Главная Учебники - Медицина Лабораторные методы исследования в клинике: справочник (Меньшиков В.В.) - 1987 год
поиск по сайту правообладателям
|
|
|
содержание .. 30 31 32 33 ..
ческое встряхивание для усиления травматиза- ции клеток и увеличение количества LE-клеток. Метод Харгревеса — Циммера. П р и н - ц и п . Механическое повреждение лейкоцитов для усиления LE-феномена. Р е а к т и в ы . 1. Метиловый спирт. 2. Краска Романовского — Гимзы или другой гематологи- ческий краситель. С п е ц и а л ь н о е о б о р у д о в а н и е . 1 . Микроскоп. 2. Металлическое сито. 3. Фарфоро- вый пестик. 4. Центрифуга. Х о д о п р е д е л е н и я . В пробирку наби- рают 10 мл венозной крови и оставляют для свертывания на 2 ч. Свернувшуюся кровь в ы л и - вают на металлическое сито, поставленное на ч а ш к у Петри, и пестиком протирают сгусток в чашку. Содержимое ч а ш к и Петри выливают в центрифужную пробирку и центрифугируют при 2000 об/мин в течение 5 мин. Надосадочную жидкость отсасывают и удаляют, а из осадка (верхнего слоя) готовят мазки. Высохшие мазки фиксируют и окрашивают гематологическим красителем. Метод Цинкхама — Конли в модификации Е. Н. Новоселовой. П р и н ц и п . Механическое воздействие на кровь, облегчающее образование LE-феномена. Р е а к т и в ы . 1. Оксалат натрия. 2. Метило- вый спирт. 3. Краска Романовского — Гимзы или азур-эозин. С п е ц и а л ь н о е о б о р у д о в а н и е . 1 . Микроскоп. 2. Центрифуга. 3. Стеклянные бу- синки диаметром 3—4 мм. Х о д и с с л е д о в а н и я . В пробирку поме- щают 10 мг оксалата натрия и 10 мл венозной крови. Тщательно перемешивают и оставляют стоять на 1 —1'/2 ч. Вносят в пробирку 6—8 бу- синок, закрывают пробирку плотно пробкой и пе- ремешивают в течение 30 мин (опрокидывая пробирку пробкой вниз и вверх). Затем отстаи- вают в течение 1 ч при комнатной температуре до разделения слоев. Плазму отсасывают пасте- ровской пипеткой и переносят в центрифужную пробирку. Центрифугируют при 1000 об/мин в течение 5 м и н . Надосадочную жидкость слива- ют, из осадка готовят мазки. Фиксируют высох- шие мазки в метиловом спирте и окрашивают гематологическим красителем. Н о р м а л ь н ы е в е л и ч и н ы . У здоровых людей волчаночные клетки в крови отсутствуют. К л и н и ч е с к о е з н а ч е н и е . Обнаруже- ние LE-клеток — специфичный симптом систем- ной красной волчанки. Исследование необходи- мо производить до начала кортикостероидной терапии. Отрицательный результат исследова- ния не исключает возможность данного заболе- вания, он бывает в раннем периоде болезни, а также при выраженном нефротическом синд- роме и потере с мочой большого количества белка. Большую диагностическую ценность име- ет иммунологическое исследование антинуклеи- арного фактора (см. раздел «Иммунология»). Л и т е р а т у р а . Коллагсновые болезни и ревматизм/Под ред. Е. М. Тареева.— М.: Мед- гиз, 1961; Поспелова Р. А. Лейкоконцентрация в клинической практике.— М.: Медицина, 1973, г. 771. 3.4.5. Цитохимические исследования лейкоцитов Цитохимические исследования проводят в мазках крови, лейкоконцентрата; они основаны на использовании специфических х и м и ч е с к и х реакций для определения в клетках различных веществ. Эти исследования позволяют изучать локализацию и ориентировочно оценивать коли- чество определяемых веществ в различных кле- точных элементах. Цитохимические исследова- ния относительно несложны, дают возможность исследовать различные виды лейкоцитов, но ус- тупают в точности количественному анализу, проводимому с помощью биохимических мето- дов. При цитохимическом исследовании чаще пользуются полуколичественной оценкой резуль- татов, используя п р и н ц и п Астальди, основан- ный на выявлении различной степени интенсив- ности специфической окраски. В зависимости от нее исследуемые элементы делят на 4 группы: с отрицательной реакцией ( — ) , слабоположи- тельной ( + ), положительной (+ +) и резко положительной ( + + + ). Для количественного выражения результатов подсчитывают 100 кле- ток определенного вида, дифференцируя их по указанному п р и н ц и п у , затем число клеток с оди- наковой интенсивностью окраски умножают на соответствующее данной группе число плюсов, сумма этих произведений составляет условные единицы. Например, при исследовании активно- сти щелочной фосфатазы в нейтрофилах из 100 просмотренных клеток в 60 клетках активность фермента не выявлена ( — ) , в 35—специфи- ческая окраска была слабой ( + ) и в 5— более интенсивной ( + + ). Результат определения ак- тивности щелочной фосфатазы в нейтрофилах в таком случае составит (60 ХО)+(35 X 1) + +(5 X 2) = 0 + 35+ 10 = 45 ед. Можно выразить результат в виде среднего цитохимического по- казателя по L. K a p l o w (1955) или среднего цитохимического коэффициента (СЦК). С этой целью также дифференцируют 100 исследуемых клеток по указанной выше системе. Полученный процент клеток в каждой группе умножают на соответствующее данной группе число плюсов. ставляет собой СЦК для одной клетки. В ука- занном примере СЦК щелочной фосфатазы ней- трофилов равен 0,45. В тех случаях, когда изуча- емые вещества локализуются в клетках в виде единичных гранул (например, активность не- специфической эстеразы в лимфоцитах и др.), результат цитохимической реакции целесооб- разно выражать в процентах клеток, дающих положительную реакцию. Метод полуколичественйой оценки является ориентировочным, но позволяет сравнивать рас- пределение исследуемых веществ в разных кле- точных элементах или в одних и тех же клетках при р а з л и ч н ы х патологических состояниях ор- ганизма, а также в зависимости от течения забо- левания, степени его тяжести и в связи с прово- димой терапией. Наиболее распространены цитоэнзиматичес- кие исследования, дающие возможность выя- 127 |