Главная Учебники - Медицина Лабораторные методы исследования в клинике: справочник (Меньшиков В.В.) - 1987 год
поиск по сайту правообладателям
|
|
|
содержание .. 56 57 58 59 ..
плазмой и эритроцитами, поэтому с равным успехом может определяться в цельной крови, плазме или сыворотке, но надо иметь в виду, что в уже взятой пробе крови, особенно если сгусток для получения сыворотки формируется в термо- стате или если материал взят нестерильно, идет интенсивный гликолиз и содержание глюкозы быстро падает. Часто принимают, что в венозной крови содержится на 0,5 ммоль/л (10 мг в 100 мл) меньше глюкозы, чем в капиллярной, но эта величина, разумеется, условная. Широко распространенный термин «сахар крови» надо считать неудачным, так же как и термин «сахарная кривая», и использовать более точные выражения: глюкоза крови и глюкозо-то лерантный тест (ГТТ). Методы определения глюкозы разделяют на три группы: ферментативные, редуктометриче- ские и методы с использованием цветных реак- ций, в которых участвуют продукты, образую- щиеся при нагревании углеводов с концентри- рованными кислотами. Ф е р м е н т а т и в н ы е м е т о д ы иссле- дования сочетают в себе высокую точность и техническую простоту анализа, они основыва- ются на одной из двух реакций — гексокиназ- ной либо глюкозооксидазной. В первом случае глюкоза сначала фосфорилируется за счет АТФ благодаря действию гексокиназы; образовав- шийся глюкозо-6-фосфорный эфир в присутст- навливает NADP, количество которого опреде- ляется по увеличению светопоглощения в ульт- рафиолетовой области. Эти методы считаются наиболее точными, но для выполнения нужда- ются в нескольких ферментах и кофакторах, поэтому определение оказывается дорогостоя- Легче выполнимы глюкозооксидазные методы, в которых глюкозооксидаза окисляет глюкозу кислородом воздуха с образованием перекиси водорода, количество которой определяется либо химическим путем, либо по ее способности в при- сутствии пероксидазы окислять диамины с обра- зованием окрашенных продуктов. Практически очень удобен унифицированный в 1974 г. глюко- зооксидазный метод определения глюкозы по окислению ортотолидина. Он не требует ни на- гревания до высоких температур, ни работы с концентрированными кислотами, но имеет тот недостаток, что орто-толидин токсичен (канце- роген), кроме того, трудно получить препарат глюкозооксидазы, полностью свободной от ка- талазы, которая, хотя бы в небольшой степени, разрушает образующуюся перекись водорода, поэтому всегда существует угроза получения заниженных результатов. Входящий в эту же группу глюкозооксидазный метод, основанный на окислении перекисью водорода фенолфта- лина, имеет то преимущество, что нуждается только в одном реактиве — глюкозооксидазе, зато метод более трудоемок. Особый вариант ферментативных методов — ферментные электроды, которые представляют собой чувствительные электрохимические дат- чики, содержащие иммобилизованные ферменты. Существует два варианта электродов для опре- деления глюкозы, и в обоих идет глюкозоокси- дазная реакция, но в первом варианте датчик улавливает перекись водорода, а во втором уменьшение содержания кислорода, израсходо- ванного на окисление глюкозы. Редуктометрический феррицианидный метод, предложенный в 1926 г. Н. С. Hagedorn, В. N. Jensen, малоспецифичен, но не нуждается ни в дефицитных реактивах, ни в дорогой аппа- ратуре, поэтому принят в качестве унифициро- ванного и используется и в настоящее время, особенно в небольших лабораториях. Значи- тельно точнее методы, основанные на способ- ности глюкозы восстанавливать соли меди; так как образующаяся одновалентная медь легко окисляется кислородом воздуха, она обычно вы- ступает в качестве промежуточного вещества, окончательным хромогеном служит мышьяково- молибденовая или фосфорно-вольфрамовая кис- лота. Однако, если в растворе присутствуют комплексообразователи, например неокупреин, восстановленная (одновалентная) медь не окис- ляется кислородом воздуха, поэтому может быть непосредственно измерена. Методы, основанные на восстановлении глюкозой нитробензолов, в частности пикриновой кислоты, в некоторых странах широко распространены, эффективность их, видимо, во многом зависит от степени чистоты реактивов. Ошибки редуктометрических методов в значительной степени вызваны при- сутствием восстанавливающих веществ неугле- водной природы — глютатиона и аскорбиновой кислоты. В связи с тем что глютатион находится в эритроцитах, при анализе плазмы или исполь- зовании такого метода исследования цельной крови, при котором эритроциты удаляются не- разрушенными, погрешности значительно сокра- щаются. Из многочисленных методов, которые осно- ваны н а ц в е т н ы х р е а к ц и я х с продук- тами, образующимися при нагревании углеводов толуидиновый метод. Он специфичен, прост в выполнении, но по ходу реакции надо кипятить пробу на водяной бане с концентрированной уксусной кислотой, поэтому работать надо под тягой или в специальном помещении. Антроно- вый метод значительно менее специфичен, но примерно в 5 раз чувствительнее; благодаря малой специфичности он годится для определе- ния любых углеводов в крови, в частности поли- глюкина. Другие методы этой группы, основан- ные на цветных реакциях с карбазолом, орци- ном или резорцином, применяются лишь для оп- ределения углеводов, входящих в состав глико- протеидов и протеогликанов. В клинической лабораторной диагностике чаще всего глюкозу определяют в крови, взятой из пальца, в этом случае предварительное уда- ление белка абсолютно необходимо. Но если анализировать сыворотку без гемолиза и жел- тухи, то многие методы позволяют обходиться без депротеинизации. Определение глюкозы в моче имеет лишь вспомогательное значение, поэтому обычно ог- раничиваются лишь ее качественным исследо- ванием. При количественном определении обыч- 231 |