содержание .. 22 23 24 25 ..
БИОЛОГИЧЕСКОЕ ОКИСЛЕНИЕ (ДИНАМИЧЕСКАЯ БИОХИМИЯ)
Роль высокоэнергетических фосфатов в биоэнергетике.
Биологическая роль АТР. Свободная энергия
гидролиза АТФ и других органических фосфатов
Для описания состояния химической системы используют понятие свободной энергии Гиббса, которое ввели Гиббс и Гельмгольц, объединив 1-й и 2-й законы термодинамики: ΔG = ΔЕ – TΔS. Определение «свободная» означает свободу использовать энергию для совершения полезной работы. Свободная энергия ΔG количественно характеризует потенциальную способность вещества претерпевать химические и физические превращения. Химическая реакция протекает лишь в том случае, если ∆G<0, т.е. в условиях, когда свободная энергия продуктов реакции меньше, чем свободная энергия исходных веществ. В химических процессах ΔG зависит не только от характера реакции, но и от тех условий, в которых она протекает.
Все содержащиеся в клетке фосфорилированные соединения разделяют на две группы: высокоэнергетические и низкоэнергетические (в зависимости от величины ΔG0ʹ их гидролиза). Высокоэнергетические фосфаты выполняют в клетке функцию аккумулирования биологической энергии и ее последующего использования для выполнения клеточных функций. К таким фосфатам относятся креатинфосфат (ΔG0ʹ= -14,80 ккал), фосфоенолпируват (ΔG0ʹ= -11,80 ккал), карбамоилфосфат. Изменение стандартной свободной энергии гидролиза АТР при t=37°С и рН 7,0 в присутствии избытка Mg2+ составляет -7,3 ккал/моль.
АТР в термодинамической шкале занимает промежуточное положение. Этим объясняется уникальность молекулы АТР и ее биологическая роль посредника при переносе фосфатных групп от высокоэнергетических фосфорилированных соединений к акцепторным молекулам. Запас АТР в клетке может обеспечить энергией работу клетки лишь на несколько секунд. Цикл АТР-ADP работает постоянно и производит такое количество АТР, которое было израсходовано клеткой. За сутки в организме человека образуется и распадается около 60 кг АТР. Энергия химических связей АТР используется в организме для совершения полезной работы. На всех этапах превращения энергии, в том числе и при гидролизе АТР, часть энергии выделяется в виде тепла.
Высвобождение большого количества энергии при гидролизе АТР объясняется структурными особенностями этой молекулы: 1) молекулы АТР при рН=7,0 имеют в среднем около 3,8 отрицательных заряда. Эти заряды располагаются близко друг от друга и потому между ними – сильное отталкивание. При гидролитическом отщеплении концевой фосфатной группы сила отталкивания уменьшается. Образовавшиеся продукты (анионы НРО42- и ADP3-) не стремятся к объединению, потому что их сближению препятствует отталкивание одноименных зарядов. 2) продукты гидролиза, НРО42- и ADP3- стабилизируются за счет сопряжения. Электроны, окружающие атомы фосфора и кислорода концевой фосфатной связи АТР, конкурируют за энергетически выгодные орбитали. Наличие такой конкуренции не позволяет всем электронам концевой пирофосфатной связи занять столь низкие энергетические уровни, какие они способны занять в отдаленных друг от друга ионах НРО42- и ADP3-.
Биологическое окисление. Ферменты, участвующие
в биологическом окислении
Биологическое окисление – совокупность реакций окисления субстратов в живых клетках, основная функция которых – энергетическое обеспечение метаболизма. Другими словами, биологическое окисление – процесс, в котором субстраты теряют протоны и электроны, а промежуточные переносчики – акцепторы и доноры протонов и электронов (NAD+, NADH, FAD, FADH2, FMN, FMNH2, цитохромы, убихинон и т.п.) – переносят их (при аэробном окислении) на кислород. При анаэробном окислении в качестве акцепторов выступают другие соединения. Таким образом, процесс окисления – это химические реакции переноса электронов от окисляемого вещества (донора) к восстанавливаемому (акцептору). В ходе реакций биологического окисления высокоэнергетические электроны, находящиеся в молекулах углеводов и других биомолекул, скатываются на уровень с наименьшей энергией и связываются с кислородом. Энергия, отдаваемая ими при этом, используется для образования макроэргических фосфатных связей. Поток электронов, движущихся по ступеням процесса биологического окисления, – слабый электрический ток.
В реакциях окисления перенос электронов происходит в соответствии с их «электронным сродством». Способность молекулы принимать электроны оценивается по величине окислительно-восстановительного потенциала (Е). Отрицательная величина Е означает низкое сродство, положительная – высокое сродство. В процессе окисления перенос электронов происходит по направлению от более отрицательного к более положительному потенциалу. При отрицательном значении Е электроны являются «высокоэнергетическими». При переходе к системе с более высоким значением Е они теряют часть своей энергии и способны произвести работу. Энергия, освобождающаяся при переносе электронов между двумя системами, прямо связана с разностью окислительно-восстановительных потенциалов между ними:
- ΔG = ΔE′0 n F,
где ΔG – изменения свободной энергии реакции окисления (кДж/мин), ΔE′0 – разность потенциалов между окислительно-восстановительными системами (в), n ‒ масса перенесенных электронов (моль), F – число Фарадея (96463 Дж/в).
Основной путь использования энергии, освобождающейся при биологическом окислении, ‒ накопление её в молекулах АТР и других макроэргических соединений. Химическая энергия, аккумулированная в макроэргических фосфатных связях при окислении питательных веществ, используется организмом для осуществления различных биологических функций.
Существует два типа окисления
Свободное окисление не сопряжено с фосфорилированием ADP и не сопровождается трансформацией энергии, выделяющейся при окислении, в энергию макроэргических связей. При свободном окислении энергия, высвобождающаяся при сопряженном с окислением распаде химических связей энергия переходит в тепловую и рассеивается. По типу свободного окисления идут все без исключения оксигеназные реакции, все окислительные реакции, ускоряемые пероксидазами или сопровождающиеся образованием H2O2, а также многие реакции, катализируемые оксидазами. Процессы свободного окисления сосредоточены в цитозоле, мембранах эндоплазматического ретикулума, лизосом, пероксисом и аппарата Гольджи, на внешних мембранах митохондрий и хлоропластов. Они идут также в ядерном аппарате клетки.
Окисление, сопряженное с фосфорилированием ADP, – тип биологического окисления, которое может осуществляться двумя способами. Если макроэргическая связь возникает в момент непосредственного окисления субстрата, а затем передается на фосфатный остаток, который, в свою очередь, используется для фосфорилирования ADP, такой вид биологического окисления называют окислением, сопряженным с фосфорилированием ADP на уровне субстрата (субстратным фосфорилированием). Если атомы водорода с коферментов дегидрогеназ, принимающих участие в окислении субстратов, передаются в оксидоредуктазную цепь, где сопряженно с переносом протонов и электронов на молекулярный кислород происходит активирование неорганического фосфата и при его посредстве фосфорилирование ADP с образованием АТР, то такое сопряжение окисления с синтезом АТР называется сопряжением на уровне электронтранспортной цепи (окислительным фосфорилированием). В этом случае сам окисляемый субстрат непосредственного участия в активировании неорганического фосфата не принимает.
Сопряжение окисления с фосфорилированием идет на внутренних мембранах митохондрий. Здесь осуществляется сопряжение окисления с фосфорилированием на уровне электронтранспортной цепи.
Реакции биологического окисления в клетках катализируют класс оксидоредуктаз – окислительно-восстановительных ферментов.
При биологическом окислении может осуществляться прямое взаимодействие молекулы биоорганического субстрата с кислородом:
Оксидаза
SH2 + ½ O2 → S + H2O
Ферменты, катализирующие этот тип окислительных реакций, называются оксидазами. На первом этапе биологического окисления образуются пероксиды. Молекула кислорода при этом переводится в активированное состояние за счет разрыва двойной связи в ней при посредстве «внутренней колебательной энергии» самого окисляемого вещества, обладающего кратной связью, и при участии ферментов – оксидаз. Возникшие пероксиды органических соединений, как и пероксид водорода, могут окислять другие вещества при каталитическом воздействии пероксидазы:
Пероксидаза
RH2 + H2 → R + 2H2O
Субстрат (или пероксид Субстрат (или Н2О+оксид
восстановленный органического окисленный органического
соединения) соединения)
Пероксид водорода может распадаться и иным путем, т.е. при участии фермента каталазы:
Каталаза
2 H2O2 → 2H2O + O2
Реакции, связанные с отщеплением водорода от молекулы биоорганического субстрата (дегидрогенирование):
Дегидрогеназа
SH2 + А → S + АH2
В ходе реакций, которые катализируются дегидрогеназами, водород, отщепляемый от субстрата, переходит на молекулу акцептора, переводя ее в восстановленное состояние. В последующем, через ряд промежуточных превращений, водород может передаваться на конечный акцептор – кислород. В зависимости от строения коферментов дегидрогеназы делятся на две группы, т.е. NAD-зависимые и FAD-зависимые:
а) в NAD-зависимых дегидрогеназах NAD непрочно связан с апоферметом, в восстановленной форме (NADH) он отделяется от апофермента и служит донором водорода для следующего акцептора;
б) в FAD-зависимых дегидрогеназах FAD ковалентно связан с апоферментом.
Диоксигеназы – ферменты, ускоряющие включение двух атомов молекулярного кислорода в окисляемый субстрат. Одной из наиболее важных диоксигеназных реакций является превращение β-каротина в витамин А.
Монооксигеназы – ферменты, ускоряющие включение одного атома молекулярного кислорода в окисляемый субстрат. Монооксигеназы принимают участие в окислении аминокислот (лизин-, аргинин-, триптофанмонооксигеназы, фенилаланин-, тирозингидроксилаза), оксикислот (салицилатгидроксилаза), полиизопреноидных соединений (сквален-эпоксидаза).
Решающую роль в функционировании монооксигеназ и диоксигеназ играют металлы, входящие в состав фермента.
Свободное окисление и его биологическая роль.
Цитохром Р-450
Если энергия окислительной реакции выделяется исключительно в виде тепла, то это свободное окисление. В энергетическом обеспечении функциональной активности клетки свободное окисление играет вспомогательную роль: оно служит для производства тепла и детоксикации вредных продуктов обмена веществ и ксенобиотиков.
Микросомальная система окисления
Микросомальная система окисления эндогенных органических соединений и ксенобиотиков представляет собой полиферментный комплекс цепей переноса электронов, зависимый от NADPH и NADH. Общим звеном системы является цитохром Р-450. В состав этого комплекса входят цитохром b5, NADPH-цитохром Р-450-редуктаза, NADH -цитохром b5-редуктаза:
NADРH и NADH являются донорами электронов для процессов гликозилирования, осуществляемых цитохромами b5 и Р-450. FP1 и FP2 являются переносчиками электронов, флавопротеинами. FP1 представляет собой NADРH-цитохром Р-450-редуктазу, а FP2 является NADРH-цитохром b5-редуктазой. С FP1 и FP2 возможен перенос электронов на цитохром c ‒ основной компонент дыхательной цепи митохондрий. В результате осуществляется межмембранный перенос электронов.
Наиболее важной реакцией микросомального окисления является гидроксилирование, сущность которого заключается во внедрении одного атома активированного кислорода в окисляемое вещество, в то время как другой его атом идет на образование воды. Таким образом, гидроксилирование протекает по монооксигеназному типу: SH ‒ окисляемый субстрат, NADРН ‒ донор электронов, SOH ‒ гидроксилированный продукт. Превращение атомов кислорода в молекулу воды и гидроксильную группу осуществляет цитохром Р-450. В некоторых клетках эта система включает еще дополнительный промежуточный переносчик электронов между редуктазой и цитохромом Р-450.
Цитохром Р-450 представляет собой комплекс белка с гемом (фосфолипидпротоген-сульфидпротеиновый комплекс). Этот гемопротеин получил свое название в связи с тем, что в восстановленной форме, присоединяя СО, он образует спектральный комплекс с максимумом поглощения при длине волны 450 нм. По высоте этого пика поглощения определяют его содержание в исследуемых образцах. В эндоплазматической сети гепатоцитов имеется много изоформ Р-450 с молекулярной массой 45-55 кДа. Цитохром Р-450 –гидрофобный белок, локализованный внутри мембраны. Простетическая группа (протопорфирин IC содержит Fe3+) помещается в гидрофобной полости, активном центре цитохрома Р-450. Чем больше цитохрома Р-450 находится в мембране, тем она в лучшем состоянии. Стареющие мембраны имеют цитохром Р-420 (неактивная форма). Цитохром Р-448 отличается от цитохрома Р-450 последовательностью аминокислот и формой взаимодействия гема с белком. Цитохром Р-448 является терминальной оксидазой в системе гидроксилаз, обеспечивающих метаболизм циклических углеводородов. Наличие многих изоформ позволяет монооксигеназным системам осуществлять биотрансформацию разных липотропных ксенобиотиков.
Цитохром b5 представляет собой гемопротеин с молекулярной массой 11-13 кДа, содержит 1 моль Fe3+ протопорфирина IХ на 1 моль апофермента. В окисленной форме цитохром b5 обладает максимумом поглощения при 412-426 нм. В отличие от Р-450, b5 локализован на поверхности эндоплазматического ретикулума. Функционально они тесно связаны и могут образовывать сложные гемопротеиновые комплексы, повышая скорость катализируемых реакций.
Механизм гидроксилирования
Существует несколько схем действия микросомальных оксигеназ. Наиболее распространенной является схема, в которой выделяют 5 стадий:
1) связывание окисленной формы цитохрома Р-450 с субстратом (Fe3+-S); 2) восстановление образовавшегося комплекса в NADPH-специфичной цепи переноса электронов (Fe2+-S); 3) образование тройного комплекса: восстановленная форма Р-450-S-О2; 4) активирование молекулярного кислорода в этом комплексе путем восстановления Fe2+-S- О2 –; 5) распад комплекса на окисленный цитохром Р-450, окисленный субстрат и гидроксил S-ОН.
содержание .. 22 23 24 25 ..