Лабораторные методы исследования в клинике (Меньшиков В.В.) - часть 9

Т а б л и ц а 8. Сравнительная характеристика некоторых

нммунохимическнх методов

менее 10—20% света, иначе измерение будет

недостоверным. Кроме того, неизвестен физиче-

ский закон, связывающий количество света,

прошедшего через мутный раствор, и число

частиц, поэтому калибровочные графики всегда

сугубо эмпиричны и трудно добиться хорошей

воспроизводимости. Зато турбидиметрические

измерения не требуют специального прибора,

измерения можно выполнять на любом фото-

метре или спектрофотометре.

Нефелометрировать можно на специальном

приборе — нефелометре или флюорометре. Раз-

личие между этими приборами состоит в том, что

при нефелометрии длина волны первичного све-

та, которым освещается раствор, и вторичного,

в данном случае рассеянного, одинакова, поэто-

му нет необходимости во вторичном светофиль-

тре. При флюорометрии раствор освещается

светом, длина волны которого меньше, чем дли-

на волны излучаемого света, поэтому требуются

два светофильтра — первичный и вторичный,

Если же оба они одинаковы или вторичного

светофильтра вообще нет, флюорометр можно

использовать как нефелометр.

При нефелометрии абсолютное количество

рассеянного света не имеет большого значения,

так как чувствительность прибора обычно вели-

ка. В связи с тем что надо измерить количество

светорассенвающих частиц безотносительно их

формы и размера, удобно работать в красной

области спектра: длина волны больше и спектр

частиц, которые ведут себя как релеевские, ши-

ре: Если проводят турбидиметрическое измере-

ние, очень важно увеличить долю рассеянного

света, которая, согласно теории Релея, -обратно

пропорциональна четвертой степени длины во-

лны» т. е. в фиолетовой области значительно

больше, чем в красной. Поэтому выбирают све-

тофильтр, с самой короткой длиной волны, обыч-

но

 340 им.

Чувствительность метода зависит и от фона,

т.,е. света, рассеянного чистым растворителем.

Эта величина определяется многими причинами,

в том числе фокусировкой пучка света. Тут лазер

дает значительные преимущества: интенсив-

ность освещающего (и, следовательно, рассе-

янного) света велика; нет нагревания, как при

работе с лампами накаливания; благодаря па-

раллельности пуука удается избавиться от бли-

ков. В лазерном нефелометре можно измерять

свет, рассеянный в направлении, близком к на-

правлению освещающего; это оправдывает себя

в том случае, когда частицы большие и свет

рассеивается вперед значительно больше, чем

вбок и назад. Частицы иммунных комплексов

как раз такие.

Метод поляризационной флюорометрии по

своему принципу близок к методу конкурентного

связывания, поскольку там также идет конку-

ренция между меченым и немеченым соединени-

ем за антитела, но исследование поляризации

света флюоресценции позволяет определять ко-

личество флюоресцирующего соединения, обра-

зовавшего комплекс механически, не отделяя его

от свободной формы. В этом методе меченые

соединения получают, присоединяя к молекуле

определяемого вещества молекулу флюоресцеи-

на — вещества, способного ярко светиться зеле-

ным светом при освещении его синим светом.

Способ химического присоединения флюоресце-

нна к белковым молекулам был разработан

давно и широко используется при приготовлении

флюоресцирующих антител.

Физически явление флюоресценции заключа-

ется в том, что молекула вещества, поглощая

квант света, переходит в возбужденное со-

стояние, в котором находится очень неболь-

шой промежуток времени, а затем возвращается

в исходное состояние, испуская при этом квант

света с длиной волны, которая несколько боль-

ше, чем у света, который использовался для

возбуждения флюоресценции. Если за время,

прошедшее между поглощением света и его ис-

пусканием, молекула флюорофора не изменила

своего положения в пространстве, то свет флюо-

ресценции будет поляризован в той же плоско-

сти, в которой поляризован и возбуждающий

свет. Если же молекула успела повернуться на

некоторый угол, то соответственно изменяется

и плоскость поляризации излучаемого света.

Поэтому исследование поляризации флюорес-

ценции называют молекулярной вискозимет-

рией, она позволяет оценить скорость вращения

молекул исследуемого вещества. В связи с тем

35

что большие молекулы комплекса антиген -

антитело вращаются значительно медленнее,

чем небольшие молекулы определяемого веще-

ства, меченного флюоресцеинрм, метод позволя-

ет определять одно из них в присутствии

другого.

Практически анализ проводят следующим

образом:, так же как в остальных вариантах

метода конкурентного связывания, к исследуе-

мой пробе добавляют известное количество оп-

ределяемого вещества, меченного флюоресцеи-

ном, затем титрованный раствор антител. После

того как реакция завершена и наступило равно-

весие, раствор облучают поляризованным све-

том и измеряют интенсивность флюоресценции

светом, поляризованным в направлении, перпен-

дикулярном, к управлению поляризации воз-

буждающего света. В таких условиях светятся

только молекулы свободного меченого соедине-

ния, а молекулы, вошедшие в комплекс с антите-

лом, не светятся, так как весь излучаемый ими

свет поляризован в том же направлении, что

и возбуждающий (табл. 8).

1.6.5. Некоторые виды

лабораторного оборудования

Приборы для электрофореза на пленке из

ацетата целлюлозы.  А п п а р а т  д л я

э л е к т р о ф о р е з а  н а  п л е н к е  и з аце-

т а т а  ц е л л ю л о з ы (ЭПАУ 20-50) предна-

значен для разделения белков сыворотки на

пленках из ацетата целлюлозы. Аппарат позво-

ляет выполнять электрофорез на ацетатцеллю-

лозных пленках в микроварианте, что обеспечи-

вает значительную экономию реактивов и элек-

троэнергии. Оборудование состоит из электрофо-

ретической камеры, выполненной из органиче-

ского стекла, и источника постоянного тока.

Экспериментальный завод Всесоюзного научно-

исследовательского института синтетических

смол (г. Владимир) предоставляет ацетатцеллю-

лозные пленки необходимых размеров; удобнее

употреблять пленки размером 9Х 9 см, что дает

возможность наносить последовательно от 4 до

7 образцов. Пленки выдерживают в растворе

буфера, применяемого для электрофореза. Для

получения 5 фракций рекомендуется веронал-

мединаловый буфер или мединал-цнтратный бу-

фер рН 8,6. Длина камеры на 4 пленки 9Х 9 см'

42 см, ширина 13 см. Для визуальной оценки

электрофореграмм, а также прямого ;-денсцто-

метрнрования- достаточно 1—2 мкл сыворотки;

элюироваине фракций 1с последующим фотомет-

рированием требует 3 -4 мкл сыворотки. Элёк-

трофоретическое разделение проводят при на-

пряжении 200 В в течение 20 мин. После окраши-

вания краской, например Понсю С, в течение

15 мин н просветления пленки (устранения, из-

бытка красителя) проводят измерения на денси-

тометре.

Д е н с и т о м е т р ДМ-1 предназначен для

фотометрирования окрашенных фореграмм, по-

лученных методом диск-электрофореза.

Диапазон измерения ко

эффициента. светопро-

пускания, %

Спектральный диапазон

пропускания, нм
Ширина выходной щели

прибора, мм

Скорость перемещения

электрофореграммы,

мм/мин

Продолжительность не-

прерывной работы, ч (не

менее)

10—100

400—650

0,1; 0,2; 0,3; 0,4.

0,5; 1; 5; 10; 20

8

Лабораторное оборудование для пробопод-

готовкн.  Д о з а т о р ы п о л у  а в т о м а т и-

ч ес к и е п и п е тo ч н ы е П1 (СССР) предна-

значены для дозирования реактивов и биожид-

костей. Обладают высокой Точностью дозирова-

ния, легки, удобны и надежны в эксплуатации.

Дозаторы П1-О,2 и П1-0,5 — поршневого ти-

па, дозаторы П1О,02, П1-0,05 и П|-0,1—

плунжерного типа без стеклянного цилиндра,

поршень заменен металлическим плунжером, уп-

лотненным эластичной втулкой. Корпус дозато-

ров заканчивается наконечником, на который

надевают сменные насадки, позволяющие уско-

рить отбор проб биожидкостей от разных паци-

ентов. Использованные сменные насадки стери-

лизуют. Технические характеристики полуавто-

матических пипеточных дозаторов П1 приведены

в табл. 9.

Д о з а т о р  а в т о м а т и ч е с к и й по-

р ш н е в о й АХ-3-5. Химически стойкий трех-

компонентный дозатор. Предназначен для дози-

рования реактивов (кислот с концентрацией до

20 %), растворов щелочей и солей (с концентра-

цией до 6 %). Состоит из механизма перемеще-

ния и блока дозаторов, имеющих три дозирую-

щих устройства, работающих по принципу по-

ршневого насоса.

Ниже приведены технические характеристи-

ки дозатора поршневого АХ-3-5.

Объем дозы, мл От 0,1 до 2 (через 0,1 мл)

» 0,5 » 5 (через 0,5 мл)

Предел допускае-

мой основной прн-

\веденной погреш-

ности, % » ±2 » ±2,5

Сходимость дозиро-

вания, % » 2 > 2,5

Производитель-

кость, цикл/мин 15 и 30

Питание от сети пе-

ременного тока:

напряжение, В 220± 10 %

частота, Гц 50

Габарит, мм:

механизма пере-

мешивания 380 X 272 X 178

блока дозаторов 232 X 250 X 268

масса общая, кг

(не более) 20

36

Т а б л и ц а 9. Технические характеристики полуавтоматических пипеточных дозаторов П 1

Питание дозатора от однофазной сети переменного

тока; напряжение, В

частота, Гц

потребляемая мощность, Вт (не более)

Пределы дозирования, мл:

при применении насадки на 2 мл

> » > > 5 »

> » » > 10 »

Цена деления шкал, мл:

шкалы для насадок на 2 и 5 мл

> > > » 10 мл

Предел допускаемого значения приведенной погреш-

ности дозатора (не более):

для диапазона дозирования

> » »

> » »

Предел допускаемого значения среднеквадратическо-

го отклонения случайной составляющей приведенной

погрешности с доверительной вероятностью 0,9 % (не

более):

для диапазона дозирования

> >

> > »

Габаритные размеры, мм

Масса в комплекте доставки кг (не более)

220 ±22

50 или 60

25

От 0,1 до 2.

От 0,2 до 5

От 0,2 до 10

0,1

0,2

От 0,1 до 2 мл

От 0,2 до 5 мл и

от 0,2 до 10 мл

От 0,1 до 2 мл

От 0,2 до 5 мл и

от 0,2 до 10 мл

265X145X270

7

I

0,5

А в т о д и л ю т о р

 " X и р а т и к - 21"

(ЧССР). Предназначен для дозирования и раз-

бавления различных объемов биожидкости. До-

затор состоит из цилиндров с калиброванными

поршнями разных диаметров н системы шлан-

гов. Величина дозы зависит от диаметра поршня

н высоты хода поршня. Возможно присоедине-

ние автодилютора к транспортеру проб «Хира-

тик-12» для автоматического; дозирования за-

данного объема реактива в отдельные пробирки.

Ниже приведены технические характеристи-

ки автодилютора «Хиратик-21».

Объем дозы, мкл:

пробы

реактива

Продолжительность

дозирования, с (макс)

Точность дозирования,

Габариты, мм

Масса, кг

2 — для дозы до 20 мкл;

1 — для дозы 20 мкл

258X265X300

20

37

Д о з а т о р  а в т о м а т и ч е с к и й по-

р ш н е в о й  м е д и ц и н с к и й А-2 (СССР)

предназначен для дозирования водных раство-

ров с содержанием солей до 5%, кислот (кроме

уксусной, азотной и плавиковой) и оснований до
2%.

Дозатор Имеет 3 сменные дозирующие на-

садки на 2; 5 и 10 мл. Дозирование может

осуществляться с частотой 15 доз в 1 мин, а так-

же разовыми дозами.

Ниже приведены технические характеристи-

ки дозатора А-2.

Устройство автоматической подачи проб

"Хиратик-12" (ЧССР) рассчитано на 120 проби-

рок, помещаемых в 10 штативов по 12 штук. Все

штативы одновременно можно переносить в под-

доне вручную от одного устройства автоматиче-

ской подачи проб к другому или поместить

в баню или термостат для инкубации. Интервал

между двумя шагами дозирования составляет

2,5 с, но может быть увеличен до 10 с. На задней

панели имеется гнездо для подключения дозато-

Вместимость устройства

Организация проб

Размер пробирок, мм

Вместимость пробирок, мд

Рабочая температура поддона

Управление

ра «Хиратик-21». Имеется кодирование проби-

рок для обработки калибровочных проб. Систе-

ма идентификации в устройстве позволяет иден-

тифицировать 4000 проб. Многоцелевое назна-

чение устройства, помещение проб в поддонах

и возможность его соединения с другими устрой-

ствами «Хнратик» делают возможным применег

ние данного устройства как для механизации

работ в лаборатории, так и в комплекте автома-

тизированной лабораторной линии.

20 калибровочных проб и 100 проб па-

циентов

Поддон с 10 штативами, штатив для 12

пробирок; 1-я н 7-я пробирки — для

калибровочных проб

12,5X75

7,5

До

 100 °С

Ручное от встроенного генератора; вре-

мя шага 2,5; 10 с

Автоматическая блокировка работы — после 120-й пробы.

Возможность перемещения по шагам — в 6 проб.

Возможность пропуска дозирования для калибровочных проб.

Габаритные размеры, мм 241X202X250

Масса, кг 6

Д о з и р у ю щ е е  у с т р о й с т в о  D S

201E (ГДР) предназначено для дозирования

водных растворов, в том числе и агрессивных

Дозирующий орган (ДО)

для проб для реактива

реактивов. Пределы дозирования от 250 до

5000 мкл. Может работать по принципу дилюто-

ра.

ДО-0,5

ДО-1

ДО-5

ДО-5

ДО-5

ДО-5

Соотношение

проба/реактив

1:10

1:5

1:1

Диапазон объема

проб, мкл

50—500

100—1000

250—5000

Возможно дозирование проб менее 50 мкл ДО-0,5

и дозирование реактивов менее 250 мкл при ДО-1

использовании устройства как дозатора: ДО-5

10

 мкл

20

 мкл

100 мкл

Ниже приведены технические данные дозирующего устройства DS 201E

Применение

В качестве дозирующего

устройства

В качестве разбавителя

Дозирующее

устройство

Для реактива

» »

Для пробы

» »

» »

Дозируемый

объем, мл

0,25—5,0

0,5—10,0

0,25—5,0

0,1—1,0

0,05—0,5

Соотношение

проба/реактив

—

1:1

1:5

1:10

Дознруюшнй

орган

ДО-5

2 X ДО-5

ДО-5: ДО-5

ДО-1:ДО-5

ДО-0.5:ДО-5

38