ГОСУДАРСТВЕННАЯ ФАРМАКОПЕЯ РЕСПУБЛИКИ БЕЛАРУСЬ (ПЕРВОЕ ИЗДАНИЕ, 2006 год)

Рисунок 2.4.8.-1. Прибор для испытания на соли тяжелых металлов (метод Е)

Размеры указаны в миллиметрах

МЕТОД F

Количество испытуемого образца, указанное в частной статье,

помещают в чистую, сухую колбу Кьельдаля вместимостью 100 мл (в случае

интенсивного пенообразования следует применить колбу вместимостью 300

мл). Колбу закрепляют под углом 45° и прибавляют смесь 8 мл кислоты серной

Р и 10 мл кислоты азотной Р в количестве, достаточном для полного

смачивания испытуемого вещества. Осторожно нагревают до начала

реакции. После прекращения реакции прибавляют дополнительные порции

этой же смеси кислот, нагревая после каждого прибавления. Операцию

повторяют до тех пор, пока объем прибавленной смеси кислот не достигнет

18 мл. Усиливают нагрев и осторожно кипятят до потемнения раствора.

Охлаждают, прибавляют 2 мл кислоты азотной Р и вновь нагревают до

потемнения раствора. Продолжают прибавление кислоты азотной Р с

последующим нагреванием до тех пор, пока раствор не перестанет темнеть,

затем сильно нагревают до появления плотных белых паров. Охлаждают,

осторожно прибавляют

5 мл воды Р, кипятят с предосторожностями до

появления плотных белых паров и продолжают нагревание до получения

остатка объемом от 2 мл до 3 мл. Охлаждают, осторожно прибавляют 5 мл

воды Р и определяют окраску раствора. Если раствор имеет желтую окраску,

прибавляют по каплям

мл раствора водорода пероксида

концентрированного Р и вновь нагревают до появления плотных белых

паров и продолжают нагревание до получения остатка объёмом от 2 мл до

3 мл. Если окраска раствора всё ещё остаётся жёлтой, повторяют

прибавление

5 мл воды Р и

1 мл раствора водорода пероксида

концентрированного Р до обесцвечивания раствора. Охлаждают,

осторожно доводят объём раствора водой Р до 25 мл.

Доводят рН раствора до 3,0-4,0 раствором аммиака концентрированным

Р1 (при приближении к указанному значению рН можно применять раствор

аммиака разведенный Р1), используя в качестве внешнего индикатора

индикаторную бумагу, действующую в узком интервале рН, затем доводят

объем раствора водой Р до

40 мл, перемешивают и прибавляют

2 мл

буферного раствора рН

3,5 Р. Полученную смесь прибавляют к

1,2 мл

тиоацетамидного реактива Р и немедленно перемешивают. Доводят объем

раствора водой Р до 50 мл и перемешивают.

Параллельно с теми же количествами реактивов и в этих же условиях

готовят эталон, используя вместо испытуемого вещества указанный в

частной статье объем эталонного раствора свинца (10 ррт Рb) Р.

Через 2 мин коричневая окраска испытуемого раствора должна быть не

интенсивнее окраски эталона.

2.4.9. ЖЕЛЕЗО

Количество испытуемого образца, указанное в частной статье, растворяют в

воде Р, доводят объём раствора водой Р до 10 мл и перемешивают; или используют

10 мл раствора, указанного в частной статье. Прибавляют 2 мл раствора 200 г/л

кислоты лимонной Р и

0,1 мл кислоты тиогликолевой Р. Перемешивают,

подщелачивают раствором аммиака Р, доводят объём раствора водой Р до 20 мл.

Параллельно с теми же количествами реактивов и в этих же условиях готовят

эталон, используя 10 мл эталонного раствора железа (III) (1 ppm Fe) Р.

Через 5 мин розовая окраска испытуемого раствора должна быть не интенсивнее

окраски эталона.

2.4.10. СВИНЕЦ В САХАРАХ

Определение свинца проводят методом атомно-абсорбционной

спектрометрии (2.2.23, метод 2).

Испытуемый раствор. 20,0 г испытуемого вещества растворяют в смеси равных

объёмов кислоты уксусной разведенной Р и воды Р, доводят объём раствора этой

же смесью растворителей до

100 мл и перемешивают. Прибавляют

2,0 мл

насыщенного раствора (около 10 г/л) аммония пирролидиндитиокарбамата Р и 10.0

мл метилизобутилкетона Р и встряхивают в течение 30 с в защищённом от яркого

света месте. Оставляют до расслоения. Для испытания используют слой

метилизобутилкетона.

Растворы сравнения. Готовят три раствора сравнения аналогично испытуемому

раствору, но с добавлением к 20,0 г испытуемого вещества соответственно 0,5 мл,

1,0 мл и 1,5 мл эталонного раствора свинца (10 ppm Pb) P.

Устанавливают нулевую точку на приборе, используя метилизобутилкетон Р,

обработанный аналогично испытуемому раствору, но без добавления испытуемого

вещества. Измеряют поглощение при длине волны 283,3 нм, используя в качестве

источника излучения лампу с полым свинцовым катодом и воздушно-ацетиленовое

пламя.

Испытуемоый образец должен содержать не более 0,5 ppm свинца, если нет

других указаний в частной статье.

2.4.11. ФОСФАТЫ

К 100 мл приготовленного и при необходимости нейтрализованного, как

указано в частной статье, раствора прибавляют 4 мл сульфомолибденового

реактива Р3. Встряхивают и прибавляют 0,1 мл раствора олова (II) хлорида

Р1.

Параллельно с теми же количествами реактивов и в этих же условиях готовят

эталон, используя вместо 100 мл раствора испытуемого вещества смесь 2 мл

эталонного раствора фосфата (5 ppm PO₄) P и 98 мл воды Р. Через 10 мин

сравнивают окраску 20 мл каждого раствора.

Окраска испытуемого раствора должна быть не интенсивнее окраски

эталона.

2.4.12. КАЛИЙ

К 10 мл раствора, приготовленного, как указано в частной статье, прибавляют 2

мл свежеприготовленного раствора 10 г/л натрия тетрафенилбората Р.

Параллельно с теми же количествами реактивов и в этих же условиях готовят

эталон, используя вместо

10 мл раствора испытуемого образца смесь

5 мл

эталонного раствора калия (20 ppm K) Р и 5 мл воды Р.

Через

5 мин опалесценция испытуемого раствора не должна превышать

опалесценцию эталона.

2.4.13. СУЛЬФАТЫ

При приготовлении всех растворов, применяемых в данном испытании,

должна использоваться вода дистиллированная Р.

К 1,5 мл эталонного раствора сульфата (10 ppm SO₄) P1 прибавляют 1 мл

раствора 250 г/л бария хлорида Р. Встряхивают и оставляют на 1 мин, затем

прибавляют 15 мл испытуемого раствора, приготовленного как указано в частной

статье, и 0,5 мл кислоты уксусной Р.

Параллельно с теми же количествами реактивов и в этих же условиях готовят

эталон, используя вместо испытуемого раствора

15 мл эталонного раствора

сульфата (10 ppm SO₄) P.

Через

5 мин опалесценция испытуемого раствора не должна превышать

опалесценцию эталона.

2.4.14. СУЛЬФАТНАЯ ЗОЛА

МЕТОД А

Около 1 г (точная навеска) или указанное в частной статье количество

испытуемого образца помещают в предварительно прокаленный и

взвешенный фарфоровый, кварцевый или платиновый тигель, смачивают 1

мл кислоты серной Р, осторожно нагревают на пламени или на песчаной

бане до удаления паров кислоты серной и прокаливают при температуре

(600+25)^оС до исчезновения темных частиц. По окончании сжигания тигель

охлаждают в эксикаторе, взвешивают и вычисляют содержание зольного

остатка в испытуемом веществе. Если содержание золы превышает предел,

указанный в частной статье, остаток вновь смачивают

1 мл кислоты

серной Р, нагревают и сжигают, как описано выше, и вновь вычисляют

содержание золы. Продолжают сжигание до постоянной массы, если нет

других указаний в частной статье.

# МЕТОД В

Фарфоровый, кварцевый или платиновый тигель нагревают при красном

калении (около 500^оС)в течении 30 мин, охлаждают в эксикаторе и взвешивают.

Испытуемый образец помещают в тигель и прибавляют 2 мл кислоты серной

разведённой Р, нагревают сначала на водяной бане, затем осторожно на

пламени. Затем температуру постепенно увеличивают до

600°С и

продолжают сжигание до исчезновения темных частиц. Тигель оставляют до

охлаждения, прибавляют несколько капель кислоты серной разведенной Р,

нагревают и сжигают, как описано выше, затем вновь охлаждают.

Прибавляют несколько капель раствора аммония карбоната Р.

Выпаривают и осторожно сжигают, охлаждают в эксикаторе, взвешивают и

повторяют сжигание по 15 мин до постоянной массы.

#МЕТОД С

Около 1 г (точная навеска) или указанное в частной статье количество

испытуемого образца помещают в предварительно прокаленный и

взвешенный фарфоровый, кварцевый или платиновый тигель. Осторожно

нагревают на пламени или на песчаной бане до полного обугливания

вещества, охлаждают и, если нет других указаний в частной статье,

смачивают остаток

1 мл кислоты серной Р, осторожно нагревают до

удаления паров кислоты серной и сжигают при температуре (800+25)^оС до

исчезновения темных частиц. По окончании сжигания тигель охлаждают в

эксикаторе, взвешивают и вычисляют содержание зольного остатка в

испытуемом веществе. Если содержание золы превышает предел,

указанный в частной статье, остаток вновь смачивают

1 мл кислоты

серной Р, нагревают и сжигают, как описанно выше, и вновь вычисляют

содержание золы. Продолжают сжигание до постоянной массы, если нет

других указаний в частной статье.

2.4.15. НИКЕЛЬ В ПОЛИОЛАХ

Определение никеля проводят методом атомно-абсорбционной

спектрометрии (2.2.23, метод 2).

Испытуемый раствор. 20,0 г испытуемого образца растворяют в смеси

равных объемов кислоты уксусной разведенной Р и воды Р, доводят объем

раствора этой же смесью растворителей до

100 мл и перемешивают.

Прибавляют

2,0 мл насыщенного раствора

(около

10 г/л) аммония

пирролидиндитиокарбамата Р и

10,0 мл метилизобутилкетона Р и

встряхивают в течение

30 с в защищенном от яркого света месте.

Оставляют до расслоения. Для испытания используют слой

метилизобутилкетона.

Растворы сравнения. Готовят три раствора сравнения аналогично

испытуемому раствору, но с добавлением к 20,0 г испытуемого вещества

соответственно 0,5 мл, 1,0 мл и 1,5 мл эталонного раствора никеля (10 ppm Ni) P.

Устанавливают

нулевую

точку

на

приборе,

используя

метилизобутилкетон Р, обработанный аналогично испытуемому раствору,

но без добавления испытуемого вещества. Измеряют поглощение при длине

волны 232,0 нм, используя в качестве источника излучения лампу с полым

никелевым катодом и воздушно-ацетиленовое пламя.

Испытуемый образец должно содержать не более 1 ppm никеля, если нет

других указаний в частной статье.

2.4.1.6. ОБЩАЯ ЗОЛА

Фарфоровый, кварцевый или платиновый тигель нагревают при красном

калении

(около

500^оС) в течение

30 мин, охлаждают в эксикаторе и

взвешивают. Если нет других указаний в частной статье, 1,00 г испытуемого

вещества или измельченного в порошок лекарственного растительного

сырья помещают в тигель и равномерно распределяют по дну тигля.

Высушивают при температуре от 100°С до 105°С в течение 1 ч и затем

сжигают до постоянной массы в муфельной печи при температуре

(600+25)^оС, охлаждая тигель в эксикаторе после каждого сжигания. В

продолжение всей процедуры в тигле не должно появляться пламя. Если

после длительного сжигания зола всё ещё содержит тёмные частицы,

содержимое тигля количественно переносят горячей водой на беззольный

фильтр и сжигают остаток на фильтре вместе с фильтровальной бумагой.

Фильтрат объединяют с золой, осторожно выпаривают до сухого остатка и

сжигают до постоянной массы.

2.4.17. АЛЮМИНИЙ

Раствор испытуемого образца, приготовленный, как указано в частной

статье, помещают в делительную воронку, встряхивают с двумя порциями, по

20 мл каждая, раствора 5 г/л гидроксихинолина Р в хлороформе Р, затем с 10мл

этого же раствора. Хлороформные слои отделяют и собирают в мерную

колбу вместимостью 50,0 мл. Доводят объем раствора хлороформом Р до

метки и перемешивают (испытуемый раствор).

Эталон готовят аналогично, используя указанный в частной статье

раствор сравнения.

Контрольный раствор готовят аналогично, используя указанный в частной

статье раствор.

Измеряют интенсивность флуоресценции (2.2.21) испытуемого раствора

(I₁), эталона

(I₂) и холостого раствора

(I₃), используя возбуждающее

излучение при длине волны

392 нм и вторичный фильтр с полосой

пропускания, имеющей максимум при длине волны

518 нм, или

монохроматор, установленный на пропускание этой длины волны.

Флуоресценция

(I₁-I₃) испытуемого раствора не должна превышать

флуоресценцию эталона (I₂-I₃).

2.4.18. СВОБОДНЫЙ ФОРМАЛЬДЕГИД

Метод А применяют, если нет других указаний в частной статье. Метод В

применяют для вакцин, в которых для нейтрализации избыточного

формальдегида используют натрия метабисульфит.

МЕТОД А

Вакцины, используемые в медицине, разводят в 10 раз.

1 мл испытуемой вакцины, разведенной, как указано выше, помещают в

пробирку и прибавляют 4 мл воды Р и 5 мл реактива ацетилацетона Р1.

Пробирку помещают в водяную баню с температурой 40°С на 40 мин.

Параллельно в этих же условиях готовят эталон, используя вместо

разведенной вакцины 1 мл раствора формальдегида Р, разведенного до

содержания формальдегида (СН₂О) 20 мкг/мл.

Пробирки просматривают вдоль их вертикальных осей. Окраска

испытуемого раствора должна быть не интенсивнее окраски эталона.

МЕТОД В

В пробирку помещают

0,5 мл испытуемой вакцины, разведенной в

соотношении

100, прибавляют

мл раствора

0,5 г/л

метилбензотиазолонгидразона гидрохлорида Р и 0,05 мл полисорбата 80

Р, пробирку зак р ы в а ю т , в с т р я х и в а ю т и о ст а в л я ю т н а

60 мин. Затем

прибавляют 1 мл реактива железа (III) хлорида и сульфаминовой кислоты Р

и оставляют на 15 мин.

Параллельно с теми же количествами реактивов и в этих же условиях готовят

эталон, используя вместо 0,5 мл разведенной испытуемой вакцины 0,5 мл

раствора формальдегида Р, разведенного до содержания формальдегида

(СН₂О) 5 мкг/мл.

Измеряют оптическую плотность

(2.2.25) полученных растворов на

спектрофотометре при длине волны

628 нм, используя в качестве

компенсационного раствора контрольный раствор.

Оптическая плотность испытуемого раствора не должна превышать

оптическую плотность эталона.

Если испытуемая вакцина представляет собой эмульсию, водную фазу

отделяют следующим способом. К вакцине прибавляют равный объем

изопропилмиристата Р и перемешивают. К трем объемам полученной

смеси прибавляют два объема 1 М раствора кислоты хлористоводородной,

три объема хлороформа Р и четыре объема раствора

9 г/л натрия

хлорида Р. Тщательно перемешивают и центрифугируют с ускорением 15000

g в течение 60 мин. Водный слой отбирают и измеряют его объем. Водный

слой используют для испытания на формальдегид, как указано выше.

Вычисляют концентрацию формальдегида в эталоне с учетом разведения

вакцины в процессе разделения слоев и готовят эталон с соответствующей

концентрацией.

Если описанная процедура не позволяет достичь разделения слоев,

прибавляют раствор 100 г/л полисорбата 20 Р в растворе 9 г/л натрия

хлорида Р и повторяют процедуру, центрифугируя с ускорением 22500 g.

2.4.19. ЩЕЛОЧНЫЕ ПРИМЕСИ В ЖИРНЫХ МАСЛАХ

В пробирку помещают 10 мл свежеперегнанного ацетона Р и 0,3 мл воды Р,

прибавляют 0,05 мл раствора 0,4 г/л бромфенолового синего Р в спирте Р; при

необходимости раствор нейтрализуют

0,01

М раствором кислоты

хлористоводородной или

0,01 М раствором натрия гидроксида, затем

прибавляют 10 мл испытуемого масла, встряхивают и оставляют до разделения

слоев.

Для изменения окраски верхнего слоя в желтую должно быть израсходовано

не более 0,1 мл 0,01 М раствора кислоты хлористоводородной.

2.4.20. АНТИОКСИДАНТЫ В ЖИРНЫХ МАСЛАХ

Испытание проводят методом тонкослойной хроматографии

(2.2.27),

используя пластинки, покрытые тонким слоем силикагеля G Р. Перед

применением пластинки высушивают при температуре 130°С в течение 2 ч.

Испытуемый раствор (а). 20 г испытуемого образца, взятого из среднего

слоя масла помещают в делительную воронку, прибавляют 50 мл петролейного

эфира Р и энергично встряхивают с двумя порциями по 30 мл метанола (75 %

об/об). После четкого разделения слоев нижние, метанольные, слои

объединяют и выпаривают при пониженном давлении и возможно более

низкой температуре в атмосфере азота. Остаток растворяют в 5 мл хлороформа,

свободного от этанола Р. Хранят в плотно укупоренном сосуде.

Испытуемый раствор

(b). Слой петролейного эфира

(верхний слой),

полученный при приготовлении испытуемого раствора

(а), осторожно

выпаривают до сухого остатка. Прибавляют 0,5 г пирогаллола Р, растворенного

100 мл этанола Р, затем

15 мл свежеприготовленного раствора 330 г/л

натрия гидроксида Р и кипятят с обратным холодильником в течение 30 мин.

Охлаждают, прибавляют 250 мл воды Р и извлекают неомыляемые вещества

тремя порциями по

100 мл петролейного эфира Р. Объединенные

извлечения петролейного эфира промывают водой Р до отсутствия щелочной

реакции и выпаривают до сухого остатка. Остаток растворяют в

5 мл

хлороформа, свободного от этанола Р. Хранят в хорошо укупоренном сосуде.

А. НЕПОЛИГИДРОКСИАНТИОКСИДАНТЫ

Пластинку помещают в хроматографическую камеру с хлороформом,

свободным от этанола, Р. Когда фронт растворителя пройдет около 12 см

от нижнего края пластинки, пластинку вынимают из камеры, высушивают в

течение 20 мин на воздухе, затем в течение 20 мин в эксикаторе под вакуумом.

На линию старта хроматографической пластинки, подготовленной, как

указано выше, в стартовую точку

№1

(см. Рис.

2.4.20.-1) наносят

испытуемый раствор

(а) в виде пятна диаметром не более

5 мм. Объем

наносимого испытуемого раствора (а) зависит от его концентрации и составляет

обычно от 2 мкл до 10 мкл. В стартовые точки №№2 и 3 (см. Рис. 2.4.20.-1) наносят

по 2 мкл окрашенного раствора, содержащего по 0.1 г/л диметилового желтого Р,

судана красного GР и индофенолового синего Р в бензоле Р. На пластинке

отмечают длину пробега (10 см) в двух направлениях. В первый раз пластинку

хроматографируют в камере с хлороформом, свободным от этанола Р.

Пластинку высушивают на воздухе в течение 10 мин, затем поворачивают на 90°

и хроматографируют в камере с бензолом Р. Пластинку высушивают на воздухе

в течение 5 мин и опрыскивают раствором 200 г/л кислоты фосфорномолибденовой

Р в этаноле Р до устойчивого окрашивания пластинки в желтый цвет. Через 2

мин начинают проявляться синие пятна. В течение первых 5-10 мин пластинку

обрабатывают парами аммиака до тех пор, пока фон не станет чисто белым.

На пластинке остаются синие, светло-фиолетовые или зеленоватые пятна.

Рисунок 2.4.20.-1.Типичные хроматограммы антиоксидантов

(Методы А и С)

а ― стартовая точка №1+пятно галлатов+пятно

нордигидрогваяретовой кислоты

b ― стартовая точка №2

с ― стартовая точка №3

1 ― гваяковая смола

2 ― 3-(1,1 - Диметилэтил)-4-метоксифенол

3 ― 2-(1,1 - Диметилэтил)-4-метоксифенол

4 ― 2.2.5,7,8 - Пентаметил-6-хроманол

5 ― тетраэтилтиурам дисульфид

6 ― а-Токоферол

7 ― дибутилгидроксианизол

8 ― бутилгидроксианизол

А ― жёлтый

В ― красный

С ― синий

Хроматограмму оценивают, сравнивая с Рис. 2.4.20.-1. Если на линии старта

обнаруживаются синие пятна, проводят разделение и идентификацию

полигидроксиантиоксидантов (метод В).

В. ПОЛИГИДРОКСИАНТИОКСИДАНТЫ

На линию старта хроматографической пластинки наносят 1 мкл, 2 мкл, 4 мкл

и 6 мкл испытуемого раствора (а), а также от 1 мкл до 2 мкл окрашенного

раствора, приготовленного, как указанно в методе А. Пластинку помещают в

камеру со смесью растворителей: кислота уксусная ледяная Р-бензол Р-

петролейный эфир Р (30:60:60). Когда фронт растворителей пройдёт около 13

см от линии старта, пластинку вынимают из камеры, высушивают на воздухе,

опрыскивают раствором

200 г/л кислоты фосфорномолибденовой Р в

этаноле Р и продолжают проявление по методике, описанной для

идентификации неполигидроксиантиоксидантов.

Хроматограмму оценивают, сравнивая положение пятен на хроматограмме

испытуемого раствора с Рис 2.4.20.-2.

Рисунок 2.4.20.-2. Типичные хроматограммы полигидроксиантиоксидантов

(метод В)

1 ― окрашенный раствор

2 ― бутилированный гидроксианизол

3 ― гваяковая смола

4 ― нордигидрогваяретовая кислота

5 ― метилгаллат

6 ― этилгаллат

7 ― пропилгаллат

8 ― октилгаллат

9 ― добецилгаллат

А ― жёлтый

В ― красный

С ― синий

С. АНТИОКСИДАНТЫ, НЕИЗВЛЕКАЕМЫЕ МЕТАНОЛОМ

Испытание проводят методом тонкослойной хроматографии на другой

пластинке. Хроматографирование проводят по методике, описанной для

неполигидроксиантиоксидантов, используя вместо испытуемого раствора

(а)

испытуемый раствор

(b).

Пластинку опрыскивают раствором

10 г/л

дихлорхинонхлоримида Р в этаноле Р. Пятна проявляются в течение 15 мин.

Хроматограмму оценивают, сравнивая с Рис.

2.4.20

1. Зоны, отмеченные

пунктиром, соответствуют α-токоферолу и бутилированному гидрокситолуолу. Пятна

β- и γ-токоферола находятся в зоне, соответствующей 2-(1,1-диметилэтил)-4-

метоксифенолу.

Если в испытуемом веществе в существенном количестве присутствует

бутилированный гидрокситолуол, его определяют по методу А.

2.4.21. ПОСТОРОННИЕ МАСЛА В ЖИРНЫХ МАСЛАХ МЕТОДОМ

ТОНКОСЛОЙНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ

Испытание проводят методом тонкослойной хроматографии (2.2.27) с

использованием в качестве тонкого слоя кизельгура G Р. Пластинку

пропитывают, поместив в камеру, содержащую смесь вазелинового масла Р

и петролейного эфира Р (10:90) в таком количестве, чтобы нижний край

пластинки погрузился на 5 мм ниже поверхности жидкости. Когда смесь для

пропитывания поднимется не менее чем на 12 см от нижнего края пластинки,

ее вынимают из камеры и дают растворителю испариться в течение 5

мин. Последующее хроматографирование проводят в том же направлении,

что и пропитывание.

Приготовление смеси жирных кислот. К 2 г масла прибавляют 30 мл 0,5 М

раствора калия гидроксида спиртового и нагревают с обратным

холодильником в течение 45 мин. Прибавляют 50 мл воды Р, оставляют до

охлаждения, переносят в делительную воронку и встряхивают с тремя

порциями эфира Р, по 50 мл каждая. Эфирные слои отделяют, водный слой

подкисляют кислотой хлористоводородной Р и вновь встряхивают с тремя

порциями эфира Р, по 50 мл каждая. Все эфирные слои объединяют и

встряхивают с тремя порциями воды Р, по

10 мл каждая, отбрасывая

промывные воды. Объединенные эфирные слои высушивают над натрия

сульфатом безводным Р и фильтруют. Затем эфир выпаривают на

водяной бане, а из остатка готовят испытуемый раствор или раствор

сравнения. Жирные кислоты также можно извлечь из раствора,

полученного в ходе определения неомыляемых веществ.

Испытуемый раствор. 40 мг смеси жирных кислот, полученной из

испытуемого масла, растворяют в 4 мл хлороформа Р.

Раствор сравнения. 40 мг смеси жирных кислот, полученной из смеси 19 объемов

кукурузн ог о масла Р и 1 объ ем а рапсовог о масла Р, растворяют в 4 мл

хлороформа Р.

На линию старта хроматографической пластинки наносят по 3 мкл каждого

раствора. Помещают пластинку в камеру со смесью растворителей: вода Р -

кислота уксусная ледяная Р (10:90). Когда фронт растворителей пройдет 8 см

от линии старта, пластинку вынимают из камеры, высушивают при

температуре 110°С в течение 10 мин и оставляют до охлаждения. Затем,

если нет других указаний в частной статье, пластинку помещают в закрытую

плотно подогнанной крышкой хроматографическую камеру, предварительно

насыщенную парами йода

(на дно камеры в выпарительной чашке

помещен йод Р). Через некоторое время проявляются коричневые или

желтовато-коричневые пятна. Пластинку вынимают из камеры и оставляют

на несколько минут. Когда коричневый фон исчезнет, пластинку

опрыскивают раствором крахмала Р. Появляющиеся синие пятна могут

приобретать коричневую окраску при высушивании и вновь становятся

синими после опрыскивания водой Р.

На хроматограмме испытуемого раствора всегда должны обнаруживаться

пятно с R_f около 0,5 (олеиновая кислота) и пятно с R_f около 0,65 (линолевая

кислота), соответствующие пятнам на хроматограмме раствора сравнения.

На хроматограммах некоторых масел может обнаруживаться пятно с R_f

около 0,75 (линоленовая кислота). Путем сравнения пятен на хроматограмме

испытуемого раствора с пятнами на хроматограмме раствора сравнения

убеждаются в отсутствии на хроматограмме испытуемого раствора пятна

с R_f около 0,25 (эруковая кислота).

2.4.22. ПОСТОРОННИЕ ЖИРНЫЕ КИСЛОТЫ В МАСЛАХ МЕТОДОМ

ГАЗОВОЙ ХРОМАТОГРАФИИ

Испытание на посторонние жирные кислоты проводят путем перевода

жирных кислот, содержащихся в испытуемом масле, в метиловые эфиры.

МЕТОД А

Этот метод неприменим для масел, содержащих глицериды жирных

кислот

эпокси-,

гидроксиэпокси-,

циклопропиловыми

или

циклопропениловыми группами,а также для масел, в составе которых

большая часть жирных кислот имеет длину цепи менее восьми атомов

углерода, и для масел с кислотным числом более 2,0.

Испытание проводят методом газовой хроматографии (2.2.28).

Испытуемый раствор. Испытуемое масло высушивают перед

метилированием, если это указано в частной статье. 1,0 г масла помещают в

круглодонную колбу вместимостью 25 мл со шлифом, снабженную обратным

холодильником и газоотводной трубкой. В колбу прибавляют 10 мл метанола

безводного Р, 0,2 мл раствора 60 г/л калия гидроксида Р в метаноле Р,

присоединяют обратный холодильник и, пропуская через смесь азот Р со

скоростью около

50 мл/мин, встряхивают и нагревают до кипения. Когда

раствор станет прозрачным (обычно через 10 мин), продолжают нагревание

в течение последующих 5 мин. Затем колбу охлаждают под проточной водой и

содержимое переносят в делительную воронку. Колбу промывают

5 мл

гептана Р, переносят смывы в ту же делительную воронку и встряхивают.

Прибавляют

10 мл раствора

200 г/л натрия хлорида Р и энергично

встряхивают. Оставляют до расслоения, затем переносят органический слой

в сосуд, содержащий натрия сульфат безводный Р и через некоторое

время фильтруют.

# Допускается применение других методик перевода содержащихся в

испытуемом масле жирных кислот в метиловые эфиры, указанных в частной

статье.

Раствор сравнения (а). Готовят 0,50 г смеси веществ, применяемых для

калибровки (калибровочной смеси), состава, приведенного в одной из Табл.

2.4.22, как указано в частной статье

(если в частной статье не указан

определенный раствор, готовят смесь, состав которой приведен в Табл.

2.4.22.-1). Смесь растворяют в гептане Р и доводят объем раствора этим

же растворителем до 50,0 мл.

Табл. 2.4.22.-1

Приготовление смеси веществ, применяемых для калибровки*

Состав

(в процентах м/м)

Вещество для

Эквивалент

Изотерми-

Линейный

калибровки

длины

ческий

градиент

цепи**

режим

температуры

(1)

(2)

Метиллаурат Р

12.0

Метилмиристат Р

14.0

Метилпальмитат Р

16.0

Метилстеарат Р

18.0

Метиларахидат Р

20.0

Метилолеат Р

18.6

18.3

Табл. 2.4.22.-2

Приготовление смеси веществ, применяемых для калибровки*

Состав (в

процентах м/м.)

Вещество для

Эквивалент

Изотерми-

Линейный

калибровки

длины

ческий

градиент

цепи**

режим

температуры

(1)

(2)

Метилкапроат Р

6.0

Метилкаприлат Р

8.0

Метилкапрат Р

10.0

Метиллаурат Р

12.0

Метилмиристат Р

14.0

Табл. 2.4.22.-3

Приготовление смеси веществ, применяемых для калибровки*

Состав (в

процентах м/м)

Вещество для

Эквивалент

Изотерми-

Линейный

калибровки

длины

ческий

градиент

цепи**

режим

температуры

(1)

(2)

Метилмиристат Р

14.0

Метилпальмитат Р

16.0

Метилстеарат Р

18.0

Метиларахидат Р

20.0

Метилолеат Р

18.6

18.3

Метилэйкозаноат Р

20.2

Метилбегенат Р

22.0

Метиллигноиерат Р

24.0

*Для газовой хроматографии с применением капиллярной колонки и делением

потока рекомендуется прибавлять к смеси веществ, применяемых для

калибровки, компоненты с большей длиной цепи.

**Эти значения, вычисленные с использованием калибровочной кривой, даны в

качестве примера для колонки, заполненной полиэтиленгликоль сукцинатом Р (1)

и макроголом 20 000 Р (2).

Раствор сравнения (b). 1.0 мл раствора с р ав н е н и я ( а ) д ов о д я т г е п т а н о м

Р до 10.0 мл.

Хроматографируют на газовом хроматографе с пламенно-ионизационным

детектором в следующих условиях:

- колонка стеклянная или из нержавеющей стали длиной от 2 м до 3 м и

внутренним диаметром от

2 мм до

4 мм, заполненная диатомитом

носителем для газовой хроматографии Р с размером частиц от 125

мкм до

200

мкм, на который нанесено от

5% до

15%

полиэтиленгликольсукцината Р или полиэтиленгликольадипината Р;

- газ-носитель - азот для хроматографии Р;

- скорость газа-носителя - 25 мл/мин;

- температура колонки - 180°С;

- температура инжектора и детектора - 200^оС.

При необходимости или если указано в частной статье, температуру

колонки увеличивают от 120°С до 200°С со скоростью 5°С в мин.

Хроматографировать возможно также на газовом хроматографе с

пламенно-ионизационным детектором в следующих условиях:

- колонка капиллярная стеклянная или кварцевая длиной от 10 м до 30 м и

внутренним диаметром от 0.2 мм до 0.8 мм, внутренняя поверхность которой

покрыта слоем поли[(цианопропил)(метил)][(фенил) (метил)]силоксана Р или

макрогола 20 000 Р толщиной от 0,1 мкм до 0,5 мкм или другой подходящей

неподвижной фазой;

- газ-носитель

- гелий для хроматографии Р или водород для

хроматографии Р;

- скорость газа-носителя

- 1,3 мл/мин (для колонки с внутренним диаметром

0,32 мм);

- деление потока

1:100 или менее в зависимости от внутреннего

диаметра применяемой колонки

(в случае использования колонки с

внутренним диаметром 0,32 мм деление потока должно составлять 1:50);

- температура колонки

- от

160°С до

200°С, в зависимости от длины

колонки и используемой неподвижной фазы (для колонки длиной 30 м,

покрытой слоем макрогола 20 000 Р, температура должна составлять 200°С);

- температура инжектора и детектора - 250°С.

При необходимости или если указано в частной статье, температуру

колонки увеличивают от 170°С до 230°С со скоростью 3°С в мин (для колонки,

покрытой слоем макрогола 20 000 Р)

Хроматографируют

0,5 мкл раствора сравнения

(а). Чувствительность

системы регулируют таким образом, чтобы высота основного пика на

полученной хроматограмме составляла от

50% до

70% шкалы

регистрирующего устройства.

Определяют времена удерживания жирных кислот, входящих в состав

калибровочной смеси. Хроматографируют 1 мкл раствора сравнения (b) и

рассчитывают отношение сигнал/шум для пика, соответствующего

метилмиристату.

Хроматографируют от 0,5 мкл до 1,0 мкл испытуемого раствора. Время

хроматографирования должно в 2,5 раза превышать время удерживания

метилолеата. Хроматограмму оценивают, как описанно ниже.

При использовании калибровочных

смесей

№1 или

№3

хроматографическая система считается пригодной, если выполняются

следующие условия:

- на хроматограмме раствора сравнения (а) число теоретических тарелок (n)

(2.2.28), вычисленное для пика, соответствующего метилстеарату,

составляет не менее 2000 для набивной колонки и не менее 30 000 для

капиллярной колонки;

- на хроматограмме раствора сравнения (а) коэффициент разделения (R_s)

(2.2.28) пиков, соответствующих метилолеату и метилстеарату, составляет

не менее 1,25 для набивной колонки и не менее 1,8 для капиллярной колонки;

- на хроматограмме раствора сравнения (b) отношение сигнал/шум (2.2.28)

для пика метилмиристата составляет не менее 5.

При использовании калибровочной смеси №2 хроматографическая система

считается пригодной, если выполняются следующие условия:

- на хроматограмме раствора сравнения (а) число теоретических тарелок (n)

(2.2.28), вычисленное для пика, соответствующего метилкапрату, составляет

не менее

1500 для набивной колонки и не менее 15 000 для капиллярной

колонки;

- на хроматограмме раствора сравнения (а) коэффициент разделения (R_s)

(2.2.28) пиков, соответствующих метилкаприлату и метилкапрату, составляет

не менее 2 для набивной колонки и не менее 4 для капиллярной колонки;

- на хроматограмме раствора сравнения (b) отношение сигнал/шум (2.2.28)

для пика метилкапроата составляет не менее 5.

ОЦЕНКА ХРОМАТОГРАММ

Следует избегать условий хроматографирования, которые могут дать

неразделенные пики (наличие компонентов с небольшим различием между

временами удерживания, например, линоленовая и арахидоновая кислоты.

Качественный анализ. Строят калибровочную кривую, используя

хроматограммы раствора сравнения (а) и данные Таблиц 2.4.22.

а) Для хроматограмм, полученных в изотермическом режиме, вычисляют

логарифмы приведенных времен удерживания как функцию эквивалента

числа атомов углерода в жирных кислотах. Калибровочная кривая

насыщенных кислот представляет собой прямую линию. Логарифмы

приведённых времен удерживания ненасыщенных кислот расположены

на этой линии как точки, соответствующие не целым значениям

«эквивалента длины цепи». Идентификацию компонентов жирных кислот

испытуемого масла проводят, рассчитываая логарифмы приведённых

времён удерживания пиков, полученных на хроматограмме испытуемого

раствора, и устанавливая по калибровочной кривой

«эквивалентны

длины цепи».

# Допускается идентификация жирных кислот испытуемого масла путем

сравнения времен удерживания пиков на хроматограмме испытуемого

раствора с временами удерживания пиков на хроматограмме раствора

сравнения или на стандартной хроматограмме, описанной в частной статье.

# Приведенное время удерживания

- разница между временем

удерживания пика вещества и временем удерживания несорбирующегося (в

условиях определения) вещества.

б) Для хроматограмм, полученных с использованием линейного градиента

температуры, определяют времена удерживания, находящиеся в

зависимости от числа атомов углерода в жирных кислотах, и

идентифицируют жирные кислоты, входящие в состав испытуемого масла,

путем сравнения с калибровочной кривой.

Количественный анализ. Обычно используют метод внутренней

нормализации; при этом сумму площадей всех пиков на хроматограмме,

кроме пиков, относящихся к растворителю, принимают за

100%.

Рекомендуется применение электронного интегратора. Содержание

каждого компонента вычисляют как отношение площади соответствующего

пика к сумме площадей всех пиков. Пики, площадь которых составляет

менее 0.05% от суммы площадей всех пиков, не учитывают, если нет других

указаний в частной статье.

В определенных случаях, т.е. при наличии жирных кислот с 12 или менее

атомами углерода, в частной статье должен быть указан поправочный

коэффициент для преобразования площадей пиков в проценты (м/м).

МЕТОД В

Этот метод неприменим для масел, содержащих глицериды жирных

кислот

эпокси-,

гидроксиэпокси-,

циклопропиловыми

циклопропениловыми группами и для масел с кислотным числом более

2,0.

Испытуемый раствор.

0,100 г испытуемого вещества помещают в

центрифужную пробирку с завинчивающейся крышкой, растворяют в 1 мл

гептана Р и 1 мл диметилкарбоната Р и энергично перемешивают при

умеренном нагревании (от 50°С до 60°С). К еще теплому раствору прибавляют

1 мл раствора 12 г/л натрия Р в метаноле безводном Р, приготовленного с

необходимыми предосторожностями, и энергично перемешивают в течение 5

мин. Прибавляют, 3 мл воды дистиллированной Р и энергично перемешивают в

течение

30 с. Центрифугируют в течение

15 мин с ускорением

1500 g.

Хроматографируют 1 мкл органического слоя.

Растворы сравнения и оценка хроматограмм. Если в частной статье нет

других указаний, поступают, как указано в Методе А.

Хроматографируют на газовом хроматографе с пламенно-ионизационным

детектором в следующих условиях:

- кварцевая колонка длиной 30 м, с внутренним диаметром 0,25 мм, покрытая

слоем макрогола 20 000 Р толщиной 0,25 мкм;

- газ-носитель - гелий для хроматографии Р;

- скорость газа-носителя - 0,9 мл/мин;

- деление потока - 1:100;

- температура колонки и скорость подъема температуры - по следующей

программе:

Время

Температура

Скорость подъема

Примечания

(мин)

(°С)

температуры

(^оС/мин)

Колонка

Изотермический режим

0-15

100

100→225

Линейный градиент

15-36

температуры

36-61

225

Изотермический режим

Инжектор

250

Детектор

250

МЕТОД С

Этот метод неприменим для масел, содержащих глицериды жирных

кислот с эпокси-, гидроперекисными, альдегидными, кетоновыми,

циклопропиловыми и циклопропениловыми группами и сопряженными

полиненасыщенными и ацетиленовыми компонентами из-за частичного

или полного разрушения этих групп.

Испытуемый раствор. 0,10 г испытуемого вещества помещают в коническую

колбу вместимостью 25 мл, растворяют в 2 мл раствора 20 г/л натрия гидроксида

Р в метаноле Р и кипятят с обратным холодильником в течение 30 мин. Затем

через холодильник прибавляют 2,0 мл раствора бора фторида в метаноле Р и

кипятят еще 30 мин, после чего прибавляют через холодильник 4,0 мл гептана Р

и кипятят 5 мин. Охлаждают, прибавляют 10,0 мл раствора натрия хлорида

насыщенного Р, встряхивают в течение 15 с и прибавляют такой объем

раствора натрия хлорида насыщенного Р, чтобы верхний слой поднялся к

горлу колбы. Отбирают

2,0 мл верхнего слоя, помещают в делительную

воронку, промывают тремя порциями воды Р, по 2 мл каждая, и высушивают

над натрия сульфатом безводным Р.

Растворы сравнения, хроматографическая методика и оценка

хроматограмм. Если в частной статье нет других указаний, поступают как

указано в методе А.

2.4.23. СТЕРИНЫ В ЖИРНЫХ МАСЛ АХ

ОТДЕЛЕНИЕ СТЕРИНОВОЙ ФРАКЦИИ

Получают неомыляемые вещества жирного масла и затем отделяют стериновую

фракцию методом тонкослойной хроматографии (2.2.27), используя пластинки,

покрытые тонким слоем силикагеля G P толщиной от 0,3 мм до 0,5 мм.

Испытуемый раствор

(а). В колбу вместимостью

150 мл, снабженную

обратным холодильником, помещают раствор

2 г/л бетулина Р в

метиленхлориде Р в таком объеме, чтобы количество бетулина

соответствовало около 10% содержания стеринов в образце, взятом для

определения (т.е. в случае оливкового масла прибавляют 500 мкл, в случае

других растительных масел 1500 мкл раствора бетулина). Выпаривают до

сухого остатка в токе азота Р. Если в частной статье определяется только

содержание индивидуальных стеринов в процентах к стериновой фракции,

раствор бетулина можно не прибавлять.

В колбу помещают 5,00 г испытуемого вещества. Прибавляют 50 мл 2 М

раствора калия гидроксида спиртового Р и нагревают на водяной бане в

течение

1 ч, часто перемешивая содержимое колбы круговыми

движениями. Охлаждают до температуры ниже

25^оС и количественно

переносят содержимое колбы в делительную воронку, содержащую 100 мл

воды Р. Осторожно встряхивают с тремя порциями эфира, свободного от

пероксидов Р, по

100 мл каждая. Эфирные слои собирают в другую

делительную воронку, содержащую

40 мл воды Р, слегка встряхивают в

течение нескольких минут, оставляют до расслоения и отбрасывают

водный слой. Эфирный слой встряхивают с несколькими порциями воды Р,

по 40 мл каждая, до тех пор, пока водный слой не перестанет давать

щелочную реакцию по фенолфталеину. Эфирный слой количественно

переносят в колбу, высушенную до постоянной массы, промывая

делительную воронку эфиром, свободным от пероксидов Р. Эфир

выпаривают с необходимыми предосторожностями, к остатку прибавляют 6

мл ацетона Р. Осторожно удаляют растворитель в токе азота Р.

Высушивают до постоянной массы при температуре от 100°С до

105°С,

охлаждают в эксикаторе и взвешивают. Остаток растворяют в минимальном

объеме метиленхлорида Р.

Испытуемый раствор (b). В колбу вместимостью

150 мл, снабженную

обратным холодильником, помещают

5,00 г рапсового масла Р и далее

поступают, как указано в приготовлении испытуемого раствора (а), начиная

со слов «Прибавляют 50 мл 2 М раствора калия гидроксида спиртового Р».

Испытуемый раствор (с). В колбу вместимостью

150 мл, снабженную

обратным холодильником, помещают 5,00 г подсолнечного масла Р и далее

поступают, как указано в приготовлении испытуемого раствора (а), начиная со

слов «Прибавляют 50 мл 2 М раствора калия гидроксида спиртового Р».

Раствор сравнения. 25 мг холестерина Р и 10 мг бетулина Р растворяют

в 1 мл метиленхлорида Р.

Для каждого испытуемого раствора используют отдельную пластинку. На

каждую из пластинок наносят полосой размером (20x3) мм 20 мкл раствора

сравнения и полосой размером (40x3) мм 400 мкл испытуемого раствора (а)

или испытуемого раствора (b), или испытуемого раствора (с), соответственно.

Пластинки помещают в камеру со смесью растворителей эфир Р - гексан

(35:65). Когда фронт растворителей пройдет

18 см от линии старта,

пластинки вынимают из камеры, высушивают в токе азота Р, опрыскивают

раствором 2 г/л дихлорфлуоресцеина Р в этаноле Р и просматривают в УФ-

свете при длине волны

254 нм. На хроматограмме раствора сравнения

обнаруживаются полосы, соответствующие холестерину и бетулину. На

хроматограммах испытуемых растворов обнаруживаются полосы с

близкими значениями R_f, соответствующие стеринам. С хроматограммы

каждого испытуемого раствора снимают область покрытия, на которой

расположены полосы стеринов, а также дополнительно зоны на 2-3 мм выше

и ниже видимых зон раствора сравнения и помещают раздельно в три колбы

вместимостью 50 мл каждая. В каждую колбу прибавляют по

15 мл

теплого метиленхлорида Р и встряхивают. Каждый раствор фильтруют

через стеклянный фильтр (40) или подходящую фильтровальную бумагу и

промывают каждый фильтр тремя порциями метиленхлорида Р, по 15 мл

каждая. Объединенные фильтраты и смывы помещают в три колбы,

высушенные до постоянной массы, выпаривают до сухого остатка в токе

азота Р и взвешивают.

ОПРЕДЕЛЕНИЕ СТЕРИНОВ

Определение стеринов проводят методом газовой хроматографии

(2.2.28).

Все операции проводят, защищая растворы и реактивы от влаги,

растворы готовят непосредственно перед применением.

Испытуемый раствор. К выделенным из испытуемого вещества методом

тонкослойной хроматографии стеринам прибавляют свежеприготовленную

смесь: хлортриметилсилан - гексаметилдисилазан Р - пиридин безводный

Р (1:3:9). (0,02 мл смеси на миллиграмм остатка). Осторожно встряхивают до

полного растворения остатка и оставляют в эксикаторе над фосфора (v)

оксидом Р на 30 мин. При необходимости центрифугируют и используют

надосадочную жидкость.

Раствор сравнения (а). К 9 частям стеринов, выделенных из рапсового масла

Р методом тонкослойной хроматографии, прибавляют 1 часть холестерина

Р. К полученной смеси прибавляют свежеприготовленную смесь:

хлортриметилсилан

- гексаметилдисилазан Р

- пиридин безводный Р

(1:3:9)

(0,02 мл смеси на миллиграмм смеси стеринов). Осторожно

встряхивают до полного растворения остатка и оставляют в эксикаторе над

фосфора (V) оксидом Р на 30 мин. При необходимости центрифугируют и

используют надосадочную жидкость.

Раствор сравнения (b). К стеринам, выделенным из подсолнечного масла Р

методом тонкослойной хроматографии, прибавляют свежеприготовленную

смесь: хлортриметилсилана Р

гексаметилдисилазан

пиридин

безводный Р

(1:3:9)

(0,02 мл смеси на миллиграмм смеси стеринов).

Осторожно встряхивают до полного растворения остатка и оставляют в

эксикаторе над фосфора

(V) оксидом Р на

30 мин. При необходимости

центрифугируют и используют надосадочную жидкость.

Хроматографируют на газовом хроматографе с пламенно-ионизационным

детектором в следующих условиях:

- кварцевая колонка длиной от 20 м до 30 м и внутренним диаметром от 0,25

мм до

0,32 мм, покрытая поли[метил(95)фенил(5)]силоксаном Р или

поли[метил(94)фенил(5)винил(1)]силоксаном Р с толщиной слоя 0,5 мкм,

- газ-носитель

- водород для хроматографии Р (линейная скорость от 30

см/с до 50 см/с) или гелий для хроматографии Р (линейная скорость от 20

см/с до

35 см/с). Линейную скорость измеряют следующим способом: в

условиях определения стеринов вводят от

1 мкл до

3 мкл метана или

пропана. Измеряют время в секундах, необходимое для прохождения газа

через колонку от момента введения до появления пика

(t_m).

Линейную скорость вычисляют по формуле L/t_m, где L - длина колонки в

сантиметрах;

- деление потока - 1:50 или 1:100;

- температура колонки - 260°С;

- температура инжектора

- 280°С;

- температура детектора - 290°С.

Хроматографируют в указанных условиях по 1 мкл каждого раствора.

На хроматограмме раствора сравнения

(а) обнаруживается четыре

основных

пика,

соответствующих

холестерину,

брассикастерину,

кампестерину и β-ситостерину; на хроматограмме раствора сравнения (b)

обнаруживается четыре основных пика, соответствующих кампестерину,

стигмастерину, β-ситостерину и Δ7-сигмастенолу. Времена удерживания

стеринов относительно β-ситостерина даны в Табл. 2.4.23.-1.

Пик внутреннего стандарта (бетулин) должен быть четко отделен от пиков

определяемых стеринов.

Идентифицируют пики, обнаруженные на хроматограмме испытуемого

раствора, и вычисляют процентное содержание каждого стерина в

стериновой фракции испытуемого вещества по формуле:

×100

где:

С ― процентное содержание стеарина;

А ― площадь пика, соответствующего определяемому стерину;

S ― сумма площадей всех пиков, соответствующих компонентам, указанным в

Табл. 2.4.23.-1.

Если это указано в частной статье, вычисляют количество каждого стерина

в миллиграммах, содержащееся в 100 г испытуемого вещества, по формуле:

A×m

S ×

100

AS ×m

где:

С ―количество стеарина в миллиграммах;

А ― площадь пика, соответствующего определяемому компоненту;

As ― площадь пика, соответствующего бетулину;

m ― масса навески образца испытуемого вещества, в граммах;

m_s ― масса прибавленного бетулина Р, в миллиграммах.

Таблица 2.4.23.-1

Времена удерживания стеринов по отношению к времени удерживания

β-ситостерина для двух различных колонок

Поли[метил(9 5 ) -

Поли[метил(94)-фенил(5)

фенил(5)]силоксан

вннил(1)]-силоксан

Холестерин

0.63

0.67

Брассикастерин

0.71

0.73

24-Метиленхолестерин

0.80

0.82

Кампестерин

0.81

0.83

Кампестанол

0.82

0.85

Стигмастерин

0.87

0.88

∆-Кампестерин

0.92

0.93

∆5,23-Стигмастадиенол

0.95

Клеростерин

0.96

β-Ситостерин

Ситостанол

1.02

∆5-Авенастерин

1.03

∆5,24-Стигмастадиенол

1.08

∆7-Стигмастенол (1)

1.12

∆7-Авенастерин

1.16

Бетулин

1.4

1.6

(1) ∆7-Стигмастенол в литературе может упоминаться как ∆7-Стигмастерин

2.4.24. ИДЕНТИФИКАЦИЯ ОСТАТОЧНЫХ РАСТВОРИТЕЛЕЙ И ИХ

КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ

Методики испытаний, приведенные в этой общей статье, могут быть

использованы:

1) для идентификации основной массы остаточных растворителей классов 1

и 2 в субстанциях, вспомогательных веществах и готовых лекарственных

средствах, если остаточные растворители неизвестны;

2) для определения предельного содержания растворителей классов 1 и 2,

если они присутствуют в субстанциях, вспомогательных веществах и

готовых лекарственных средствах;

3) для количественного определения растворителей класса

2, если их

предельное

содержание превышает

1000 ppm

(0,1%), или, если

необходимо, для количественного определения растворителей класса 3.

Остаточные растворители классов 1, 2 и 3 перечислены в статье 5.4.

«Остаточные количества органических растворителей».

Для приготовления испытуемых растворов ниже приведены три растворителя,

а также условия введения газовых проб при парофазной газовой хроматографии.

Хотя описаны две хроматографические системы, предпочтительнее использовать

систему А, система В обычно используется для идентификации. Выбор методики

приготовления испытуемых растворов зависит от растворимости анализируемого

вещества и, в первую очередь, от класса контролируемого остаточного

растворителя.

Формамид,

2-этоксиэтанол,

2-метоксиэтанол,

этиленгликоль,

N-

метилпирролидон и сульфолан следует определать другими валидированными

методиками.

Если приведенную ниже методику испытаний применяют для количественного

определения остаточных растворителей в конкретном веществе, она должна быть

валидирована.

МЕТОДИКА

Испытания проводят методом парофазной газовой хроматографии (2.2.28).

Пробоподготовка 1. Применяют при определении остаточных растворителей

в веществах, растворимых в воде.

Исходный раствор испытуемого образца (1). 0,250 г испытуемого образца

растворяют в воде Р и доводят объем раствора этим же растворителем до 25,0 мл.

Пробоподготовка 2. Применяют при определении остаточных растворителей

в веществах, нерастворимых в воде.

Исходный раствор испытуемого образца (2). 0,250 г испытуемого образца

растворяют в N,N-диметилформамиде Р (ДМФ) и доводят объем раствора этим же

растворителем до 25,0 мл.

Пробоподготовка 3. Применяют при контроле N,N-диметилацетамида и/или

N,N-диметилформамида, если известно или допускается, что один или оба

растворителя присутствуют в испытуемом образце.

Исходный раствор испытуемого образца (3). 0,250 г испытуемого образца

растворяют в 1,3-диметил-2-диметил-2-имидазолидоне Р (ДМИ) и доводят объем

раствора этим же растворителем до 25,0 мл.

Если ни одна из вышеприведенных методик пробоподготовки не подходит,

возможно использование другого растворителя и других подходящих условий

парофазного анализа.

Раствор остаточного растворителя

(а).

1,0 мл ФСО раствора

остаточного растворителя класса 1 доводят водой Р до 100,0 мл. 1,0 мл

полученного раствора доводят водой Р до 10,0 мл.

Раствор остаточных растворителей

(b). Соответствующие количества

остаточных растворителей класса 2 растворяют в диметилформамиде Р и доводят

объем водой Р до 100,0 мл. Объем полученного раствора доводят водой Р до

концентрации, соответствующей 1/20 значений пределов концентраций, указанных в

Табл.1 или Табл.2 статьи

5.4.

«Остаточные количества органических

растворителей».

Раствор остаточных растворителей

(с).

1,00 г

растворителя или

растворителей, присутствующих в испытуемом образце, растворяют в

диметилсульфоксиде Р или в воде Р и доводят объем раствора водой Р до

концентрации, соответствующей 1/20 значений пределов концентраций, указанных в

Табл.1 или Табл.2 статьи

5.4.

«Остаточные количества органических

растворителей».

ГОСУДАРСТВЕННАЯ ФАРМАКОПЕЯ РЕСПУБЛИКИ БЕЛАРУСЬ (ПЕРВОЕ ИЗДАНИЕ, 2006 год) - часть 11