-водным раствором фуксина. 
Прокрашивание длится 1-2 минуты. 

Результаты окраски 
Грам(+) микроорганизмы окрашиваются основным красителем в темно-фиолетовый цвет, 
Грам(-), воспринимая дополнительную окраску, приобретают ярко-малиновый цвет. 
К недостаткам этого метода окраски следует отнести определенные трудности при отнесении 
выявленных микроорганизмов к Грам(+) или Грам(-) по цвету из-за их неоднородного 
прокрашивания ввиду возможности присутствия в вагинальном мазке большого количества 
слизи и разнообразных продуктов жизнедеятельности микроорганизмов. В этой связи 
Мавзютов А. Р. и соавт. предложили использовать для микроскопической диагностики БВ 
окраску метиленовым синим [15]. 

Окраска метиленовым синим 

Приготовление растворов: 
Раствор "А": 2,5 г кристаллического фиолетового растворить в 250 мл дистиллированной воды 
(годен 3-4 недели); 
Раствор "Б": 12,5 г натрия карбоната растворить в 250 мл дистиллированной воды (годен 2 
нед., до выпадения кристаллов); 
Раствор йода: 1 г натрия гидроксида растворить в 7 мл дистиллированной воды, затем 
добавить 5 г кристаллического йода и 0,25 к калия йодида, к полученному раствору добавить 
дробно 243 мл дистиллированной воды; 
Смывная жидкость для обесцвечивания: 75 мл ацетона добавить к 175 мл этилового спирта; 
Раствор сафранина: 5 г сафранина растворить в 15-20 мл этилового спирта и добавить до 250 
мл дистиллированной воды. 

Окраска мазков 
1. Мазки фиксируют над пламенем горелки. На свободную от исследуемнго материала часть 
стекла одновременно наносят по 6 капель растворов "А" и "Б". Смешивают стеклянной 
палочкой и равномерно распределяют по стеклу. Экспозиция – 2 мин. 
2. Удаляют остатки краски и наносят раствор йода на 2 мин. 
3. Удаляют остатки йода и наносят 10-20 капель смывной жидкости, повторяют манипуляцию 
до полного обесцвечивания, постоянно покачивая стекло. 
4. Промывают водопроводной водой. 
5. Докрашивают сафранином 2 мин. 
Промывают водой, просушивают, микроскопируют. 

Результаты окраски 
При использовании данной окраски происходит оптимальное прокрашивание препарата 
метиленовым синим грамположительной флоры в голубые тона и грамотрицательной - в 
интенсивный иссиня-черный цвет. 

Непосредственную микроскопию лучше проводить под относительно небольшим увеличением
(окуляр х 2-7) с целью увеличения поля зрения и максимального охвата всех присутствующих 

в материале объектов. 

С учетом современных достижений клинической бактериологии и знаний инфекционной 
патологии женских половых органов Кира Е. Ф. в 1994 году была разработана оригинальная 
классификация микроскопической характеристики биоценоза влагалища, в которой 
представлена микроскопическая характеристика 4 типов биоценоза влагалища и 
соответствующие каждому типу нозологические формы: 

Нормоценоз

Доминирование лактобактерий, отсутствие грамотрицательной 
микрофлоры, спор, мицелия, псевдогифов, наличие единичных 
лейкоцитов и единичных "чистых" эпителиальных клеток 
соответственно фазе менструального цикла. 
Типичное состояние нормального биотопа влагалища. 

Промежуточный тип 
Умеренное или незначительное количество лактобактерий, наличие грамположительных 
кокков, 
грамотрицательных палочек. Обнаруживаются лейкоциты, моноциты, макрофаги, 
эпителиальные клетки. Часто наблюдается у здоровых женщин, редко сопровождается 
субъективными жалобами и клиническими проявлениями.

Дисбиоз влагалища

 

Незначительное количество или полное отсутствие лактобактерий, 
обильная полиморфная грамотрицательная и грамположительная 
палочковая и кокковая микрофлоры; наличие "ключевых" клеток. 
Количество лейкоцитов вариабильно, отсутствие или 
незавершенность фагоцитоза. Полимикробная картина мазка. 

Бактериальный вагиноз 

Вагинит 
Большое количество лейкоцитов, макрофагов, эпителиальных клеток, выраженный фагоцитоз, 
морфологический пейзаж воспалительного процесса. 

Неспецифический вагинит 
При обнаружении: гонококков, трихомонад, мицелия, псевдогифоф, спор выставляется 
соответствующий этиологический диагноз – Гонорея, Трихомониаз, Микотический вагинит [7,
8]. 
Предложенная классификация достаточно проста и информативна, так как сочетает в себе 
микробиологическую интерпритацию влагалищного мазка, характеристику клинической 
картины и соответствующую нозологическую форму. 

Наиболее важное диагностическое значение при БВ имеет выявление "ключевых" клеток. 

Формирование "ключевых" клеток происходит в случае увеличения колонизации G.vaginalis и 
последующей их адгезии на клетки вагинального плоского эпителия. Таким образом 
"ключевые" клетки представляют собой отторгшиеся от эпителиальной выстилки интактные 
или литически измененные клетки, колонизированные G.vaginalis. G.vaginalis покрывают всю 

поверхность эпителиальных клеток в виде облака или вуали, а в наиболее клинически 
выраженных 
случаях заполняют собой все межклеточное пространство. Однако, выявление "ключевых" 
клеток при микроскопии влажного неокрашенного мазка увеличивает вероятность получения 
ложноположительного результата, так как часто "ложноключевые" клетки (эпителиальные 
клетки с адгезированными на них лактобактериями) отождествляют с истинными, что ведет к 
гипердиагностике БВ. Некоторые авторы считают, что более достоверную информацию можно

получить при микроскопии вагинальных мазков, окрашенных по методу Грама, когда 
"ключевые" клетки легко дифференцировать с "ложноключевыми". Чувствительность 
микроскопического метода диагностики составляет 93%, а специфичность 70% [6]. 
Микроскопический метод позволяет оценить не только морфологические особенности и 
соотношение отдельных компонентов вагинальной микрофлоры, но и получить информацию о
состоянии слизистой влагалища и наличии лейкоцитарной реакции макроорганизма. 

Количественный критерий обнаружения "ключевых" клеток остается дискутабельным, 
поскольку до настоящего времени окончательно не решен вопрос о показаниях нормы для 
микрофлоры влагалища. Вместе с тем, общепризнанным является факт превалирования в 
норме бактерий рода Lactobacillus, что позволило использовать его в качестве основного при 
исследовании БВ. В пользу указанного свидетельствует невозможность чрезмерного развития 
сопутствующей флоры, а следовательно и наличие "ключевых" клеток, при сохраненном 
количественном уровне лактобактерий. Это автоматически исключает подщелачивание среды 
влагалища и т.д., характерные для БВ. В настоящее время существует несколько 
микроскопических классификаций БВ. 

Мавзютов Р. А. и соавт. предложили дифференцирование БВ по трем степеням

1 степень – компенсированный, для которого характерно полное отсутствие в исследуемом 
материале микрофлоры при неизмененных эпителиоцитах. Указанное состояние слизистой 
влагалища не рассматривается в качестве патологического, но отсутствие лактобактериальной 
флоры свидетельствует о принципиальной возможности заселения пустующей экологической 
ниши попадающими с наружных половых органов микроорганизмами и последующим 
формированием БВ ввиду нарушения на фоне отсутствия лактобактерий естественной 
колонизационной резистентности слизистой. Описанные формы могут наблюдаться при 
микроскопии в результате "чрезмерной" подготовки пациентки к посещению врача или же 
после проведения интенсивной химиотерапии антибактериальными препаратами широкого 
спектра действия (Цефалоспорины, макролиды и т.п.). 

2 степень – субкомпенсированный, характеризующийся количественным снижением 
лактобактерий, соизмеримым с возрастанием количества сопутствующей грамвариабельной 
полиморфной бактериальной флоры, и появлением в поле зрения единичных (1-5) "ключевых" 
клеток при относительно умеренном лейкоцитозе (15-25 в поле зрения). "Ключевые" клетки 
могут быть представлены как покрытыми бактериальной флорой снаружи эпителиоцитами, так
и содержащими бактерии внутриклеточно ввиду неспецифического осуществления 
эпителиальными клетками функций фагоцитоза. 

3 степень – декомпенсированный, являющийся клинически выраженным в соответствии с 
симптоматикой БВ и микроскопически характеризующийся полным отсутствием 
лактобактерий, когда все поле зрения заполнено "ключевыми" клетками. Бактериальная флора 
при этом может быть представлена самыми различными, за отсутствием лактобактерий, 
микроорганизмами как в монокультуре, так и в различных морфо- и видовых сочетаниях [15]. 

Одним из методов лабораторной диагностики, который позволяет в полной мере оценить 
качественные и количественные характеристики микрофлоры влагалища является 
бактериологическое исследование. C развитием этого метода изменялось и представление о 
составе микрофлоры влагалища. Усовершенствование бактериологического метода 
диагностики – улучшение качества питательных сред, методов культивирования, различных 
техник выделения и идентификации микроорганизмов способствовали изменению 
представлений о критериях нормы. Первоначально было установлено, что наряду с 
лактобактериями в составе нормальной микрофлоры могут быть и условно-патогенные 
микроорганизмы (стафилококки, стрептококки, некоторые грамотрицательные бактерии) [13, 
14]. Внедрение с начала 70-х годов техники анаэробного культивирования привнесло новые 
существенные коррективы в понятие "нормальная" вагинальная микрофлора. По мере 

совершенствования анаэробной техники и идентификации строгих анаэробов заметно 
расширился спектр микроорганизмов, входящих в состав нормальной вагинальной 
микрофлоры [16, 17]. 

Однако, бактериологический метод исследования не универсален, пределы его 
возможностей весьма ограничены и зачастую зависят от ряда субъективных 
факторов, таких как оснащенность бактериологической лаборатории, качество 
используемых для выделения микроорганизмов питательных сред, уровень 
подготовки бактериологов и т.д. Поэтому результаты исследований различных 
авторов значительно варьируют и в настоящее время пока еще не определены 
четкие критерии "нормофлоры" влагалища, пограничных и патологических 
состояний. А это, в свою очередь, создает определенные трудности в 
постановке диагноза, прогнозировании тяжести течения патологического 
процесса и возможности его осложнений, а также в назначении адекватной 
этиотропной терапии. 

БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКИЙ МЕТОД

Классическое бактериологическое исследование отделяемого из влагалища позволяет оценить 
как качественный, так и количественный состав бактериальной микрофлоры. Дифференциация
и идентификация микроорганизмов – определение родовой, видовой и типовой 
принадлежности микроорганизмов является наиболее трудоемким и ответственным этапом 
бактериологического исследования. Он осуществляется на основании изучения целого 
комплекса свойств: морфологических, тинкториальных, культуральных, ферментативных и 
антигенных. 

При идентификации микроорганизмов необходимо работать только с чистой культурой, 
поскольку присутствие посторонних микроорганизмов может исказить результаты 
исследования и послужить поводом для ошибочного заключения. 

Широкий спектр микрорганизмов, играющих роль в формировании микробиоценоза 
влагалища, а также в возникновении инфекционного процесса, требует изучения их 
ферментативной активности путем постановки большого количества различных 
биохимических реакций, позволяющих по сочетанию полученных результатов в комплексе с 
другими данными определить вид микроорганизма. Этот раздел работы наиболее трудоемкий, 
проводится в несколько этапов, требует приготовления большого количества питательных 
сред, дефицитных реактивов, посуды и т.д., что делает этот метод исследования достаточно 
дорогостоящим. В связи с этим, в настоящее время для идентификации микроорганизмов 
используются микрометоды – коммерческие микротест-системы или слайды для 
биохимической идентификации микроорганизмов различных групп. 

Важным фактором, значительно влияющим на успех бактериологической диагностики БВ, 
является корректный способ взятия и транспортировки исследуемого материала. Так, взятие 
материала должно всегда осуществляться до начала лечения биотерапевтическими или 
антибактериальными препаратами или не ранее чем через 10 дней после окончания их приема, 
а также до начала проведения других местных терапевтических вмешательств. Накануне 
взятия материала пациентка не должна иметь половую связь. Для предотвращения гибели 
бактерий, чувствительных к различным факторам окружающей среды, и во избежании 
размножения в исследуемом материале бактерий-комменсалов транспротировка взятого 
материала в лабораторию должна осуществляться в максимально короткие сроки и в 
специальных транспортных средах. В настоящее время бактериологи располагают большим 
арсеналом коммерческих универсальных транспортных сред, которые способны сохранять в 
жизнеспособном состоянии весь спектр культивируемых микроорганизмов. 

В зависимости от цели исследования, которая определяется в необходимости проведения 
точной количественной оценки микрофлоры или возможностью ограничиться 
ориентировочным (полуколичественным) методом, вагинальное отделяемое высевается на 
питательные среды двумя методами: 
1. взятие вагинального отделяемого производится с помощью калиброванной петли (диаметр 3
мм) или ложечки Фолькмана, затем материал погружается в 1 мл жидкой транспортной среды, 
далее из материала готовят серийные разведения из расчета 10:1(объем/вес) и затем по 0,1 мл 
высевают на различные селективные питательные среды; 

2. взятие вагинального отделяемого производится микробиологическим тампоном и засевается
на среду обогощения (тиогликолевая среда) и на половину чашки Петри с селективной 
питательной средой с последующим рассевом (метод истощения). 

Степень роста в первом случае определяется в пересчете на 1 мл вагинального отделяемого 
(КОЕ/мл). При полуколичественной оценке используется четыре уровня (градации) 
микробного обсеменения: 

со среды обогащения – рост только на жидкой среде, на плотной питательной среде рост 
отсутствует; 

скудный рост – на плотной питательной среде рост до 10 колоний микроорганизмов 
определенного вида;

умеренный рост – на плотной питательной среде рост от 10 до 100 колоний микроорганизмов 
одного вида; 

обильный рост – на плотной питательной среде рост более 100 колоний микроорганизмов 
одного вида. 

Посев проводится на набор стандартных питательных сред, позволяющих выявить 
максимально возможный спектр микроорганизмов. Питательные среды должны: 
· содержать необходимые для питания микроорганизма питательные вещества; 
· иметь реакцию рН, оптимальную для выращиваемого вида микроорганизма; 
· иметь достаточную влажность, так как микроорганизмы питаются по законам диффузии и 
осмоса; 
· обладать изотоничностью; 
· быть стерильными, обеспечивая тем самым возможность выращивания чистых культур 
микроорганизмов. 

Для выделения всего спектра факультативно-анаэробных микроорганизмов и 
определения их количественных характеристик обычно используется агар с добавлением 5% 
донорской крови. 

Стафилококки представляют собой широко распространенную в природе группу 
микроорганизмов, объединяющую в себе наряду с сапрофитическими и болезнетворные 
формы с различно выраженной степенью их патогенности и вирулентности. В связи с этим, 
выделение стафилококков из вагинального содержимого, содержащего смешанную флору, не 
может являться доказательством их этиологического значения. Только выделение 
монокультуры стафилококка из закрытых гнойных очагов, независимо от свойств штамма 
является бесспорным доказательством его патогенности. Для выделения стафилококков 
используют отечественные питательные среды – желточно-солевой агар Чистовича, молочно-
солевой агар или коммерческую среду Staphylococcus agar (Becton Dickinson). Эти среды 
обладают элективными 
свойствами, обусловленными высоким содержанием хлорида натрия, а желточно-солевой агар,
кроме того, позволяет более четко, чем кровяной агар, дифференцировать патогенные и 
непатогенные штаммы стафилококка. 

Стрептококки выделяют на среде Columbia agar (BioMerioux, Becton Dickinson, Oxoid) с 
добавлением лошадиной или бараньей дефибринированной крови (5%), налидиксовой кислоты
(15 мг/л) и колистина (10 мг/л). Кроме стрептококков на этой среде растут 
коагулазопозитивные стафилококки. В связи с этим, перед идентификацией бактерии 
необходимо исследовать на наличие каталазы. 

Для выделения энтерококков (стрептококки группы D) используют Enterococcus agar (Serva),
Enterococcus agar (Difco), Slanes and Bartley agar или Bile Esculine agar (Oxoid). При проведении
количественного исследования посев производится из исходного материала в разведениях 10

-3

 

и 10

-5

. Во все среды, кроме Bile Esculine agar входит трифенилтетразолий хлорид (ТТХ), 

который, расщепляясь энтерококками, придает их колониям характерную розовую или 
малиновую окраску. В состав среды Bile Esculine agar входят соли желчи, к которым 
устойчивы энтерококки. Кроме того, в среду входят эскулин и цитрат железа. Энтерококки 
способны гидролизовать эскулин с образованием эскулетина и глюкозы. Эскулетин, 
связываясь с цитратом железа, образует комплекс черного цвета, который придает 
характерную черную окраску колониям энтерококков и среде вокруг них. 

 

 

 

 

 

 

 

содержание   ..  83  84  85  86   ..