ГОСУДАРСТВЕННАЯ ФАРМАКОПЕЯ РЕСПУБЛИКИ БЕЛАРУСЬ (ПЕРВОЕ ИЗДАНИЕ, 2006 год)

2.8. МЕТОДЫ АНАЛИЗА ЛЕКАРСТВЕННОГО РАСТИТЕЛЬНОГО СЫРЬЯ

И ЛЕКАРСТВЕННЫХ СРЕДСТВ ИЗ НЕГО

Методы анализа лекарственного растительного сырья и лекарственных средств

из него проводятся с целью установления подлинности и доброкачественности

лекарственного растительного сырья.

Подлинность - это соответствие исследуемого сырья наименованию, под которым

оно поступило для анализа. Устанавливается методами: макроскопическим,

микроскопическим,

качественным

фитохимическим,

хроматографическим,

люминисцентным.

Доброкачественность-соответствие лекарственного растительного сырья

требованиям нормативной документации. Определяется следующими видами анализа:

товароведческим (определение подлинности, измельченности, содержания примесей,

степени зараженности амбарными вредителями), количественным фитохимическим

анализом

(определение влаги, золы, действующих или экстрактивных веществ),

определение микробиологический чистоты, содержания пестицидов, токсических

веществ, радионуклидов, биологической стандартизацией (для сырья, содержащего

сердечные гликозиды).

2.8.1. ЗОЛА, НЕРАСТВОРИМАЯ В ХЛОРИСТОВОДОРОДНОЙ КИСЛОТЕ

Зола нерастворимая в хлористоводородной кислоте - это остаток, полученный

после отделения сульфатной или общей золы хлористоводородной кислотой,

рассчитанный на 100 г лекарства.

В тигель, содержащий остаток после отделения общей или сульфатной золы,

добавляют 15 мл воды Р и 10 мл кислоты хлористоводородной Р, раствор покрывают

часовым стеклом, аккуратно кипятят в течение 10 мин и охлаждают. Фильтруют через

обеззоленный фильтр, промывают фильтр горячей водой Р до тех пор, пока фильтрат

не станет нейтральным, затем фильтр сушат и сжигают при температуре слабого

красного каления (около 500^оС), после чего охлаждают в эксикаторе и взвешивают.

Процесс сжигания необходимо повторять до тех пор, пока разница между двумя

последовательными взвешиваниями будет не более 1 мг.

# Допускается проводить определение золы, нерастворимой в соляной кислоте по

следующей методике:

Для получения общей золы берут навеску лекарственного растительного сырья

массой около 5 г.

В тигель с общей золой приливают 15 мл кислоты хлористоводородой Р1; тигель

покрывают часовым стеклом и нагревают на кипящей водяной бане в течение 10 мин.

Затем тигель снимают и после остывания содержимое фильтруют через беззольный

фильр. Тигель, часовое стекло и фильтр промывают дистиллированной водой до

прекращения появления мути в промывных водах от капли 2 г/л раствора нитрата

серебра Р. фильтр помещают в тот же тигель, высушивают, осторожно сжигают в тигле,

после чего тигель прокаливают до тех пор, пока разница между двумя

последовательными взвешиваниями будет не более 0,5 мг.

Прокаливание ведут в муфельной печи при слабом красном калении

(при

температуре 550-650 ºС) до полного сгорания, избегая сплавления золы и спекания её с

тиглем.

Содержание золы, нерастворимой в хлористоводородной кислоте, рассчитывают в

процентах на массу абсолютно сухого лекарственного средства

(лекарственного

растительного сырья).

(м

)×100×100

(100

)

где:

м₁

- масса золы, г;

м₂

- масса золы фильтра (если золы последнего более 0,002 г);

- масса сырья, г;

- потеря в массе при высушивании сырья, %.

# 2.8.2. ДОПУСТИМЫЕ ПРИМЕСИ

Допустимые примеси - это примеси, включающие в себя:

1) Посторонние части данного растения, утратившие окраску, предусмотренную

частной статьей или части данного растения, не являющиеся лекарственным

растительным сырьем.

2) Органические примеси - неядовитые части других растений, солома, сено, вата и

т.п.

3) Минеральные примеси - земля, песок, камешки.

ОПРЕДЕЛЕНИЕ СОДЕРЖАНИЯ ПРИМЕСЕЙ

Образец лекарственного растительного средства (лекарственного растительного

сырья) массой 100-500 г (или минимальное количество, указанное в частной статье)

рассыпают тонким слоем. Осматривают невооружённым глазом или с помощью лупы (5

- 10х). Каждую группу посторонних примесей отделяют, взвешивают и рассчитывают их

процентное содержание:

100

где:

м₁

- масса примеси, г;

м₂

- масса образца, г.

Процентное содержание посторонних примесей в каждой группе не должно

превышать норм, указанных в частной статье. Если в частной статье не указано иное,

то количество посторонних примесей в каждой группе не должно превышать 2%.

# 2.8.3. ТЕХНИКА МАКРОСКОПИЧЕСКОГО И МИКРОСКОПИЧЕСКОГО АНАЛИЗА

Макроскопический анализ сводится к изучению внешнего вида лекарственного

растительного сырья, определению размеров отдельных частей, органолептических

показателей (цвета, запаха, вкуса), морфологических диагностических признаков.

Размеры сырья определяются с помощью измерительной линейки: для крупных

объектов ( более 3 см) - 3-5 измерений, для мелких-10-20 измерений. Мелкие семена и

плоды измеряют на миллиметровой бумаге и рассчитывают среднее значение.

Определяют цвет сырья поверхности, в изломе или на разрезе при дневном

освещении.

Запах определяют при растирании между пальцами, при изломе или растирании в

ступке.

Вкус сырья определяют в последнюю очередь, когда выяснено, что оно не ядовито.

Небольшие кусочки сырья жуют и, определив вкус, выплевывают. Для ядовитых

объектов вкус не определяют.

Морфологические диагностические признаки определяют для всех видов сырья.

Высушенные и смятые части сырья предварительно размягчают во влажной камере

или путем погружения на несколько минут в горячую воду, после чего раскладывают на

стеклянной пластинке, тщательно расправляя. Рассматривают невооруженным глазом

или с помощью лупы (10 х).

Листья (Folia) - лекарственное сырье, представляющее собой высушенные или

свежие листья или отдельные листочки сложного листа. Диагностическими признаками

являются: тип листьев (простые или сложные), форма и размеры листовой пластинки и

черешка, характер края, жилкование, опушенность.

Цветки

(Flores)

- лекарственное сырье, представляющее собой высушенные

отдельные цветки или соцветия, а также их части. Диагностическими признаками

являются: тип соцветия, опушенность, форма и размеры цветка, строение

околоцветника (число, форму и характер срастания чашелистиков и лепестков), число и

строение тычинок и пестиков, характер завязи и цветоложа.

Травы (Herbae) - лекарственное сырье, представляющее собой высушенные или

свежие надземные части травянистых растений (стебли с листьями и цветками, отчасти

с бутонами и незрелыми плодами). Диагностические признаки для листьев и цветков

указаны выше. Для стеблей: тип ветвления, форма поперечного сечения, размеры

(длина и диаметр у основания), характер поверхности, опушенность,

листорасположение.

Плоды (Fructus) - высушенные или свежие простые или сложные плоды (соплодия)

и их части. Диагностическими признаками являются: консистенция околоплодника

(перикарпия), характер поверхности, размеры (длина, толщина, поперечник плода),

расположение остатков частей цветка и др.

Семена (Semina) - цельные семена или отдельные семядоли. Исследуются сухими.

Диагностические признаки: форма, размеры (длина, толщина, поперечник), характер

поверхности, цвет, запах, вкус, форма, размеры и расположение зародыша, наличие и

форма рубчика или семяшва.

Кора (Cortices)

- лекарственное сырье, представляющее собой наружную часть

стволов, ветвей и корней деревьев и кустарников, расположенную к периферии от

камбия. Диагностические признаки: размеры и форма кусков, особенности наружной и

внутренней поверхности и излома.

Корни, корневища, луковицы, клубни, клубнелуковицы (Radices, Rhizomata, Bulbi,

Tubera, Bulbotubera)

- высушенные или свежие подземные органы многолетних

растений, очищенные или отмытые от земли, освобожденные от остатков стеблей и

листьев. Диагностические признаки: форма, особенности наружной поверхности и

излома, размер, цвет поверхности и на свежем изломе, запах и вкус.

Сборы

(Species)

- смесь нескольких видов измельченного

(реже цельного)

лекарственного растительного сырья, иногда с добавлением солей, эфирных масел.

Сырье, используемое для приготовления сборов, должно соответствовать требованиям

нормативной документации на каждый вид сырья.

Сырье, входящее в состав сборов, измельчают по отдельности, перемешивают до

получения равномерной смеси. Если в состав сбора входит соль, из неё готовят

насыщенный раствор и опрыскивают им сбор при перемешивании, после чего

высушивают при температуре не выше 60 ⁰С. Сырье гигроскопичное и легко портящееся

от увлажнения следует прибавлять в сбор после опрыскивания других компонентов

раствором соли и высушивания с последующим перемешиванием. Эфирное масло вносят

в сбор в виде спиртового раствора (1:10) опрыскиванием при перемешивании.

Микроскопический анализ зависит от морфологической группы исследуемого

объекта, а также от состояния сырья - цельного, измельчённого (дробленого, резаного)

или порошкообразного.

Цельное сырье может быть обмолоченным. Его размер указываются в частных

статьях.

Измельченность

лекарственного

растительного

сырья

определяется

соответствующим размером отверстия сита, через которое полностью проходит

измельченное лекарственное растительное сырьё.

По измельченности различают:

Резаное и дробленое

Крупный порошок

Среднекрупный порошок

Среднемелкий порошок

Мелкий порошок

Мельчайший порошок

Для определения измельченности порошков проводят ситовой анализ с помощью сит с

размерами отверстий, указанными в таблице 2.8.3.-1.

Таблица 2.8.3-1

Номинальный размер

Наименование

отверстия, мкм

Резаное и дробленое

8000

Крупный порошок

2000

Среднекрупный

1000

порошок

Среднемелкий

500

порошок

Мелкий порошок

250

Мельчайший порошок

180

Лекарственное растительное сырьё в количестве

100 г помещают на

соответствующее сито, снабженное плотно пригнанным приемным лотком и крышкой, и

просеивают, не допуская дополнительного измельчения. Просеивание измельчённых

частиц считается законченным, если количество сырья, прошедшего сквозь сито при

дополнительном просеве в течение 1 мин, составляет менее 1 %, оставшегося на сите.

Лекарственное растительное сырьё должно полностью проходить сквозь сито с

указанным размером отверстий.

В случае необходимости в частных статьях указывают сито с размером отверстий,

соответствующим измельченности лекарственного растительного сырья.

Микроскопический анализ может проводиться одновременно с микрохимическим

анализом.

ЛИСТЬЯ, ТРАВЫ, ЦВЕТКИ

Цельное и резаное сырье. При исследовании цельного сырья берут кусочки

пластинки листа с краем и жилкой; у трав берут лист, иногда также кусочек стебля и

цветок, у цветков - чашечку и венчик. При исследовании резаного сырья берут по

нескольку различных кусочков.

Просветление можно проводить двумя способами.

I. Несколько кусочков сырья помещают в колбу или пробирку, прибавляют раствор

25 г/л натрия гидроксида Р и кипятят в течение 1 - 2 мин. Затем содержимое выливают

в чашку Петри (или фарфоровую), жидкость сливают и сырье тщательно промывают

водой Р. Из воды кусочки сырья вынимают скальпелем или лопаточкой и помещают на

предметное стекло в каплю раствора хлоралгидрата Р1 или глицерина Р.

II. Кусочки кипятят в растворе хлоралгидрата Р1, разведенного водой Р (1:1), в

течение 5 - 10 мин (до просветления). Просветленный кусочек сырья помещают на

предметное стекло в каплю раствора хлоралгидрата Р1 или глицерина Р, разделяют

скальпелем или препаровальной иглой на две части, одну из них осторожно

переворачивают. Объект накрывают покровным стеклом, слегка подогревают до

удаления пузырьков воздуха и после охлаждения рассматривают лист с обеих сторон

под микроскопом сначала при малом, затем при большом увеличении. При

приготовлении микропрепаратов из толстых листьев их предварительно раздавливают

скальпелем.

Для исследования стеблей их отрезки кипятят в растворе

50 г/л натрия

гидроксида Р, тщательно промывают водой Р, снимают эпидермис скальпелем или

препаровальными иглами и рассматривают его с поверхности; из остальных тканей

готовят препарат, раздавливая объект скальпелем на предметном стекле в растворе

хлоралгидрата Р1 или глицерина Р.

При необходимости приготовления поперечных срезов листьев и стеблей их

кипятят в растворе хлоралгидрата Р1 в течение 10 мин и делают срезы, зажимая

кусочки листа в пробку или сердцевину бузины. Готовые срезы помещают в воду Р и

далее используют для приготовления микропрепаратов, рассматривая их в растворе

хлоралгидрата Р1.

Порошок. На предметное стекло наносят 1 - 2 капли раствора хлоралгидрата Р1

и небольшое количество исследуемого порошка. Порошок берут кончиком

препаровальной иглы, смоченной раствором хлоралгидрата Р1, тщательно

размешивают, закрывают покровным стеклом и нагревают до удаления пузырьков

воздуха. Затем стекло слегка придавливают ручкой препаровальной иглы,

выступившую по краям жидкость удаляют полоской фильтровальной бумаги. Порошки

кожистых листьев просветляют кипячением в растворе 50 г/л натрия гидроксида Р.

Диагностическими признаками являются: форма и размеры клеток эпидермы, тип

устьиц, наличие и строение трихом, вместилищ, эфиро-масличных железок,

кристаллических включений, механической и проводящей тканей,

млечников,

секреторных каналов.

ПЛОДЫ, СЕМЕНА

Цельное сырье. Готовят препараты кожуры семени и околоплодника с

поверхности или поперечные срезы.

Препараты поверхности кожуры и околоплодника. 2 - 3

семени или плода кипятят в пробирке в растворе 50 г/л натрия гидроксида Р в течение

2 - 3 мин и тщательно промывают водой Р. Объект помещают на предметное стекло,

препаровальными иглами отделяют кожуру семени или ткани околоплодника и

рассматривают их в растворе хлоралгидрата Р1 или глицерина Р.

С р е з ы . Для приготовления срезов сухие плоды и семена предварительно

размягчают, поместив их на сутки во влажную камеру

(влажной камерой служит

эксикатор с водой, в которую добавлено несколько капель хлороформа) или водяным

паром в течение 15 - 30 мин или более в зависимости от твердости объекта.

Мелкие плоды и семена запаивают в парафиновый блок размером 0,5х0,5х1,5 см.

Кончиком нагретой препаровальной иглы расплавляют парафин и в образовавшуюся

ямку быстро погружают объект. Поверхность объекта должна быть сухой. Срезы

объекта делают вместе с парафином; срезы выбирают из парафина препаровальной

иглой, смоченной жидкостью, и готовят микропрепараты в растворе глицерина Р или

хлоралгидрата Р1.

Диагностические признаки: форма и строение клеток экзокарпия (эпидермиса) ,

наличие и строении трихом, расположение и форма механических элементов в

мезокарпии, число и расположение эфиро-масличных каналов, проводящих пучков,

наличие кристаллических включений.

Порошок. Готовят несколько микропрепаратов для выявления диагностических

элементов кожуры семени и околоплодника и содержимого эндосперма или зародыша.

Препарат готовят так же, как указано в разделе «Листья, травы, цветки». В качестве

просветляющей жидкости используют раствор хлоралгидрата Р1 или раствор 500 г/л

натрия гидроксида Р.

К р а х м а л . Готовят два препарата - в растворе Люголя Р и в воде Р; от йода

крахмальные зерна окрашиваются в синий цвет. В воде определяют их форму,

строение, размеры крахмальных зерен измеряют окулярным микрометром.

Ж и р н о е и э ф и р н о е м а с л о . Для обнаружения жирного и эфирного

масла готовят препарат в растворе судана III Р и подогревают; капли жирного или

эфирного масла окрашиваются в оранжево-розовый цвет.

С л и з ь . Для обнаружения слизи готовят препарат порошка в растворе черной

туши Р и тотчас рассматривают под микроскопом (малое увеличение); слизь заметна в

виде бесцветных масс на черном фоне.

При исследовании строения клеток кожуры и околоплодника в порошке из плодов

и семян, содержащих крахмал или незначительное количество жирного масла,

препарат готовят в растворе хлоралгидрата Р1 при легком подогревании. При

необходимости порошок обезжиривают и просветляют.

Для обезжиривания порошок сырья помещают в пробирку с притертой пробкой и

заливают 2 - 3 раза смесью спирта Р с эфиром Р (1:3) и после настаивания каждый

раз в течение 20 мин растворитель сливают. Вместо смеси спирта с эфиром для

обезжиривания можно использовать ксилол Р или эфир Р.

Для просветления 0,5 - 1 г порошка насыпают в фарфоровую чашку, прибавляют 5

- 10 мл кислоты азотной разведенной Р2 и кипятят в течение 1 мин, затем жидкость

процеживают через ткань и порошок промывают горячей водой Р. Остаток на ткани

собирают лопаточкой обратно в фарфоровую чашку, обливают 5 - 10 мл раствора 50

г/л натрия гидроксида Р, кипятят в течение 1 мин, снова процеживают через ту же

ткань и промывают горячей водой Р. После этого порошок рассматривают в растворе

глицерина Р под микроскопом.

КОРА

Цельное сырье. Готовят поперечные или продольные срезы коры. Кусочки коры

размером 2-3х0,5-1 см кипятят в колбе или пробирке с водой Р в течение 5 мин.

Размягченные куски выравнивают скальпелем так, чтобы они имели строго поперечное

или продольное сечение. Делают срезы и готовят микропрепараты в растворе

хлоралгидрата Р1 или глицерина Р. При необходимости готовят препараты в

соответствующих реактивах для выявления различных структур или веществ.

Диагностические признаки: толщина, окраска и характер пробки, наличие

колленхимы, толщина первичной и вторичной коры, ширина сердцевинных лучей,

особенности расположения и количество лубяных волокон, каменистых клеток, клеток с

эфирным маслом, включения кристаллов оксалата кальция, млечники.

Одревесневшие

( л и г н и ф и ц и р о в а н н ы е ) э л е м е н т ы . К срезу на

предметном стекле прибавляют несколько капель раствора 10 г/л флороглюцина Р в

спирте Р и 1 каплю раствора 250 г/л серной кислоты Р. Через минуту жидкость

отсасывают полоской фильтровальной бумаги, срез заключают в раствор

хлоралгидрата Р1 или глицерина Р и закрывают покровным стеклом (рассматривают

без подогревания); одревесневшие механические элементы окрашиваются в малиново-

красный цвет.

Для окраски одревесневших элементов можно использовать также раствор 10 г/л

сафранина Р. Срезы помещают в раствор 10 г/л сафранина Р в спирте (50 % об/об) Р

на 30 мин (в закрытом бюксе или на часовом стекле), промывают сначала спиртом (50

% об/об) Р, затем подкисленным спиртом (на 100 мл спирта Р прибавляют 2 капли

хлористоводородной кислоты Р) и заключают на предметном стекле в глицерин Р.

Одревесневшие оболочки окрашиваются в красный цвет.

К р а х м а л . Для обнаружения крахмала делают соскоб с сухой коры и

рассматривают его в растворе Люголя Р. Крахмальные зерна окрашиваются в синий

цвет.

Д у б и л ь н ы е в е щ е с т в а . Наличие дубильных веществ устанавливают,

нанося 1 каплю раствора 10 г/л железа (III) аммония сульфата Р или раствора 30 г/л

железа (III) хлорида Р на внутреннюю поверхность сухой коры; появляется черно-синее

или черно-зеленое окрашивание.

П р о и з в о д н ы е а н т р а ц е н а . Наличие производных антрацена определяют,

нанося 1 - 2 капли раствора 50 г/л натрия гидроксида Р на внутреннюю поверхность

коры (кроваво-красное окрашивание), или проводят микросублимацию описанным ниже

способом.

Резаное сырье. Соскоб коры или мелкие кусочки кипятят в течение 3 - 5 мин в

растворе 50 г/л натрия гидроксида Р, промывают водой Р и готовят микропрепараты,

раздавливая объект скальпелем в растворе глицерина Р или хлоралгидрата Р1.

Одревесневшие элементы определяют по реакции, описанной для цельного

сырья.

Наличие крахмала, дубильных веществ, производных антрацена определяют в

соскобе сухой коры.

Порошок. Готовят несколько микропрепаратов для выявления диагностических

элементов коры (в растворе хлоралгидрата Р1) и содержащихся в ней веществ.

Одревесневшие

(лигнифицированные)

э л е м е н т ы . На

предметное стекло помещают около 0,1 г порошка, прибавляют 1 - 2 капли раствора 10

г/л флороглюцина Р в спирте Р, 1 каплю раствора 250 г/л серной кислоты Р и

закрывают покровным стеклом. Затем с одной стороны наносят 1 - 2 капли раствора

хлоралгидрата Р1, а с противоположной - отсасывают жидкость фильтровальной

бумагой. Одревесневшие механические элементы окрашиваются в малиново-красный

цвет.

Производные антрацена

( р е а к ц и я м и к р о с у б л и м а ц и и ) . На

предметное стекло ставят трубку диаметром 1,5 см и высотой 2 см. Внутрь стеклянной

трубки помещают небольшое количество испытуемого порошка (или соскоба), сверху

накрывают другим предметным стеклом, ставят на асбестовую сетку, закрепленную в

штативе, и подогревают. Пламя горелки следует держать от предметного стекла на

расстоянии

7 см. На поверхность стекла, которое служит для улавливания

сублимата, помещают кусочки фильтровальной бумаги и смачивают время от времени

холодной водой. Через некоторое время на нижней стороне стекла появляется налет.

Под микроскопом в сублимате видны тонкие желтые иголочки, которые в

ультрафиолетовом свете

(люминесцентный микроскоп) имеют яркое желтое или

оранжево-красное свечение. В спиртовом растворе 50 г/л калия гидроксида Р сублимат

растворяется с красным окрашиванием.

КОРНИ, КОРНЕВИЩА, КЛУБНИ, ЛУКОВИЦЫ, КЛУБНЕЛУКОВИЦЫ

Цельное сырье. Готовят поперечные и продольные срезы. Небольшие куски

подземных органов помещают в холодную воду Р и выдерживают около суток, затем

помещают в смесь спирта Р и глицерина Р (1:1) на 3 сут. Размоченные объекты

выравнивают скальпелем так, чтобы они имели строго поперечное или продольное

сечение. Делают срезы и готовят микропрепараты в растворе хлоралгидрата Р1 или

глицерина Р и рассматривают диагностические признаки сначала при малом, затем при

большом увеличении.

Диагностические признаки: особенности строения эпидермы или перидермы,

расположение и строение механических, проводящих, секреторных тканей, кристаллы

оксалата кальция, запасные вещества.

С соскобом сухих подземных органов или порошком проводят необходимые

микрохимические реакции.

Наличие одревесневших элементов, крахмала, слизи, жирного и эфирного масла,

дубильных веществ, производных антрацена определяют, как указано в разделах

«Плоды и семена» и «Кора».

И н у л и н . Для обнаружения инулина на предметное стекло помещают около 0,1 г

порошка, 1 - 2 капли раствора α-нафтола Р1 (резорцина Р или тимола Р) и 1 каплю

кислоты серной Р; появляется красновато-фиолетовое окрашивание (от резорцина -

оранжево-красное). О наличии инулина можно делать выводы только при отсутствии

крахмала.

Резаное или дробленое сырье. Кусочки подземных органов кипятят в течение 3

- 5 мин в растворе 50 г/л натрия гидроксида Р, тщательно промывают водой Р и

готовят микропрепараты, раздавливая кусочки в растворе глицерина Р или

хлоралгидрата Р1.

С соскобом или порошком подземных органов проводят микрохимические реакции,

как указано в разделе «Кора».

Порошок. Готовят несколько препаратов для выявления диагностических

элементов подземных органов (в растворе хлоралгидрата Р1) и содержащихся в них

веществ.

Наличие одревесневших элементов, крахмала, слизи, жирного и эфирного масла,

дубильных веществ и производных антрацена определяют, как указано в разделах

«Плоды и семена» и «Кора».

ЛЮМИНЕСЦЕНТНАЯ МИКРОСКОПИЯ

Метод люминесцентной микроскопии применяется (где это целесообразно) для

определения подлинности лекарственного растительного сырья. Преимуществом

метода является возможность его применения для изучения сухого растительного

материала, из которого готовят толстые срезы или препараты порошка, и

рассматривают их в падающем свете, при освещении препарата сверху, через опак-

иллюминатор или объектив.

Люминисцентная микроскопия выполняется с помощью люминесцентных

микроскопов, снабжённых специальными люминисцентными осветителями.

Приготовление микропрепаратов. Для приготовления микропрепаратов

используют сухое лекарственное растительное сырьё или его порошок.

Предварительное размачивание сырья исключается, так как это приводит к вымыванию

веществ из клеток; допускается лишь непродолжительное размягчение во влажной

камере.

Л и с т ь я . Готовят обычно препараты из порошка листьев, которые

рассматривают без включающей жидкости. Наиболее яркая люминисценция характерна

для одревесневших элементов

- сосудов жилки, механических волокон, а также

кутикулы и кутинизированных оболочек различных эпидермальных образований

(волосков, желёзок и др.). В эпидермальных клетках часто содержатся флавоноиды,

обусловливающие коричневую, жёлтую или зеленовато-жёлтую люминесценцию.

Клетки мезофилла содержат различные включения - жёлтые, голубые, зеленовато-

жёлтые, коричневые

- в зависимости от их химического состава. Хлорофилл в

высушенном растительном материале не люминисцирует. Кристаллы оксалата кальция

также не обладают люминисценцией. При необходимости приготовления среза лист

предварительно размягчают во влажной камере и с помощью бритвы делают толстый

срез (2 - 3 мм), который закрепляют на предметном стекле пластилином. Более тонкие

срезы помещают во включающую жидкость и накрывают покровным стеклом.

В качестве включающей жидкости используют воду Р, глицерин Р, раствор 50 г/л

поливинилового спирта Р, нефлюоресцирующее вазелиновое масло Р. Включающая

жидкость не должна растворять содержащиеся в препарате люминесцирующие

вещества.

Т р а в ы . При анализе трав готовят микропрепараты листьев. При необходимости

приготовления препарата стебля его размягчают во влажной камере и готовят срезы.

Толстые срезы (2 - 3 мм) закрепляют на предметном стекле с помощью пластилина и

рассматривают без включающей жидкости, тонкие - помещают в подходящую жидкость

и накрывают покровным стеклом. Наиболее яркую люминесценцию имеют

одревесневшие элементы проводящих пучков - сосуды и механические волокна,

склеренхимные клетки, встречающиеся в коре и сердцевине стебля. В клетках

эпидермиса и коры часто встречаются флавоноиды; у некоторых видов сырья в клетках

обкладки, вокруг проводящих пучков содержатся алкалоиды, которые обладают

разнообразным свечением: синим, голубым, зеленым, зеленовато-жёлтым, золотисто-

жёлтым, оранжево-красным в зависимости от состава.

Ц в е т к и . Чаще готовят препараты из порошка цветков или отдельных частей

цветка

(соцветия), которые рассматривают обычно без включающей жидкости. В

цветках часто содержатся флавоноиды, каротиноиды и другие вещества, обладающие

флюоресценцией. Отчетливо видны пыльцевые зерна, имеющие жёлтое, зеленовато-

жёлтое или голубоватое свечение.

П л о д ы . Готовят обычно поперечные срезы плода после предварительного

размягчения во влажной камере и рассматривают во включающей жидкости или без

нее в зависимости от толщины среза. Для плодов характерна люминесценция тканей

околоплодника

(экзокарпия, механических клеток мезокарпия, проводящих пучков).

Отчетливо видны секреторные каналы

- ярко светится их содержимое; клетки

выстилающего слоя обычно имеют желтовато-коричневую люминесценцию. В

содержимом каналов нередко видны ярко люминесцирующие кристаллические

включения, чаще всего жёлтого или жёлто-зеленого цвета.

С е м е н а . Готовят обычно поперечные срезы семени после предварительного

размягчения во влажной камере и рассматривают их во включающей жидкости или без

нее в зависимости от толщины среза. Обращают внимание на характер люминесценции

семенной кожуры, в которой отчетливо выделяются склеренхимные слои. Клетки

эпидермиса, содержащие слизь, обычно имеют сине-голубое свечение. Эндосперм и

ткани зародыша, богатые жирным маслом, характеризуются голубой люминесценцией.

Кора. Кору предварительно размягчают во влажной камере, готовят толстые

поперечные срезы

(до

5 мм), которые закрепляют на предметном стекле

пластилином, и рассматривают без включающей жидкости; тонкие срезы заключают в

жидкость. Для некоторых видов сырья характерна люминесценция пробкового слоя

коры: оболочки клеток пробки светятся интенсивно-синим, их содержимое - темно-

красным (антоцианы). Яркое и разнообразное свечение имеют механические элементы

(лубяные волокна и каменистые клетки): голубое, зеленовато-голубое, желтовато-

зеленое. Люминесценция паренхимы коры зависит от химического состава. Антрацен-

производные обусловливают яркое оранжевое или огненно-оранжевое свечение.

Дубильные вещества обладают свойством «тушить» люминесценцию, поэтому ткани,

содержащие дубильные вещества, темно-коричневого, почти черного, цвета.

Препарат, приготовленный из порошка коры или соскоба, рассматривают без

включающей жидкости. В нем наиболее ярко видны механические элементы.

Корни, корневища, луковицы, клубни, клубнелуковицы.

Готовят поперечные срезы, распилы, препараты порошка или соскоба. Срезы готовят

из материала, предварительно размягчённого во влажной камере, распилы (из толстых

корней и корневищ) - из сухого материала с помощью тонкой пилы или фрезы. С

помощью бритвы с поверхности распила снимают тонкий слой для удаления слоя

клеток, покрытых пылью. Толстые срезы и распилы (до 3 - 5 мм) закрепляют на

предметном стекле пластилином и рассматривают без включающей жидкости. Слой

пробки у подземных органов обычно тусклый, почти чёрный. Ярко люминесцируют

древесины (у корней и корневищ) и проводящие пучки, а также склеренхимные

элементы. Их свечение очень разнообразно: от буровато-зелёного, жёлто-зелёного до

светло-голубого и интенсивно-синего в зависимости от вида сырья. Ещё более

разнообразна люминесценция паренхимных тканей и различных секреторных

образований (вместилищ, каналов, ходов, млечников, различных идиобластов), что

определяется их химическим составом. В секреторных образованиях встречаются

кристаллические включения кумаринов, алкалоидов, флавоноидов, обладающие яркой

люминесценцией.

В препаратах порошка видны отдельные сосуды, группы механических волокон,

каменистые клетки, отдельные секреторные образования и их обрывки, ярко

люминесцирующие клетки паренхимы, содержащие те или иные вещества.

Препараты в люминесцентном микроскопе рассматривают в ультрафиолетовом

свете, наблюдая первичную (собственную) люминесценцию.

2.8.4. КОЭФФИЦИЕНТ НАБУХАНИЯ

Коэффициент набухания

- это объём в миллилитрах, занимаемый

1 г

лекарственного растительного средства

(лекарственного растительного сырья),

включая прилипшую слизь, после набухания в водном растворе в течение 4 ч.

В градуированный цилиндр с притёртой пробкой вместимостью 25 мл и высотой

125±5 мм с делениями по 0,5 мл помещают 1,0 г образца лекарственного растительного

средства

(лекарственного растительного сырья), цельного или измельчённого как

указано в частной статье. Смачивают образец 1 мл спирта Р, если иного не указано в

частной статье, добавляют

25 мл воды Р и закрывают цилиндр. Встряхивают

интенсивно каждые 10 мин в течение часа. Затем оставляют стоять 3 ч. Через 1,5 ч

после начала испытания сливают максимально возможное количество жидкости и

любые частички сырья, плавающие на поверхности жидкости путём вращения

цилиндра вокруг вертикальной оси. Через 3 ч измеряют объём, занимаемый образцом

вместе с прилипшей слизью. Параллельно проводят 3 испытания.

Коэффициент набухания равняется среднему значению, вычисленному по

результатам трёх параллельных испытаний.

# Допускается использование другой градуированной посуды для проведения

испытания, что указывается в частной статье.

2.8.5. ОПРЕДЕЛЕНИЕ ВОДЫ В ЭФИРНЫХ МАСЛАХ

Смешивают 10 капель эфирного масла с 1 мл углерода дисульфида Р. При стоянии

раствор должен оставаться прозрачным.

2.8.6. ПОСТОРОННИЕ ЭФИРЫ В ЭФИРНЫХ МАСЛАХ

Нагревают 1 мл эфирного масла в течение 2 мин на водяной бане с

3 мл

свежеприготовленного раствора 100 г/л калия гидроксида Р в спирте Р. В течение 30

мин не должны образовываться кристаллы, даже при охлаждении.

2.8.7. ЖИРНЫЕ И МИНЕРАЛЬНЫЕ МАСЛА В ЭФИРНЫХ МАСЛАХ

Капают

1 каплю эфирного масла на фильтровальную бумагу. Капля должна

полностью испариться в течение 24 ч не оставляя каких-либо просвечивающихся или

жирных пятен.

# Допускается небольшое подогревание, ускоряющее процесс испарения эфирного

масла.

2.8.8. ЗАПАХ И ВКУС ЭФИРНЫХ МАСЕЛ

Перемешивают 3 капли эфирного масла, 5 мл спирта (90 % об/об) Р и 10 г

порошкообразной сахарозы Р. Запах и вкус должны быть идентичными запаху и вкусу

растения или частей растения, из которых получено эфирное масло.

# Запах и вкус должны быть идентичными запаху и вкусу стандартного образца

эфирного масла, полученного из этого растения.

2.8.9. ОСТАТОК ПОСЛЕ ВЫПАРИВАНИЯ ЭФИРНОГО МАСЛА

Остаток эфирного масла после выпаривания - это процентное по массе количество

остатка, образующегося при выпаривании эфирного масла на водяной бане в условиях,

описанных ниже.

Прибор. Прибор (рис. 2.8.9.-1) состоит из следующих частей:

водяная баня с крышкой с отверстием в ней диаметром 70 мм;

чашка для выпаривания из инертного к содержимому материала;

эксикатор.

Метод. Взвешивают в предварительно нагретую на водяной бане в течение 1 ч и

охлаждённую в эксикаторе чашку для выпаривания 5,00 г эфирного масла, если иного

не указано в частной статье. Нагревают масло на интенсивно кипящей бане в вытяжном

шкафу в течение указанного времени. Охлаждают в эксикаторе и взвешивают.

Во время испытания уровень воды в бане должен поддерживаться на расстоянии

около 50 мм ниже уровня крышки.

Рис 2.8.9.-1. Прибор для определения остатка после выпаривания эфирного масла.

Расстояния даны в миллиметрах.

2.8.10. РАСТВОРИМОСТЬ ЭФИРНЫХ МАСЕЛ В СПИРТЕ

Помещают 1,0 мл эфирного масла в цилиндр вместимостью 25-30 мл с притёртой

пробкой. Необходимо поддерживать постоянные температурные условия,

рекомендуемая температура (20±0,2) ºС. Добавляют спирт указанной в частной статье

концентрации, используя бюретку вместимостью 20 мл, добавляя его сначала по 0,1 мл

до образования раствора, а затем добавляя по 0,5 мл до истечения всех 20 мл, часто и

интенсивно встряхивая цилиндр. Фиксируют объём использованного спирта в момент,

когда образуется прозрачный раствор или, если раствор становится мутным или

опалесцирующим до того, как добавлено 20 мл спирта, фиксируют объём, при котором

появляется мутность или опалесценция и, где это применимо, объём, когда мутность

или опалесценция исчезает.

Если при добавлении

20 мл спирта крепости, указанной в частной статье,

прозрачный раствор не образовался, повторяют испытание, используя более высокую

концентрацию спирта.

Считают, что эфирное масло «растворимо в n или более объёмах спирта данной

концентрации t» когда прозрачный раствор в n объёмах остаётся прозрачным при

сравнении с неразбавленным маслом после дальнейшего добавления спирта той же

концентрации до 20 объёмов спирта.

Считают, что эфирное масло «растворимо в n объёмах спирта данной концентрации

t с появлением помутнения при разбавлении» когда прозрачный раствор в n объёмах

становится мутным в n₁ объёмах (n₁ меньше 20) и остаётся таким после дальнейшего

постепенного добавления спирта той же концентрации до 20 объёмов.

Считают, что эфирное масло «растворимо в n объёмах спирта данной концентрации

t с появлением помутнения в промежутке между объёмами n₁ и n₂», когда прозрачный в

n объёмах спирта раствор становится мутным в n₁ объёмах (n₁ меньше 20) и остаётся

таким при последующем добавлении спирта той же концентрации до n₂ объёмов

спирта, а затем становится прозрачным (n₂ меньше 20).

Считают, что эфирное масло «растворимо с появлением опалесценции», когда

спиртовой раствор проявляет голубоватое окрашивание, подобное окрашиванию

стандарта опалесценции, приготовленного по следующей методике: смешивают 0,5 мл

раствора серебра нитрата Р2 и 0,05 мл кислоты азотной Р, добавляют 50 мл

раствора натрия хлорида 12 мг/л, перемешивают и оставляют на 5 мин в защищённом

от света месте.

2.8.11. ОПРЕДЕЛЕНИЕ 1,8-ЦИНЕОЛА В ЭФИРНЫХ МАСЛАХ

Взвешивают

3,00 г масла, предварительно высушенного с помощью натрия

сульфата безводного Р, в сухой пробирке и добавляют 2,10 г расплавленного крезола

Р. Помещают пробирку в аппарат для определения точки замерзания (2.2.18) и

постоянно взбалтывая, охлаждают. При кристаллизации наблюдается небольшое

повышение температуры. Фиксируют точку наивысшей достигнутой температуры (t₁).

Расплавляют смесь на водяной бане при температуре, которая не превышает

температуру t₁ более чем на

5ºС и помещают пробирку в аппарат, в котором

поддерживается температура на

5ºС ниже, чем t₁. После того, как прошла

кристаллизация или после того, как температура смеси упала на 3ºС ниже температуры

t₁ содержимое пробирки начинают помешивать. Отмечают наивысшую температуру при

кристаллизации смеси (t₂). Повторяют операцию до тех пор, пока значения двух

максимумов температур t₂ не будут отличаться не более чем на 0,2ºС. Если происходит

переохлаждение, инициируют кристаллизацию добавлением маленького кристалла

комплекса, состоящего из 3,00 г цинеола Р и 2,10 г расплавленного крезола Р. Если

температура t₂ ниже 27,4ºС, повторяют испытание после добавления 5,10 г комплекса.

Содержание цинеола коррелирует со значениями температуры t₂ и эта зависимость

представлена в таблице

2.8.11.-1. Если было добавлено

5,10 г, рассчитывают

процентное м/м содержание цинеола по формуле:

2(A-

50)

где:

А - значение, найденное в таблице 2.8.11.-1.

Таблица 2.8.11.-1

t₂

цинеол,

t₂

цинеол,

t₂

цинеол,

t₂

цинеол,

°C

% м/м

°C

% м/м

°C

% м/м

°C

% м/м

45,5

56,0

67,0

82,0

47,0

57,0

68,5

84,0

48,5

58,5

70,0

86,0

49,5

60,0

72,5

88,5

50,5

61,0

74,0

91,0

52,0

62,5

76,0

93,5

53,5

63,5

78,0

96,0

54,5

65,0

80,0

99,0

Содержание цинеола, соответствующее высшей наблюдаемой температуре (t₂),

может быть получено, если необходимо, путём интерполяции.

2.8.12. ОПРЕДЕЛЕНИЕ ЭФИРНОГО МАСЛА

Определение эфирного масла в лекарственных растительных средствах

(лекарственном растительном сырье) осуществляется путём его перегонки с паром в

специальном приборе в условиях, описанных ниже. Дистиллят собирают в

градуированную трубку, используя ксилол для поглощения эфирного масла; водная

фаза автоматически возвращается в дистилляционную колбу.

Прибор. Прибор состоит из следующих частей:

а) круглодонная колба подходящего объёма с коротким притёртым горлышком,

имеющим внутренний диаметр в широком конце 29 мм;

б) конденсирующая система (см. рисунок 2.8.12.-1), которая точно подогнана к колбе

и различные части которой сплавлены в одно целое; используемое стекло должно

иметь малый коэффициент расширения, при этом:

пробка К΄ имеет отверстие, а трубка К имеет желоб диаметром 1 мм, который

совпадает с отверстием в пробке; широкий конец трубки К притёрт и имеет внутренний

диаметр 10 мм;

грушеобразное расширение J вместимостью 3 мл;

трубка JL с делениями 0,01 мл;

вместимость шарообразного расширения L, около 2 мл;

трёхходовой кран M;

переход (спай) B, находящийся на 20 мм выше самой высокой риски градуировки;

в) подходящий нагревательный прибор с точной регулировкой температуры;

г) штатив с кольцом, покрытым изолирующим материалом.

Рисунок 2.8.12.-1. - Прибор для определения эфирного масла в лекарственных

растительных препаратах.

Размеры даны в миллиметрах.

# Конденсирующая система может отличаться по строению от приведённой на

рисунке 2.8.12.-1.

Метод А. Используют тщательно вымытый прибор. Испытание проводят в

соответствии с особенностями испытуемого лекарственного растительного средства

(лекарственного растительного сырья). В колбу наливают указанный объём жидкости

для перегонки, добавляют несколько кусочков пористого фарфора и присоединяют к

конденсирующей системе. Наливают воду Р в трубку через воронку N до тех пор, пока

она не достигнет уровня спая B. Извлекают пробку К΄ и наливают обозначенное

количество ксилола Р, используя пипетку таким образом, чтобы её кончик находился в

нижнем конце трубки К. Возвращают на место пробку К΄ и убеждаются, что желоб в

трубке совпадает с отверстием в пробке. Нагревают жидкость и регулируют скорость

перегонки, чтобы она соответствовала 2-3 мл/мин, если иного не указано в частной

статье.

Для определения скорости перегонки необходимо во время перегонки понизить

уровень воды с помощью трёхходового крана так, чтобы мениск остановился на уровне

нижней отметки (а) (см рис. 2.8.12.-2). Затем закрывают кран и засекают время, за

которое уровень жидкости достигнет верхней отметки

(b). Открывают кран и

продолжают перегонку, регулируя подогрев так, чтобы достичь оптимальной скорости

перегонки. Перегонку проводят в течение 30 мин. После этого прекращают нагрев и по

прошествии минимум 10 мин измеряют объём ксилола в градуированной трубке.

Рисунок 2.8.12.-2

Помещают в колбу указанное в частной статье количество образца и продолжают

процесс перегонки как описано выше в течение предписанного времени и с

обозначенной скоростью. По истечении необходимого времени перегонки прекращают

нагревание и через 10 мин измеряют объём жидкости, собранной в градуированной

трубке и вычитают из полученного значения ранее найденный объём ксилола.

Полученная разница соответствует количеству эфирного масла в массе взятого

образца. Подсчитывают результат в миллилитрах на

1000 г лекарственного

растительного средства (лекарственного растительного сырья).

# Содержание эфирного масла рассчитывают на массу абсолютно сухого

лекарственного средства (лекарственного растительного сырья).

Если эфирное масло собираются использовать далее в аналитических

исследованиях, то безводная смесь ксилола и эфирного масла может быть получена

следующим образом: достают пробку К΄ и добавляют

0,1 мл раствора натрия

флуоресцеината Р концентрацией 1 г/л и 0,5 мл воды Р. Сливают смесь ксилола и

эфирного масла таким образом, чтобы она оказалась в шарообразном расширении L с

использованием трёхходового крана, оставляют на 5 минут и спускают аккуратно смесь

до уровня крана M. Открывают кран против хода часовой стрелки и дают вытечь воде

из соединяющей трубки BM. Промывают трубку ацетоном Р и небольшим количеством

толуола Р, добавляя их через воронку N. Поворачивая кран против часовой стрелки,

сливают смесь ксилола и эфирного масла в подходящую колбу.

# Наряду с данным методом, могут быть использованы следующие методы

определения эфирного масла.

Метод В. Используют прибор, изображённый на рис.

2.8.12.-3. Навеску

измельчённого испытуемого образца помещают в широкогорлую круглодонную или

плоскодонную колбу A вместимостью 1000 мл, приливают 300 мл воды Р (или иное

количество, указанное в частной статье) и закрывают резиновой пробкой B с обратным

шариковым холодильником C. В пробке снизу укрепляют металлические крючки, на

которые при помощи тонкой проволоки подвешивают градуированный приёмник D так,

чтобы конец холодильника находился над воронкообразным расширением приёмника,

не касаясь его. Приёмник должен свободно помещаться в горле колбы, не касаясь

стенок, и отстоять от уровня воды не менее чем на

50 мм. Цена деления

градуированной части приёмника 0,025 мл.

Рисунок 2.8.12.-3. - Прибор для определения содержания

эфирного масла методом В.

Колбу с содержимым нагревают и кипятят в течение времени, указанного в частной

статье на лекарственное растительное средство (лекарственное растительное сырьё).

Объём масла в градуированной части приёмника D замеряют после окончания

перегонки и охлаждения прибора до комнатной температуры

(15 ºС - 25 ºС).

После

6-8 определений холодильник и градуированный приёмник необходимо

промыть последовательно ацетоном Р и водой Р.

Объём эфирного масла в

100 г лекарственного препарата

(лекарственного

растительного сырья) в пересчёте на абсолютно сухое лекарственное растительное

средство (лекарственное растительное сырьё) рассчитывают по формуле:

V×100×100

м×(100-W)

где:

- объём эфирного масла в миллилитрах;

- масса сырья в граммах;

- потеря в массе при высушивании сырья в процентах.

Метод С. Используется прибор, изображённый на рисунке 2.8.12.-4. Прибор состоит

из круглодонной колбы A вместимостью 1000 мл, паропроводной изогнутой трубки B,

холодильника C, градуированной трубки приемника D, оканчивающейся внизу спускным

краном E и сливной трубкой F. В верхней части приёмника имеется расширение G с

боковой трубкой H, которая служит для внесения растворителя эфирного масла в

дистиллят и сообщения внутренней части прибора с атмосферой. Колба и

паропроводная трубка соединяются через нормальный шлиф. Градуированная трубка

имеет цену деления 0,02 мл. Для заполнения прибора водой используется резиновая

трубка I с внутренним диаметром 4,5 - 5 мм, длиной 450 мм и воронка J диаметром 30 -

40 мм.

Рисунок

2.8.12.-4.

- Прибор для определения содержания эфирного масла

методами C и D.

Перед каждым определением через прибор пропускают пар в течение 15-20 мин.

После 6-8 определений прибор необходимо промыть последовательно ацетоном Р и

водой Р.

Навеску измельчённого сырья помещают в колбу, приливают 300 мл воды Р, колбу

соединяют с паропроводной трубкой и заполняют водой Р градуированную и сливную

трубки через кран при помощи трубки, оканчивающейся воронкой. Колбу с содержимым

нагревают и кипятят с интенсивностью, при которой скорость стекания дистиллята

составляет 60-65 капель в 1 мин в течение времени, указанного в соответствующей

нормативной документации на лекарственное растительное сырьё. Через 5 мин после

окончания перегонки открывают кран, постепенно спуская дистиллят так, чтобы

эфирное масло заняло градуированную часть трубки приёмника и ещё через 5 мин

замеряют объём эфирного масла.

Объём эфирного масла в

100 г лекарственного препарата

(лекарственного

растительного сырья) в пересчёте на абсолютно сухое лекарственное растительное

средство (лекарственное растительное сырьё) рассчитывают по формуле:

¥100¥100

;

м¥(100-W)

где:

- объём эфирного масла в миллилитрах;

- масса сырья в граммах;

- потеря в массе при высушивании сырья в процентах.

Метод D. Используют прибор, изображённый на рисунке

2.8.12.-4. Навеску

измельчённого сырья помещают в колбу, приливают 300 мл воды Р, колбу соединяют с

паропроводной трубкой и заполняют водой Р градуированную и сливную трубки через

кран при помощи резиновой трубки, оканчивающейся воронкой. Затем через боковую

трубку при помощи пипетки вливают в приёмник около 0,5 мл декалина Р и точно

замеряют его объём, опуская для этого уровень жидкости в градуированную часть

трубки. Далее поступают, как описано в методике В.

Объём эфирного масла в

100 г лекарственного препарата

(лекарственного

растительного сырья) в пересчёте на абсолютно сухое лекарственное растительное

средство (лекарственное растительное сырьё) рассчитывают по формуле:

-V

)×100×100

м×(100-W)

где:

- объём раствора масла в декалине в миллилитрах;

V₁

- объём декалина в миллилитрах;

- масса сырья в граммах;

- потеря в массе при высушивании сырья в процентах.

Метод Е. Используется прибор, изображённый на рисунке 2.8.12.-5. Прибор состоит

из круглодонной колбы с коротким горлом A вместимостью 1000 мл, паропроводной

трубки B, холодильника C, отстойника D с термометром до 100 ^оС E, ртутный шарик

которого находится на уровне отверстия холодильника, градуированной трубки F с

ценой деления 0,001 мл, спускного крана G и сливной трубки H. Для заполнения

прибора водой используется резиновая трубка I с внутренним диаметром 4,5 - 5 мм,

длиной 450 мм и воронка J диаметром 30-40 мм.

Перед каждым определением через прибор пропускают пар в течение 15 - 20 мин.

После 6 - 8 определений прибор последовательно промывают ацетоном Р и водой Р.

Навеску измельчённого сырья помещают в колбу, прибавляют необходимое

количество воды Р. Колбу соединяют с паропроводной трубкой и заполняют водой Р

градуированную и сливную трубки через кран при помощи резиновой трубки,

оканчивающейся воронкой, до тех пор, пока в нижней воронкообразной части

отстойника не наберётся слой воды высотой 8 - 12 мм. Во время перегонки этот

уровень воды должен оставаться без изменения. Колбу с содержимым нагревают и

кипятят в течение времени, указанного в частной статье на лекарственное

растительное средство

(лекарственное растительное сырьё). Во время перегонки

температура в отстойнике не должна превышать 25^оС. Через 5 мин после окончания

перегонки открывают кран, постепенно спускают дистиллят так, чтобы эфирное масло

заняло градуированную часть трубки. Ещё через 5 мин замеряют объём эфирного

масла.

Объём эфирного масла в

100 г лекарственного средства

(лекарственного

растительного сырья) в пересчёте на абсолютно сухое лекарственное растительное

средство (лекарственное растительное сырьё) рассчитывают по формуле:

V×100×100

м×(100-W)

где:

- объём эфирного масла в миллилитрах;

- масса сырья в граммах;

- потеря в массе при высушивании сырья в процентах.

Рисунок 2.8.12.-5. - Прибор для определения содержания эфирного

масла методом Е.

2.8.13. ОСТАТОЧНОЕ КОЛИЧЕСТВО ПЕСТИЦИДОВ

Определение Под пестицидами понимают любые вещества или смесь веществ,

предназначенных для предотвращения появления, уничтожения или контроля

численности любых вредителей, нежелаемых видов растений или животных,

вызывающих повреждение или каким-либо другим образом оказывающих негативное

влияние на производство, обработку, хранение, транспортировку или реализацию

лекарственных растительных средств (лекарственного растительного сырья). Также это

понятие включает в себя вещества, предназначенные для использования в качестве

регуляторов роста, дефолиантов или осушителей и любые вещества, используемые

для обработки растений перед сбором урожая или после него для защиты от

ухудшения качества во время хранения или транспортировки.

Пределы. Если иного не указано в частной статье, лекарственное растительное

сырьё должно быть исследовано на наличие следов пестицидов в пределах как

минимум списка, представленного в таблице

2.8.13.-1. Пределы пестицидов, не

обозначенных в таблице, наличие которых предполагается по каким-либо причинам,

должны соответствовать директивам Европейского Сообщества

76/895 и

90/642,

включая их дополнения и изменения. Пределы содержания пестицидов, которые не

указаны ни в таблице 2.8.13.-1 ни в директивах ЕС высчитывают исходя из следующего

выражения:

ADI

× M

MDD

×100

где:

ADI

- допустимая дневная доза, по предложению Организации по

продовольствию и сельскому хозяйству ВОЗ, в миллиграммах

на килограмм массы тела,

- масса тела в килограммах (60 кг),

MDD

- дневная доза лекарственного средства, в килограммах.

Если лекарственное растительное сырьё предназначено для приготовления

экстрактов, настоек или других лекарственных форм, при приготовлении которых

происходит изменение содержания пестицидов в конечном продукте, пределы

содержания пестицидов высчитывают исходя из следующего выражения:

ADI

× M

× E

MDD

×100

где:

- коэффициент экстракции метода приготовления, определённый

экспериментально.

Таблица 2.8.13.-1

Вещество

Предельное

содержание (мг/кг)

Алахлор

0,02

Алдрин и Диэлдрин (сумма)

0,05

Азинфос-метил

1,0

Бромпропилат

3,0

Хлордан (сумма цис- и транс- и оксихлордана)

0,05

Хлорфенвинфос

0,5

Хлорпирифос

0,2

Хлорпирифос-метил

0,1

Циперметрин (и изомеры)

1,0

ДДТ (сумма п,п′-ДДТ, o,п′-ДДТ, п,п′-ДДE и п,п′-TДE)

1,0

Дельтаметрин

0,5

Диазинон

0,5

Дихлорфос

1,0

Дитиокарбоматы (в перерасчёте на CS₂)

2,0

Эндосульфан

(сумма изомеров и Эндосульфан

3,0

сульфат)

Эндрин

0,05

Этион

2,0

Фенитротион

0,5

Фенвалерат

1,5

Фонофос

0,05

Гептахлор (сумма Гептахлора и Гептахлорепоксида)

0,05

Гексахлорбензол

0,1

Гексахлорциклогексан, изомеры (кроме γ)

0,3

Линдан (γ-Гексахлорциклогексан)

0,6

Малатион

1,0

Метидатион

0,2

Паратион

0,5

Паратион-метил

0,2

Перметрин

1,0

Фозалон

0,1

Пиперонилбутоксид

3,0

Пиримифос-метил

4,0

Пиретрины (сумма)

3,0

Квинтоцен (сумма квинтоцена, пентахлоранилина и

1,0

метилпентахлорфенилсульфида)

Компетентный уполномоченный орган может частично или полностью освободить от

проведения испытаний на содержание пестицидов при условии, что известна и может

быть проверена полная история (природа и количество использованных пестицидов,

дата каждой обработки во время выращивания и после сбора урожая) данной партии.

Поставщик культивируемого лекарственного растительного сырья должен

предоставить протокол исследований на поставляемую партию лекарственного

растительного сырья, в котором указываются использованные пестициды и их

остаточное количество.

Для дикорастущих лекарственных растений исследование на остаточное количество

пестицидов не требуется.

Отбор проб

Методика. Из тары вместимостью до 1 кг берут

1 пробу, достаточную для

проведения всех испытаний, из тщательно перемешенного общего количества. Из тары

вместимостью от 1 кг до 5 кг берут три равные пробы из верхней, средней и нижней

частей тары, каждая проба должна быть достаточная для проведения всех испытаний.

Пробы тщательно перемешивают, и из полученной массы берут пробу, достаточную

для проведения всех испытаний. Из тары вместимостью более 5 кг берут три пробы по

250 г из верхней, средней и нижней части тары. Пробы тщательно смешивают, и из

полученной массы берут пробу, необходимую для проведения испытаний.

Количество проб. Если количество тарных мест (n) составляет 3 и менее, пробы

отбираются из каждого тарного места так, как указано выше. Если количество тарных

мест более трёх, то пробы отбирают так, как описано выше из

n + 1 мест, округляя,

если необходимо, полученное число до целого значения.

Пробы должны анализироваться немедленно во избежание возможного разрушения

остатков пестицидов. Если это невозможно, пробы сохраняют в герметичных

контейнерах, пригодных для контакта с пищевыми продуктами, при температуре ниже

0ºС в защищённом от света месте.

Реактивы. Все реактивы и растворители не должны содержать примесей, особенно

пестицидов, которые могут влиять на результат анализа. Как правило, должны

использоваться растворители специального качества или, если это невозможно,

свежеперегнанные в приборах, сделанных из стекла. Во всех случаях должен

проводиться контрольный опыт.

Оборудование. Чтобы гарантировать чистоту оборудования, и особенно изделий из

стекла, от пестицидов, его тщательно очищают, например, отмачивают в течение

минимум 16 ч в растворе детергентов, не содержащих фосфор, ополаскивают их

большим количеством дистиллированной воды Р и промывают ацетоном Р и гексаном

Р или гептаном Р.

Качественное и количественное определение остатков пестицидов.

Используемые аналитические методики должны быть валидированы. В частности, они

должны удовлетворять следующим критериям:

- выбранный метод, особенно стадии очистки, должен быть подходящим для

комбинации пестицид-матрица и не должен быть чувствительным на наличие

коэкстрактивных веществ; пределы обнаружения и количественного определения

должны быть измерены для каждой комбинации пестицид-матрица;

- должно определяться от 70 до 110% каждого анализируемого пестицида;

- сходимость определения метода должна быть не менее значений, обозначенных в

таблице 2.8.13.-2;

- воспроизводимость метода должна быть не менее значения, указанного в таблице

2.8.13.-2;

- концентрация испытуемых и эталонных растворов и параметры приборов должны

быть такими, чтобы попадать в диапазон линейности ответа используемого детектора.

Таблица 2.8.13.-2

Концентрация

Сходимость

Воспроизводимость

пестицидов

(отклонение,

(мг/кг)

± мг/кг)

0,010

0,005

0,01

0,100

0,025

0,05

1,000

0,125

0,25

ИСПЫТАНИЯ НА СОДЕРЖАНИЕ ПЕСТИЦИДОВ

ИНСЕКТИЦИДЫ: ХЛОРОРГАНИЧЕСКИЕ, ФОСФОРОРГАНИЧЕСКИЕ И ИРЕТРОИДНЫЕ

(Раздел носит информационный характер)

Данные методики могут быть использованы вместе с методами, описанными выше.

В зависимости от испытуемого вещества, методы, описанные ниже, могут быть при

необходимости модифицированы. Возможно использование другой колонки с

отличающейся полярностью или другой способ детектирования (масс спектрометрия

2.2.43) или другие методы

(иммунохимические методы

2.7.1) для подтверждения

полученных результатов.

Данная методика подходит для анализа образцов лекарственных растительных

средств (лекарственного растительного сырья) влажностью менее 15 %. Образцы с

более высоким содержанием воды должны быть высушены, в условиях минимального

воздействия на содержание пестицидов в таких условиях, чтобы процесс сушки не

влиял в значительной степени на содержание пестицидов.

1. ЭКСТРАКЦИЯ

ГОСУДАРСТВЕННАЯ ФАРМАКОПЕЯ РЕСПУБЛИКИ БЕЛАРУСЬ (ПЕРВОЕ ИЗДАНИЕ, 2006 год) - часть 23